时间：2023-12-11 18:37:42
1、有助于消化
维生素B1的重要功能是调节体内糖代谢，也可促进胃肠蠕动，帮助消化，特别是碳水化合物的消化，增强食欲。女性补充维生素B1也可促进新陈代谢，促进消化(女性喝酸奶有助于消化)，还有有美肤的作用。
2、有助于缓解疲劳
维生素B1被称为精神性维生素，这是因为维生素B1对神经组织和精神状态有良好的影响，可改善精神状况，消除疲劳。
3、有助于神经系统的正常活动
促进神经系统的发育和正常的工作;促进大脑的生长和发育；保证心脏的正常跳动。
4、有助于减轻晕车、晕船症状
运动病又称晕动病，是晕车、晕船、晕机等的总称。它是指乘坐交通工具时，人体内耳前庭平衡感受器受到过度运动刺激，前庭器官产生过量生物电，影响神经中枢而出现的出冷汗、恶心、呕吐、头晕等症状群。
5、帮助宝宝治疗脚气
婴儿脚气病大多发生在2—5月的婴儿。主要是因为乳母缺乏维生素Bl，导致婴儿摄入不足所致。病情发展迅速且严重，如不治疗，可导致死亡。所以，一定要引起家长注意。
功能：
1、首先维生素b1可以帮助我们有效预防以及治疗维生素b1缺乏所引发的病症。人体内部如果出现缺乏维生素b1的状况，那么极有可能引发消化不良、周围神经炎以及脚气病等病症产生，在面对这些病症的时候我们可以通过补充维生素b1的方式来进行治疗，另外日常补充适量的维生素b1也可以帮助我们预防脚气病、消化不良以及周围神经炎的发生。
2、其次维生素b1可以应用于各种病症或者是身体各种异常状况的应对处理过程之中，比如女性妊娠期、女性哺乳期、烧伤、吸收不良综合症、小肠系统疾病、胃切除、长期慢性感染以及甲状腺功能亢进等等，通过补充维生素b1的方式可以有效保证机体功能的正常。
3、最后维生素b1还可以帮助我们促进神经系统的发育以及正常工作，帮助我们促进大脑更好地生长和发育，有效保证心脏跳动的稳定性。
【关键词】 高效液相色谱法；注射用甲硫氨酸维生素B1；甲硫氨酸；维生素B1
注射用甲硫氨酸维B1为甲硫氨酸和维生素B1的复合制剂。本品对于急慢性肝炎、肝硬化，尤其是对脂肪肝有特别的疗效；可用于肝内胆汁郁积以及乙醇、巴比妥类、磺胺类药物中毒时的辅助治疗；并可作为治疗神经炎和心肌炎的辅助药物。目前对其注射剂及冻干粉针剂的含量测定已有文献报道［1-3］。为有效控制产品质量，本文直接采用HPLC法测定其主要成分甲硫氨酸和维生素B1的含量，方法简便，结果准确。
1 仪器与试药
日本岛津高效液相色谱仪(SPD10Avp检测器，LC10Atvp泵)，工作站：AnaStar色谱处理系统，色谱柱：Kromasil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)。
甲硫氨酸对照品（批号为140684200401）、维生素B1对照品（批号为100390200502）由中国药品生物制品检定所提供；注射用甲硫氨酸维B1（本公司自制，批号为050318、050319、050320，规格：甲硫氨酸40 mg与维生素B1 4 mg）；乙腈为色谱纯，庚烷磺酸钠、磷酸钠、磷酸为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱: ODSC18色谱柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm)；流速: 1.0 mL/min；检测波长：210 nm；流动相：以缓冲液［取庚烷磺酸钠0.25 g，用磷酸钠溶液（取磷酸钠38 g，加水至1 000 mL使溶解，用磷酸调pH值至2.1）溶解并稀释成1 000 mL］乙腈（体积比94∶6）；进样量：20 μL；测定方法：外标法，积分峰面积。
2.2 对照品溶液的制备 精密称定甲硫氨酸对照品50 mg和维生素B1对照品5 mg，置同一50 mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
2.3 供试品溶液的制备 取本品细粉适量(约相当于甲硫氨酸50 mg)，精密称定，置50 mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
2.4 干扰试验 分别精密量取对照品溶液、供试品溶液、空白溶剂20 μL，注入液相色谱仪，结果空白溶剂无干扰峰，见图1。
2.5 线性关系 精密称定甲硫氨酸对照品约100 mg和维生素B1对照品约10 mg，置同一10 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，分别取上述溶液0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mL，分别置10 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，取上述溶液各20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，以对照品溶液质量浓度(ρ)为横坐标，测得峰面积值(A)为纵坐标，进行线性回归，得回归方程：甲硫氨酸A=5.597×106ρ+2.493×105，r=0.999 6;维生素B1 A=1.163×107ρ+2.147×104，r=0.999 8。
结果表明甲硫氨酸在0.60～1.40 mg/mL质量浓度范围内与峰面积呈良好线性关系；维生素B1在006~0.14 mg/mL质量浓度范围内与峰面积呈良好线性关系。
2.6 精密度试验和稳定性试验
取同一份对照品溶液，分别重复进样6次，每次进样20 μL，结果甲硫氨酸和维生素B1 RSD分别为0.89%和1.13%。
A.对照品; B.样品; C. 空白溶剂
1、维生素B1 2、甲硫氨酸
转贴于
图1 HPLC色谱图（略）
Fig.1 HPLC chromatograms
取同一份对照品溶液，在室温条件下放置6 h，分别在0、2、4、6 h测定1次，结果甲硫氨酸和维生素B1的RSD分别为0.89%和0.94%，表明本品溶液在6 h内稳定。
2.7 重复性试验
精密称取同一批样品6份(批号050318)，按“2.3”项下方法处理后，分别进样20 μL，测定含量。结果：甲硫氨酸和维生素B1的平均含量分别为100.08%和100.92%，RSD分别为132%和1.46%。
2.8 回收率试验
分别取甲硫氨酸对照品和维生素B1对照品适量（约相当于甲硫氨酸80 mg、100 mg、120 mg，维生素B18 mg、10 mg、12 mg）各3份，精密称定，按“2.2”项下方法操作，测定，并计算回收率，结果甲硫氨酸和维生素B1平均回收率分别为100.49%和99.95%，RSD值分别为 0.62%和048%。见表1和表2。
表1 甲硫氨酸回收率试验结果（略）
Tab.1 Results test of methionine
平均回收率=100.49%， RSD=0.62%
2.9 样品测定
分别精密量取3个批号的供试品溶液及对照品溶液各20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算供试品中甲硫氨酸（C5H11NO2S）和维生素B1（C12H17CIN4OS·HCl）的含量。测得3批样品的质量分数分别为：甲硫氨酸100.19%，100.38%和100.31%；维生素B1 10110%，101.17%和101.19%。
表2 维生素B1回收率试验结果（略）
Tab.2 Results test of vitamin B1
平均回收率=99.95%， RSD=0.48%
3 讨论
3.1 回收率试验供试品溶液的制备 由于本制剂中未添加辅料，因此在进行回收率试验时，直接分别称取甲硫氨酸和维生素B1对照品，按照“2.2”项下方法操作即可。
3.2 流动相的选择 在选择检测波长210 nm的情况下，曾比较乙腈25 mmol/L磷酸盐缓冲液(体积比60∶40，pH3.5）作为流动相［3］，测定结果无明显差异。考虑到乙腈毒性大，而文中所用流动相乙腈缓冲液（体积比6∶94），乙腈含量明显低于对比流动相，因此选择文中所用流动相较好。
【参考文献】
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1 临床资料
1．1 一般资料 本组男19例，女17例（其中母婴同病各2例），年龄3个月~56岁。已婚15例、未婚21例，病程2 h～2年；职业：工人5例，干部14例、中学生10例、孕妇5例，婴儿2例。排除其他疾病所致。
1．2 病因 ①饮食不当，摄入不足，长期米、精面，饮酒、减肥厌食，不均衡饮食，以油炸方便面等快餐食品为主，极少吃蔬菜豆制品、肉类。该类患者20例；②消耗过多，需要量增加。长期从事高温作业，剧烈运动、体力劳动患者5例。孕妇5例。婴儿生长发育迅速，乳母缺乏又单纯纯母乳喂养2例；③吸收不良，排泄增加：慢性腹泻消化不良患者2例；④其他：长期玩电脑游戏，不规律生活患者2例。
1．3 临床表现 干型25例，以周围神经炎为主，呈手套样、袜套样手足麻木，双下肢沉重感、麻刺、胀、蚁行感、烧灼感等感觉异常，腓肠肌疼痛，睡眠不安，焦虑、多疑、烦躁淡漠交替出现，甚至抑郁状态、耳鸣、腹胀、手癣、足癣等，程度因人而异，轻重不等，有的多种症状同时存在，有的比较单一；湿型4例，以水肿，浆液渗出为主，眼睑浮肿、双手发胀、腰带处、口周胫骨前凹陷性水肿，乏力、倦怠；暴发型1例，因饮酒后呕吐，稀便2 h急症入院，心悸气短，心率170次/min，律齐，肝大，肋下1．5 cm，心前区有收缩期杂音Ⅲ级，不粗糙，不传导，以右心衰竭为主，发展迅速，心电图示心动过速。P-R间期缩短，低电压、血压120/70 mm Hg，用强心药效果不好；混合型4例，同时有上述干湿性两种症状。婴儿2例，母亲为缺乏维生素B1者，纯母乳喂养已3个月，表现吐奶，呛奶频发，虚胖，绿色稀便次数多，腹胀、烦躁不安、夜啼，以傍晚为重，肢体柔软无力，易惊，排除维生素D缺乏，婴儿手足抽搦症等。
1．4 检验 硫胺素负荷实验：方法口服维生素B5 mg，留4 h尿测排出硫胺素的量，正常的在100 μg以上。所有患儿尿中的硫胺素80 μg 以下。
1．5 治疗 ①消除诱因，指导科学均衡合理饮食：多吃糙米、粗粮、麦麸、豆类、适当肉类；②用药方法：轻度症状者口服维生素B110 mg，3次/d，口服2个月；吸收不良及症状较重者肌内注射维生素B1100 mg，1次/d，连用10 d，以后口服维生素B110 mg，3次/d，服用2个月；暴发型用维生素B1100 mg加5%葡萄糖20 ml静脉缓慢推注，以后每4～6 h静脉推注维生素B150 mg加3%葡萄糖液20 ml 1次，直至心力衰竭症状消失，改肌内注射维生素B120 mg，3次/d，持续2个月。婴儿给予维生素B5 mg，2次/d，持续2个月并及时添加辅食，同时治疗哺乳期母亲。
2 结果
经上述治疗35例治愈，暴发型1例好转，劳累后心悸，乏力，但较前明显减轻。
3 讨论
维生素B1（硫胺）在体内转化为糖代谢中重要的辅酶-焦磷酸硫胺素，参与糖代谢、三羧酸循环。故维生素B1缺乏时，糖代谢受阻，使得神经肌肉等依靠糖代谢供应能量的组织（如脑、心肌等）发生变性、水肿，出现一系列临床症状和体征。
现代快节奏的生活，食品的精细化加工，多样化、众多的速食食品如方便面等使人们只图方便、快，却忽略了营养全面的问题；饮食过于精细、各种应酬饮酒不吃主食，另外常吃鱼及贝类，因其含硫胺素酶，可分解硫胺素亦可为致病因素；另外孕妇及乳母缺乏B1会使糖类物质的正常代谢出现障碍，其中有些有害物质代谢产物也会在母乳中出现与堆积，从而影响婴儿。医源性硫胺素缺乏可见于长期靠静脉营养而未补充者。
【中图分类号】G 478.2R 758.71R 969.4
【文章编号】1000-9817(2007)06-0574-01
【关键词】 斑秃；维生素B1；东莨菪碱；治疗结果
斑秃又称圆形脱发，俗称“鬼剃头”。笔者自2000年以来，采用维生素B1加东莨菪碱 在脱发区封闭治疗斑秃32例，疗效满意，现报道如下。
1临床资料
1.1 一般资料 32例病例中，男19例，女13例；年龄为18～43岁，平均26岁 。脱发1块者21例，2块者8例，3块以上者3例。脱发在枕部14例，头顶部9例，前发际处6例 ，颞部3例。脱发区界限明显，直径1～4 cm。病程10-20 d者11例，21-60 d者10例，2月至0 .5 a者7例，0.5 a以上者4例。
1.2 治疗方法 以碘酒、酒精局部常规消毒，用6号针头于脱发区呈一点或 多点进针，将维生素B1注射液50 mg和东莨菪碱注射液0.2 mg混匀后皮内注射，以药物浸 润至整个皮损区为宜，每周1次，3次为1个疗程。
1.3 疗程判断标准 痊愈为皮损区皮肤完全长出黑发；显效为皮损区皮肤表 面长出不均匀新的毛发及可见新的毛；无效为皮损区皮肤无新发长出。
2结果
32例病例中，痊愈23例，占72%。23例经2个疗程后恢复正常，治疗时间为14～42 d，平均25d。其中14例在注射治疗1疗程后头皮恢复正常，并生长出黄白色的细发，逐渐变粗变黑。 显效7例，占22%，总有效率为94%；无效2例，占6%。
3讨论
斑秃是一种突发性的斑状脱发，可发生于任何年龄，一般无自觉症状，常无意中发现，头发 呈片状脱落，脱发区呈圆形、椭圆形或不规则形，表面光滑，无炎症。祖国医学认为，本病 多因肝肾虚亏，阴血不足，发失所养则发脱落。现代医学认为外伤性神经炎等神经系统的障 碍为斑秃的病因，神经系统的紊乱被认为是一个重要因素。
采用维生素B1加东莨菪碱局部封闭治疗，其机理尚需进一步探讨，可能是维生素B1具有 滋养神经作用，东莨菪碱具有调节免疫功能，改善微血管的自律运动，促进血流加速，尤其 是通过生物膜的信息传递、转换、调节细胞的作用，从而有效改善局部微循环。两药协同应 用，使缺血、缺氧并处于抑制、频死状态的组织得以营养和新生，使脱发部分充血，达到较 强的刺激作用，有利于斑秃康复。此治疗方法操作简单，无其他不良反应，便于临床推广应 用。
[关键词] 漂白土；维生素B1；血必净注射液；百草枯中毒
[中图分类号] R595.4 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2013）03-0076-03
百草枯（Paraquat，PQ）又名对草快，其20%的溶液又名克无踪，是目前使用最广泛的除草剂之一[1]。人经口致死量1～3 g，属速效触杀性除草剂，对人畜有较强的毒性，口服中毒不但可刺激和腐蚀消化道，还损害重要脏器，特别是肺损害多不可逆，目前尚无特效治疗[2]。我院2006年1月～2011年12月间收治的32例口服百草枯中毒患者在常规治疗的情况下，早期应用大剂量维生素B1洗胃，后用30%漂白土混悬液反复导泻、维生素B1肌注拮抗吸收入体内毒物及静滴血必净注射液取得了较显著疗效，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
所有患者均为我院急诊2006年1月～2011年12月收住院的百草枯中毒患者，共64例，服用原因为误服或自杀口服。服药量5～150 mL，年龄15～63岁，平均（29.3±11.5）岁，其中男16例，女48例；服药后就诊时间0.5 h～2 d。按照随机的原则分为漂白土、大剂量维生素B1联合血必净注射液治疗组（A组，n = 32）及传统治疗对照组（B组，n = 32）。两组在年龄、性别、服药剂量、就诊时间、入院病情方面差异无统计学意义。见表1。
1.2 方法
两组患者在明确诊断后均常规清除毒物（洗胃、导泻、血液灌流、利尿等）、抗氧化剂治疗（大剂量VE、VC应用）、免疫抑制剂治疗（糖皮质激素、环磷酰胺等）、抗炎及保护重要脏器等综合治疗。A组立刻用维生素B1注射液3 g加入清水10 000 mL洗胃，后再用清水反复洗到洗出液为清水样物为止，再嘱患者反复口服30%漂白土（先正达生产）混悬液（即300 g漂白土加20%甘露醇液250 mL及冷开水450 mL）导泻，24 h后留置胃管（24 h后多数患者口腔、食管糜烂，并开始出现张口困难），并每2小时向胃管注入上述混悬液400 mL，直至大便呈土色，在此基础上每天肌注维生素B1 0.2 g日3次，血必净注射液（天津红日药业有限股份公司生产）50 mL加入100 mL生理盐水静滴，日2次，连用1周。
1.3 观察指标
①血氧饱和度；②血清生化指标；③C-反应蛋白（CRP）；④病情转归：比较两组病死率及14 d存活例数。
1.4 统计学方法
采用SPSS 12.0软件，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，具有动态分布的采用方差分析，组间采用t检验，计数资料采用χ2检验，P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 血氧饱和度
A组患者治疗后3 d和7 d血氧饱和度均明显高于B组（P < 0.05），提示用早期漂白土、大剂量维生素B1联合血必净注射液治疗后可以明显减少百草枯对肺脏的损害，可明显改善预后。见表2。
2.2 血清生化指标
A组患者肝肾功能损害明显低于B组（P < 0.05），显示早期用漂白土、大剂量维生素B1联合血必净注射液治疗可以明显减少百草枯对肝肾的损害。
2.3 C-反应蛋白
A组患者急性炎症反应明显低于B组（P < 0.05），显示早期用漂白土、大剂量维生素B1联合血必净注射液治疗可以明显减少急性炎症反应，可明显改善预后。
2.4 死亡率
治疗后14 d A组存活6例，病死率81.25%；B组存活2例，病死率93.75%；两组对比差异有统计学意义（χ2=18.4，P < 0.05）。
3 讨论
百草枯又名克芜踪、巴那刹，化学名为1，1′-二甲基-4，4′-联吡啶二氯化物，是一种人畜均有强毒性有机杂环类除草剂，目前在我国被广泛应用[3]。人服用百草枯后，百草枯在人体内经单电子传递还原，这种高活性氧自由基具有强氧化作用，对脂质、蛋白质、核酸都有很强的氧化作用，最终导致细胞与组织的损伤，机体出现一系列的病理变化[4]。该药主要由消化道吸收进入人体，对消化道、肝肾及呼吸道具有强烈腐蚀性，导致消化道出血、肝肾功能衰竭、肺出血和肺间质纤维化，最终发展为呼吸衰竭[5]，口服后吸收快，随血液分布到各个脏器，主要蓄积于肺组织，浓度比血液高10～90倍[6]。中毒后患者病情呈渐进性，首先表现为局部黏膜化学性灼伤的刺激症状，24 h后口腔黏膜及食道糜烂、溃疡；2～3 d渐出现胸闷、气促、呼吸困难等肺损伤表现，最终导致呼吸衰竭而死亡；2～5 d可发生急性肝、肾、心肌损害和消化道出血、中枢神经系统损伤等。百草枯毒性强，人经口致死量1～3 g，病死率高[2]，目前无特效解毒剂，一旦中毒病死率极高，如何寻找简便可行的治疗方法，成为医学界一个很迫切的问题。
漂白土是经过科学处理的矿物土，表面有很多不规则的孔穴，具有良好的吸附作用。百草枯在酸性、中性溶液中稳定，遇碱水解，遇土迅速失去活性[7]。根据我院收治的42例应用漂白土治疗的百草枯中毒患者的观察，第1～2日几乎所有患者的大便中均混有肉眼可见的大量青绿色百草枯，并且随着时间的推移粪便中的青绿色物也逐渐减少，但有的至第4、5日仍可看到，如未能及时洗胃或没有导泻的患者则情况更为严重。以上事实可以证明，口服的百草枯可在胃肠道中黏附，有一个缓慢吸收的过程，大部分由胃肠道排出，排出越慢吸收率就越高。因此尽快行胃肠道净化是十分必要的，如果赶在吸收量未达到致死量之前，抢救成功率会明显增加。因此，可以判定口服百草枯中毒48 h内仍有洗胃的必要，5 d内仍有导泻的必要。
维生素B1与百草枯的化学结构式同为季胺类型，与百草枯有拮抗作用。根据药物构效关系理论，推测维生素B1能拮抗组织对百草枯的主动摄取，且其本身的生化药理作用对中毒患者也有益处[8]。本组应用大剂量维生素B1洗胃，再用维生素B1肌注，取得较满意的效果。
血必净注射液是王今达教授根据中医理论研制的中成药，根据现代药理研究证实，血必净注射液具有较强的杀菌消炎作用，具有较强的清除氧自由基的作用，抗氧化作用强，能使超氧化物酶活性明显增加，能调节免疫及炎症反应，促进微循环，以起到保护各组织的内皮细胞[9，10]。血必净注射液主要成分为丹参、红花、川芎、当归、赤芍，临床上主要用于治疗脓毒症和多器官功能障碍综合征[9]。本组应用血必净注射液后，患者的C-反应蛋白明显降低和血氧饱和度显著高于对照组，提示血必净注射液对降低组织器官的炎症反应及减少损伤有明显作用。
总结本组治疗经验，我们认为，百草枯中毒机制复杂，对全身器官损害严重，病死率极高。本研究证实在常规治疗基础上，在早期洗胃时大剂量维生素B1充分洗胃，并肌注维生素B1以拮抗吸收入血的百草枯，给予漂白土吸附尽早排出未吸收的百草枯，并尽早应用血必净注射液对减少器官损伤、降低死亡率有非常积极的现实意义，值得在基层医院广泛推广应用。
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【关键词】 维生素B1，自组装，多巴胺，尿酸，电催化，化学修饰电极
Abstract Vitamin B1 selfassembled monolayer modified electrode (VB1Au/SAMs/CME) was prepared and its electrochemical behavior was studied by cyclic voltammetry. The results showed that a selfassembled monolayer (SAM) was formed on the surface of gold electrode. [Fe(CN)6]3－/4－redox couple was used as the electrochemical probe to study the electrochemical characteristics of SAM modified gold electrode and the results indicated that the existence of Vitamin B1 membrane on gold surface hindered the electron transfer. The electrochemical behaviors of dopamine(DA) and uric acid (UA) were investigated at VB1Au/SAMs/CME. The results showed that the electrochemical oxidation of DA and UA could be electrocatalyzed. There were linear relationships between the anodic peak current and the concentration of DA(8.0×10－6－4.0×10－4 mol／L) and UA (6.0×10－5－2.2×10－4mol／L) respectively in differential pulse voltammograms. This modified electrode was effective to detect DA and UA in simultaneous determination of these species in a mixture.
Keywords Vitamin B1， selfassembled monolayer， dopamine， uric acid， electrocatalysis， chemically modified electrode
1 引 言
多巴胺(DA)是存在于哺乳动物中枢神经系统中的一种重要的神经递质，它参与许多重要的生理活动，大脑中DA含量的改变可导致精神分裂症和帕金森氏等疾病[1]。尿酸(UA)是嘌呤代谢的最终产物之一，被视为人体“垃圾”。它在人体体液中含量的变化可充分反映人体内代谢、免疫等机能的状况[2]。DA和UA都是具有电活性的生物分子，共存于体液中；它们的过电位都相对较高，电极反应缓慢，而且氧化电位比较接近，对相关的含量测定产生相互干扰[3]。因此，建立一种选择性测定DA和UA的分析方法在临床医学中具有重要的现实意义。
有机硫化合物分子通过强SAu键的作用吸附到金电极表面，形成有序排列的单分子层自组装膜(SAMs)，稳定性良好，SAMs可实现电极的界面分子设计，增强电极的选择性，提高灵敏度，降低过电位，因而被广泛用于电化学和电分析化学领域[4]。维生素B1(VB1)又名硫胺素，是结构比较复杂的嘧啶衍生物，由一个嘧啶环和一个噻唑环组成。有关VB1自组装膜的报道较少。于秀娟等[5]研究了细胞色素C在VB1自组装膜修饰金电极上的电化学反应。有关化学修饰电极测定DA的方法已有报道[1，3，6]；测定UA的方法有光谱法[7]、高效液相色谱法[8]、电化学法[2，9，10]，而电化学法具有廉价、快速和便于实时监测等优点，故得到广泛应用。本研究采用VB1自组装膜修饰金电极研究电催化氧化DA和UA过程。
2 实验部分
2.1 仪器与试剂
LK2005电化学工作站(天津兰力科化学电子高技术有限公司)； KQ118型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)； AE200S型电子分析天平(瑞士梅特勒托利多公司)； pHS3C精密pH计(上海雷磁仪器厂)。采用三电极系统： 参比电极为饱和甘汞电极(SCE)，213型铂金电极为辅助电极，工作电极为VB1Au/SAMs/CME或金电极 (Φ＝5mm)。
多巴胺(DA，Sigma公司)； 维生素B1(VB1，天津广成化学试剂有限公司)； 尿酸(UA，国药集团化学试剂有限公司)，使用前未经处理。其它试剂均为分析纯。实验所用缓冲溶液（PBS）为KH2PO4Na2HPO4+NaCl。实验用水均为二次蒸馏水。
2.2 金电极的预处理
将金电极在涂有Al2O3悬浊液的抛光板上抛光至镜面，依次用无水乙醇和水充分超声清洗。然后置于1 mol/L H2SO4溶液中，在－0.2～1.6 V间进行循环伏安(CV)扫描直至稳定。取出电极用水清洗，即可得到表面清洁的裸金电极。
2.3 VB1自组装膜修饰金电极的制备
将处理好的金电极置于0.025 mol/L VB1中，在室温避光自组装24 h，取出电极用水清洗，除去电极表面物理吸附的VB1分子，即得到VB1自组装膜修饰金电极（VB1Au/SAMs/CME）。
2.4 实验方法
以VB1Au/SAMs/CME或裸金电极为工作电极，饱和甘汞电极(SCE)为参比电极，铂电极为辅助电极，0.1 mol/L PBS(pH 6.86)为支持电解质，将该修饰电极置于不同的PBS中，在一定电位范围内进行CV实验，记录相应的CV和DPV曲线。每次使用后，将该电极用水冲洗干净。所有实验均在室温下进行。
3 结果与讨论
3.1 裸金电极的表征
将预处理好的裸金电极置于1.0 mol/L H2SO4中，在－0.2～1.6 V的电位范围内，以100 mV/s的扫速进行CV扫描，得到图1所示稳定CV图，1.2 V附近出现的2个氧化峰是由于溶液中的OH吸附到金电极表面形成了金的氧化物Au(OH)x或AuO，而0.9 V附近的还原峰则对应于金氧化物的还原或溶出，这是金洁净度和表面是否存在氧化型污染物的依据。裸金电极上氧化还原峰的形状与文献[10]一致，说明金电极表面已经被清洗干净，可进一步用于生成自组装膜。
3.2 VB1Au/SAMs/CME在K3Fe(CN)6溶液中的电化学行为
将裸金电极和VB1Au/SAMs/CME置于0.01 mol/L K3Fe(CN)6和0.1 mol/L KCl混合溶液中，进行CV扫描，如图2。曲线1为裸金电极的CV图，ipa/ipc≈1，ΔEp=0.2 V，表现为可逆的氧化还原响应，这是[Fe(CN)6]3－/4－在金电极上的电化学行为； 曲线2为VB1Au/SAMs/CME在上述溶液中的电化学行为，氧化峰和还原峰电流都比裸金电极明显降低，而且氧化峰电位相对于裸金电极正移，而还原峰电位负移，ΔEp= 0.34 V，说明VB1已经在金电极上形成了一层自组装膜，抑制了Fe(CN)3－6向金电极表面的扩散，对K3Fe(CN)6电子转移起到了明显的阻碍作用[12]。
3.3 VB1Au/SAMs/CME在KCl溶液中的电化学行为
将裸金电极和VB1Au/SAMs/CME分别置于0.1mol/L KCl溶液中的进行CV扫描，扫描速率为100 mV/s，修饰电极的背景电流明显低于裸金电极的背景电流。这是由于S容易和金电极形成牢固的AuS键，通过分子的自组装形成有序的单分子层膜，由于该膜的形成降低了电极表面与溶液中的电子转移速率，因而使得膜电极的背景电流低于裸金电极的背景电流[13]。
3.4 多巴胺在VB1Au/SAMs/CME上的电化学行为
图3为DA在PBS(pH 6.86)中，－0.2～0.6 V范围内的CV图，扫速为100 mV/s。修饰电极上的DA氧化还原峰电位分别为Epa=0.275 V，Epc=0.025 V，与裸金电极相比，其氧化峰电位负移，还原峰电位正移。
修饰电极降低了DA氧化过程的过电位，且峰电流明显增加，改善了DA的可逆性，说明VB1加速了DA和电极间的电子传递速率，从而促进了DA的电催化氧化反应。实验还发现，在修饰电极上，峰电流随着溶液中DA浓度的增大而增加。
溶液pH对DA在VB1Au/SAMs/CME上的电化学行为也有较大影响。随着pH(4.0～8.0)升高，DA的峰电位负移，氧化峰电位与pH的关系符合以下线性方程: Epa（V）=0.7545－0.067pH，r=0.9939，斜率为－0.067 V/pH，根据能斯特公式，斜率应为2.3RT/nF，则x/n≈1，证明DA在VB1Au/SAMs/CME上的电子得失伴随着质子的参与，也是等质子电子的过程。为保持和人体内相同的环境，以下的实验介质均取pH=6.86。
考察了不同扫速下DA在VB1Au/SAMs/CME上的CV行为。DA的氧化峰电流随着扫速增大而增加。当扫速在10～140 mV/s范围变化时，DA在修饰电极上的氧化峰电流与v1/2呈良好的线性关系，其线性回归方程为：ip/μA=－0.38703+2.43086v1/2， r=0.9929，表明DA在修饰电极上的电化学过程受扩散速率控制。电极经长时间扫描后，其CV曲线无明显变化，表明电极性能较稳定，可用于DA的测定。
用DPV记录VB1Au/SAMs/CME对不同浓度DA氧化峰电流的CV曲线，随着DA浓度的增加，其氧化峰电流也随之增大，并呈线性关系，其线性回归方程为ip（μA）=3.10+0.129CDA，(浓度变化范围: 2.0×10－5～4.0×10－4 mol/L)，r=0.9915。检出限为8.0×10－7 mol/L。
3.5 尿酸在VB1Au/SAMs/CME上的电化学性质
图4是UA在PBS(pH 6.68)中于0.20～0.8 V范围内的CV图，扫速为100 mV/s。UA在修饰电极上Epa=0.50 V、 ip=48.5 μA； 在裸金电极上Epa=0.55 V、 ip=32.0 μA，其氧化峰电位负移50 mV，峰电流明显增加，并且氧化峰电流随UA浓度的增加而增大。说明VB1加速了UA和电极间的电子传递速率，从而促进了UA的电催化氧化反应。
以上实验结果表明，VB1Au/SAMs/CME具备优良的电催化性能。
随着pH的升高，UA在VB1Au/SAMs/CME上的氧化峰电位负移，峰电流也随之变化。实验表明，pH在4.0～8.0范围内，峰电位与pH呈线性关系，其线性回归方程为Epa（V）=0.8550－0.05350pH(r=0.9941)，表明UA的电氧化过程伴随着质子参与，由线性回归方程的斜率可知，每个UA的氧化有2个质子参与[10]。为保持和人体内相同的环境，本实验选择pH 6.86的PBS对UA进行测定。
随着扫描速率的增大，氧化峰电流也随之增大，UA在修饰电极上的氧化峰电流与v1/2呈良好的线性关系，对应线性方程为：ip（μA）=－5.47422+4.72784v1/2， r=0.9935，表明UA在电极表面的氧化过程受扩散控制。
用DPV法记录UA在VB1Au/SAMs/CME上的氧化峰电流随浓度变化曲线。实验表明，随着UA浓度的增大，其氧化峰电流也随之增大。UA在6.0×10－5～2.2×10－4 mol/L范围内， 其氧化峰电流与浓度呈良好的线性关系，线性回归方程为ip（μA）=0.01323+0.1163CDA， r=0.9928； 检出限为6.0×10－7 mol/L。
3.6 尿酸和多巴胺在VB1Au/SAMs/CME上的同时测定
DA与UA常共存于体液中，图5为2×10－4 mol/L DA和1.6×10－4 mol/L UA混合液于裸金电极和VB1Au/SAMs/CME上的CV曲线。虚线（1）显示在裸金电极上DA和UA氧化峰分离不明显。而在修饰电极上，DA和UA分别于0.275和0.50 V附近有两个独立的氧化峰，可以满足这两种物质进行同时测定。另外，在VB1Au/SAMs/CME上两峰电流也有所增加，这是由于电子转移过程的可逆性得到改善的结果，同时也表明该修饰电极对DA和UA具有显著的催化作用。
用DPV法记录DA和UA共存时，VB1Au/SAMs/CME上的氧化峰电流随浓度变化曲线(图6)。实验测得DA在1×10－5～1.8×10－4 mol/L内，ipa随其浓度变化呈较好的线性关系，r＝0.9917。另外，DPV法在PBS中，20倍浓度的UA不干扰1×10－5 mol/L DA的测定，从而实现DA和UA的同时测定。
参考文献
1 Lin L Q， Chen J H， Yao H， Chen Y Z， Zheng Y J， Lin X H. Bioelectrochemistry， 2008， 73(1)： 11～17
2 Sun DengMing(孙登明)， Hu WenNa(胡文娜)， Ma Wei(马 伟)， Su JinYan(苏金燕). Chinese J. Anal. Chem.(分析化学)， 2007， 35（12）: 1787～1790
3 Zare H R， Rajabzadeh N， Nasirizadeh N， Ardakani Mazloum M. J. Electroanal. Chem.， 2006， 589(1): 60～69
4 Li JingHong(李景虹)， Cheng GuangJin(程广金)， Dong ShaoJun(董绍俊). Chinese J. Anal. Chem.（分析化学）， 1996， 24(9)： 1093～1099
5 Yu XiuJuan(于秀娟)， Qu XiaoGang(曲晓刚)， Lu TianHong(陆天虹)， Dong ShaoJun(董绍俊). Chinese J. Anal. Chem.(分析化学)， 1994， 22（11）: 1111～1114
6 Lin XiangQin(林祥钦)， Kang GuangFeng(康广凤)， Chai Ying(柴 颖). Chinese J. Anal. Chem.(分析化学)， 2008， 36(2): 157～161
7 AbdelHay M H， Barary M H， Elsayed M A， Hassan E M. Anal. Lett.， 1991， 24(9): 1517～1530
8 Ferraris S P， Lew H， Elsayed N M. Anal. Biochem.， 1991， 195(1): 116～121
9 Codognoto L， Winter E， Jonas A R， Suffredini H B， Cabral M F， Machado S A S， Rath S. Paschoal. Talanta， 2007， 72(2)： 427～433
10 Liu ChuanYin(刘传银)， Long DeQing(龙德清)， Jiang LingYan(姜灵彦)． Chinese Journal of Analysis Laboratory(分析试验室)， 2005， 24(6): 13～16
11 Wang HuiYun(王慧云)，Yu ZhangYu(郁章玉)， Sun QinShu(孙勤枢)，Wang Ning(王 宁)， Qi LiYun(齐丽云)． Journal of Qufu Normal University(曲阜师范大学学报)， 2003， 29(1): 85～87
12 Sun Wei(孙 伟)， Shang ZhiMei(尚智美)， Hu Xuan(胡 轩). Journal of Qingdao University of Science and Technology(青岛科技大学学报)， 2005， 26(3)： 189～192
13 Zhang JunLing(张俊苓)， Zheng WenJie(郑文杰)， Yang Fang(杨 芳). Journal of Jinan University(Natural Science)(暨南大学学报)， 2004， 25(5): 596～599
【摘要】 用维生素B1(VB1)在金电极上进行自组装，制备了VB1自组装膜修饰金电极(VB1Au/SAMs/CME)。利用循环伏安法初步研究了此自组装单分子膜修饰电极的电化学行为。结果表明: VB1在金电极表面具有特性吸附。以[Fe(CN)6]3－/ 4－氧化还原电对为探针，考察了VB1自组装膜修饰金电极的电化学性质， VB1自组装膜的存在对[Fe(CN)6]3－/4－的电子转移具有明显的阻碍作用。研究了多巴胺(DA)和尿酸(UA)在此电极上的电化学行为。实验结果表明， DA和UA在此电极上均可被电催化氧化。差分脉冲伏安(DPV)氧化峰电流与DA浓度在2.0×10－5～4.0×104 mol/L范围内呈线性关系；测定UA的线性范围为6.0×10－5～2.2×10－4 mol/L，而且可实现这两种物质的同时测定。
【关键词】 维生素B1，自组装，多巴胺，尿酸，电催化，化学修饰电极
Electrocatalytic Properties of Dopamine and Uric Acid at
Vitamin B1 Selfassembled Monolayer Gold Electrode
YANG QiuXia， LI GuoBao， ZHANG Ying
(School of Chemistry and Chemical Engineering， University of Jinan， Jinan 250022)
Abstract Vitamin B1 selfassembled monolayer modified electrode (VB1Au/SAMs/CME) was prepared and its electrochemical behavior was studied by cyclic voltammetry. The results showed that a selfassembled monolayer (SAM) was formed on the surface of gold electrode. [Fe(CN)6]3－/4－redox couple was used as the electrochemical probe to study the electrochemical characteristics of SAM modified gold electrode and the results indicated that the existence of Vitamin B1 membrane on gold surface hindered the electron transfer. The electrochemical behaviors of dopamine(DA) and uric acid (UA) were investigated at VB1Au/SAMs/CME. The results showed that the electrochemical oxidation of DA and UA could be electrocatalyzed. There were linear relationships between the anodic peak current and the concentration of DA(8.0×10－6－4.0×10－4 mol／L) and UA (6.0×10－5－2.2×10－4mol／L) respectively in differential pulse voltammograms. This modified electrode was effective to detect DA and UA in simultaneous determination of these species in a mixture.
Keywords Vitamin B1， selfassembled monolayer， dopamine， uric acid， electrocatalysis， chemically modified electrode
1 引 言
多巴胺(DA)是存在于哺乳动物中枢神经系统中的一种重要的神经递质，它参与许多重要的生理活动，大脑中DA含量的改变可导致精神分裂症和帕金森氏等疾病[1]。尿酸(UA)是嘌呤代谢的最终产物之一，被视为人体“垃圾”。它在人体体液中含量的变化可充分反映人体内代谢、免疫等机能的状况[2]。DA和UA都是具有电活性的生物分子，共存于体液中；它们的过电位都相对较高，电极反应缓慢，而且氧化电位比较接近，对相关的含量测定产生相互干扰[3]。因此，建立一种选择性测定DA和UA的分析方法在临床医学中具有重要的现实意义。
有机硫化合物分子通过强SAu键的作用吸附到金电极表面，形成有序排列的单分子层自组装膜(SAMs)，稳定性良好，SAMs可实现电极的界面分子设计，增强电极的选择性，提高灵敏度，降低过电位，因而被广泛用于电化学和电分析化学领域[4]。维生素B1(VB1)又名硫胺素，是结构比较复杂的嘧啶衍生物，由一个嘧啶环和一个噻唑环组成。有关VB1自组装膜的报道较少。于秀娟等[5]研究了细胞色素C在VB1自组装膜修饰金电极上的电化学反应。有关化学修饰电极测定DA的方法已有报道[1，3，6]；测定UA的方法有光谱法[7]、高效液相色谱法[8]、电化学法[2，9，10]，而电化学法具有廉价、快速和便于实时监测等优点，故得到广泛应用。本研究采用VB1自组装膜修饰金电极研究电催化氧化DA和UA过程。
2 实验部分
2.1 仪器与试剂
LK2005电化学工作站(天津兰力科化学电子高技术有限公司)； KQ118型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)； AE200S型电子分析天平(瑞士梅特勒托利多公司)； pHS3C精密pH计(上海雷磁仪器厂)。采用三电极系统： 参比电极为饱和甘汞电极(SCE)，213型铂金电极为辅助电极，工作电极为VB1Au/SAMs/CME或金电极 (Φ＝5mm)。
多巴胺(DA，Sigma公司)； 维生素B1(VB1，天津广成化学试剂有限公司)； 尿酸(UA，国药集团化学试剂有限公司)，使用前未经处理。其它试剂均为分析纯。实验所用缓冲溶液（PBS）为KH2PO4Na2HPO4+NaCl。实验用水均为二次蒸馏水。
2.2 金电极的预处理
将金电极在涂有Al2O3悬浊液的抛光板上抛光至镜面，依次用无水乙醇和水充分超声清洗。然后置于1 mol/L H2SO4溶液中，在－0.2～1.6 V间进行循环伏安(CV)扫描直至稳定。取出电极用水清洗，即可得到表面清洁的裸金电极。
2.3 VB1自组装膜修饰金电极的制备
将处理好的金电极置于0.025 mol/L VB1中，在室温避光自组装24 h，取出电极用水清洗，除去电极表面物理吸附的VB1分子，即得到VB1自组装膜修饰金电极（VB1Au/SAMs/CME）。
2.4 实验方法
以VB1Au/SAMs/CME或裸金电极为工作电极，饱和甘汞电极(SCE)为参比电极，铂电极为辅助电极，0.1 mol/L PBS(pH 6.86)为支持电解质，将该修饰电极置于不同的PBS中，在一定电位范围内进行CV实验，记录相应的CV和DPV曲线。每次使用后，将该电极用水冲洗干净。所有实验均在室温下进行。
3 结果与讨论
3.1 裸金电极的表征
将预处理好的裸金电极置于1.0 mol/L H2SO4中，在－0.2～1.6 V的电位范围内，以100 mV/s的扫速进行CV扫描，得到图1所示稳定CV图，1.2 V附近出现的2个氧化峰是由于溶液中的OH吸附到金电极表面形成了金的氧化物Au(OH)x或AuO，而0.9 V附近的还原峰则对应于金氧化物的还原或溶出，这是金洁净度和表面是否存在氧化型污染物的依据。裸金电极上氧化还原峰的形状与文献[10]一致，说明金电极表面已经被清洗干净，可进一步用于生成自组装膜。
3.2 VB1Au/SAMs/CME在K3Fe(CN)6溶液中的电化学行为
将裸金电极和VB1Au/SAMs/CME置于0.01 mol/L K3Fe(CN)6和0.1 mol/L KCl混合溶液中，进行CV扫描，如图2。曲线1为裸金电极的CV图，ipa/ipc≈1，ΔEp=0.2 V，表现为可逆的氧化还原响应，这是[Fe(CN)6]3－/4－在金电极上的电化学行为； 曲线2为VB1Au/SAMs/CME在上述溶液中的电化学行为，氧化峰和还原峰电流都比裸金电极明显降低，而且氧化峰电位相对于裸金电极正移，而还原峰电位负移，ΔEp= 0.34 V，说明VB1已经在金电极上形成了一层自组装膜，抑制了Fe(CN)3－6向金电极表面的扩散，对K3Fe(CN)6电子转移起到了明显的阻碍作用[12]。
3.3 VB1Au/SAMs/CME在KCl溶液中的电化学行为
将裸金电极和VB1Au/SAMs/CME分别置于0.1mol/L KCl溶液中的进行CV扫描，扫描速率为100 mV/s，修饰电极的背景电流明显低于裸金电极的背景电流。这是由于S容易和金电极形成牢固的AuS键，通过分子的自组装形成有序的单分子层膜，由于该膜的形成降低了电极表面与溶液中的电子转移速率，因而使得膜电极的背景电流低于裸金电极的背景电流[13]。
3.4 多巴胺在VB1Au/SAMs/CME上的电化学行为
图3为DA在PBS(pH 6.86)中，－0.2～0.6 V范围内的CV图，扫速为100 mV/s。修饰电极上的DA氧化还原峰电位分别为Epa=0.275 V，Epc=0.025 V，与裸金电极相比，其氧化峰电位负移，还原峰电位正移。
修饰电极降低了DA氧化过程的过电位，且峰电流明显增加，改善了DA的可逆性，说明VB1加速了DA和电极间的电子传递速率，从而促进了DA的电催化氧化反应。实验还发现，在修饰电极上，峰电流随着溶液中DA浓度的增大而增加。
溶液pH对DA在VB1Au/SAMs/CME上的电化学行为也有较大影响。随着pH(4.0～8.0)升高，DA的峰电位负移，氧化峰电位与pH的关系符合以下线性方程: Epa（V）=0.7545－0.067pH，r=0.9939，斜率为－0.067 V/pH，根据能斯特公式，斜率应为2.3RT/nF，则x/n≈1，证明DA在VB1Au/SAMs/CME上的电子得失伴随着质子的参与，也是等质子电子的过程。为保持和人体内相同的环境，以下的实验介质均取pH=6.86。
考察了不同扫速下DA在VB1Au/SAMs/CME上的CV行为。DA的氧化峰电流随着扫速增大而增加。当扫速在10～140 mV/s范围变化时，DA在修饰电极上的氧化峰电流与v1/2呈良好的线性关系，其线性回归方程为：ip/μA=－0.38703+2.43086v1/2， r=0.9929，表明DA在修饰电极上的电化学过程受扩散速率控制。电极经长时间扫描后，其CV曲线无明显变化，表明电极性能较稳定，可用于DA的测定。
用DPV记录VB1Au/SAMs/CME对不同浓度DA氧化峰电流的CV曲线，随着DA浓度的增加，其氧化峰电流也随之增大，并呈线性关系，其线性回归方程为ip（μA）=3.10+0.129CDA，(浓度变化范围: 2.0×10－5～4.0×10－4 mol/L)，r=0.9915。检出限为8.0×10－7 mol/L。
3.5 尿酸在VB1Au/SAMs/CME上的电化学性质
图4是UA在PBS(pH 6.68)中于0.20～0.8 V范围内的CV图，扫速为100 mV/s。UA在修饰电极上Epa=0.50 V、 ip=48.5 μA； 在裸金电极上Epa=0.55 V、 ip=32.0 μA，其氧化峰电位负移50 mV，峰电流明显增加，并且氧化峰电流随UA浓度的增加而增大。说明VB1加速了UA和电极间的电子传递速率，从而促进了UA的电催化氧化反应。
以上实验结果表明，VB1Au/SAMs/CME具备优良的电催化性能。
随着pH的升高，UA在VB1Au/SAMs/CME上的氧化峰电位负移，峰电流也随之变化。实验表明，pH在4.0～8.0范围内，峰电位与pH呈线性关系，其线性回归方程为Epa（V）=0.8550－0.05350pH(r=0.9941)，表明UA的电氧化过程伴随着质子参与，由线性回归方程的斜率可知，每个UA的氧化有2个质子参与[10]。为保持和人体内相同的环境，本实验选择pH 6.86的PBS对UA进行测定。
随着扫描速率的增大，氧化峰电流也随之增大，UA在修饰电极上的氧化峰电流与v1/2呈良好的线性关系，对应线性方程为：ip（μA）=－5.47422+4.72784v1/2， r=0.9935，表明UA在电极表面的氧化过程受扩散控制。
用DPV法记录UA在VB1Au/SAMs/CME上的氧化峰电流随浓度变化曲线。实验表明，随着UA浓度的增大，其氧化峰电流也随之增大。UA在6.0×10－5～2.2×10－4 mol/L范围内， 其氧化峰电流与浓度呈良好的线性关系，线性回归方程为ip（μA）=0.01323+0.1163CDA， r=0.9928； 检出限为6.0×10－7 mol/L。
3.6 尿酸和多巴胺在VB1Au/SAMs/CME上的同时测定
DA与UA常共存于体液中，图5为2×10－4 mol/L DA和1.6×10－4 mol/L UA混合液于裸金电极和VB1Au/SAMs/CME上的CV曲线。虚线（1）显示在裸金电极上DA和UA氧化峰分离不明显。而在修饰电极上，DA和UA分别于0.275和0.50 V附近有两个独立的氧化峰，可以满足这两种物质进行同时测定。另外，在VB1Au/SAMs/CME上两峰电流也有所增加，这是由于电子转移过程的可逆性得到改善的结果，同时也表明该修饰电极对DA和UA具有显著的催化作用。
用DPV法记录DA和UA共存时，VB1Au/SAMs/CME上的氧化峰电流随浓度变化曲线(图6)。实验测得DA在1×10－5～1.8×10－4 mol/L内，ipa随其浓度变化呈较好的线性关系，r＝0.9917。另外，DPV法在PBS中，20倍浓度的UA不干扰1×10－5 mol/L DA的测定，从而实现DA和UA的同时测定。
参考文献
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4 Li JingHong(李景虹)， Cheng GuangJin(程广金)， Dong ShaoJun(董绍俊). Chinese J. Anal. Chem.（分析化学）， 1996， 24(9)： 1093～1099
5 Yu XiuJuan(于秀娟)， Qu XiaoGang(曲晓刚)， Lu TianHong(陆天虹)， Dong ShaoJun(董绍俊). Chinese J. Anal. Chem.(分析化学)， 1994， 22（11）: 1111～1114
6 Lin XiangQin(林祥钦)， Kang GuangFeng(康广凤)， Chai Ying(柴 颖). Chinese J. Anal. Chem.(分析化学)， 2008， 36(2): 157～161
7 AbdelHay M H， Barary M H， Elsayed M A， Hassan E M. Anal. Lett.， 1991， 24(9): 1517～1530
8 Ferraris S P， Lew H， Elsayed N M. Anal. Biochem.， 1991， 195(1): 116～121
9 Codognoto L， Winter E， Jonas A R， Suffredini H B， Cabral M F， Machado S A S， Rath S. Paschoal. Talanta， 2007， 72(2)： 427～433
10 Liu ChuanYin(刘传银)， Long DeQing(龙德清)， Jiang LingYan(姜灵彦)． Chinese Journal of Analysis Laboratory(分析试验室)， 2005， 24(6): 13～16
11 Wang HuiYun(王慧云)，Yu ZhangYu(郁章玉)， Sun QinShu(孙勤枢)，Wang Ning(王 宁)， Qi LiYun(齐丽云)． Journal of Qufu Normal University(曲阜师范大学学报)， 2003， 29(1): 85～87
12 Sun Wei(孙 伟)， Shang ZhiMei(尚智美)， Hu Xuan(胡 轩). Journal of Qingdao University of Science and Technology(青岛科技大学学报)， 2005， 26(3)： 189～192
关键词 小儿贝诺酯维B1颗粒 含量测定
仪器与试药
仪器：Agilent1100型高效液相色谱仪，可变波长紫外检测器， N2000色谱数据工作站，电子分析天平（型号BS224S）。
试药：维生素B1对照品，小儿贝诺酯维B1颗粒，乙睛为色谱纯试剂，水为纯净水，其他试剂均为分析纯。
方法与结果
色谱条件：反相高效液相色谱法，Agilent高效液相C18（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱。流动相：乙睛-混合溶液（取辛烷基磺酸钠0.32g、三乙胺2ml、冰醋酸10ml，加水至1000ml）（13:87）；流速：1.0ml/分；柱温：30℃；检测波长：254nm；进样量：20μl，按外标法计算含量；对照品维生素B1理论板数11914＞2000。
对照品溶液的制备：精密称取维生素B1对照品0.0031g置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液的制备：取本品装量差异项下的内容物混匀，研细，精密称样（约相当于维生素B1 3mg）至50ml量瓶中，加水适量，超声10分钟，用水稀释至刻度，摇匀，离心，精密量取上清液5.0ml置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
精密度试验：对同一份样品连续进6次，按上述色谱条件测定，计算相对标准偏差RSD，对照品的RSD为0.45%，供试品的RSD为0.93%。表明精密度良好。
改进法与标准法含量测定结果比较，见表1。由表1我们可发现离心后，峰面积明显增大，且超声与离心时间为10、20、30分钟对测定结果无显著影响。
讨 论
小儿贝诺酯维B1颗粒是由贝诺酯、维生素B1组成的复方制剂，是临床上常用的小儿解热消炎镇痛药。维生素B1含量测定采用的是高效液相色谱法。要求超声10分钟后稀释至刻度作为供试品溶液进行测定，在实际检测过程中，按《国家药品标准》测定方法［1］得到的维生素B1含量结果偏低，不能真实反映其含量。改进其方法，采用离心后取上清再测定维生素B1含量，结果与实际接近，可有效控制本品质量，保证用药安全有效。
在进行小儿贝诺酯维B1颗粒含量测定维生素B1时，采用离心10分钟后取上清液再测定维生素B1含量，更能反映药物的真实含量，能够消除由于原标准不完善所造成的误差。由于该方法具有可行性，建议将标准修订为离心10分钟后取上清液再稀释至刻度。
参考文献
[关键词] 妊娠剧烈呕吐；Wernicke脑病；药学监护；维生素B1
[中图分类号] R714.25 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2016）33-0143-04
[Abstract] Objective To investigate the process， methods and effect of pharmaceutical care by clinical pharmacists in the patients with hyperemesis gravidarum complicated with Wernicke's encephalopathy. Methods According to the process of pharmaceutical treatment of one patient with hyperemesis gravidarum complicated with Wernicke's encephalopathy who was treated with vitamin B1， the patient with strong positive skin test of vitamin B1 was given the care and guidance by clinical pharmacists on the basis of desensitization administration， dosage， course of administration and adverse reactions. At the same time， the patient was in nutritional deficiency due to hyperemesis gravidarum and long-time inability of eating. Parenteral nutrition was administered to the patient and the physician was assisted in formulating parenteral nutrition prescription. The damage of liver and kidney function of the patient and serum electrolyte levels were monitored. According to the patient's disease condition， the medication was integrated， and the entire process of treatment was given pharmaceutical care. Results Combined with the clinical symptoms and laboratory data of the patient， the clinical pharmacist raised suggestions and assisted the physician to formulate treatment plan on the basis of desensitization therapy and parenteral nutrition therapy for the patients with Wernicke's encephalopathy and strong positive skin test of vitamin B1， which showed the results of disappeared nystagmus， and improved ataxia and disturbance of consciousness. Conclusion Clinical pharmacists can provide assistance for the physicians in the safety and rationality of clinical drug use， and they are important members of the clinical treatment team.
[Key words] Hyperemesis gravidarum； Wernicke's encephalopathy； Pharmaceutical care； Vitamin B1
WernickeX病是一种因硫胺素（维生素B1）缺乏所致的中枢神经系统疾病。由Carl Wernicke于1881年最先报道，典型表现为意识障碍、眼球运动障碍和共济失调“三联征”[1]，多见于慢性酒精中毒者和消化道疾病如胰腺炎、胆囊炎、慢性腹泻等，也见于妊娠期剧烈呕吐、长期血透等患者[2]。非酒精性Wernicke脑病并不多见，且起病隐匿，症状不典型，极易误诊或漏诊，能得到正确诊断的只有5.7%[3]。本例患者由于妊娠剧烈呕吐，长期无法正常进食，造成维生素B1缺乏，但该患者维生素B1皮试阳性，无法正常补充。临床药师针对维生素B1皮试阳性如何给药、肠外营养处方制订等与医师进行讨论，提出药学监护点。
1 临床资料
患者，女性，38岁，1-0-1-1。末次月经2016年2月26日，停经30+ d查妊娠阳性，停经50+ d即出现恶心呕吐现象，伴进行性加剧，分别于2016年5月7日、5月17日、6月12日住院补液支持治疗。第1次住院治疗6 d症状好转，出院时已能正常进食。出院后3 d患者再次出现呕吐症状，不能进食，遂于5月17日再次住院，此次住院22 d，予补液、调节电解质平衡等治疗，效果差，仍不能进食，6月9日患者自动出院。出院后患者曾自行前往浙大附属第一医院就诊，无特殊处理。因仍不能进食，遂于6月12日再次来院要求输液治疗，入院后主要补充葡萄糖、维生素C、维生素B6、钾等。多次行维生素B1皮试均为阳性，故一直未进行补充，住院期间反复出现低血钾，补钾治疗后仍不能完全纠正。6月28日查肝功能：总胆红素（TB）16.2 μmol/L、直接胆红素（DB）6.7 μmol/L、总蛋白（TP）56.2 g/L、白蛋白（ALB）35.1 g/L、谷丙转氨酶（ALT）102 U/L、谷氨酰转肽酶（GGT）35 U/L、谷草转氨酶（AST）58 U/L、碱性磷酸酶（ALP）112 U/L。6月29日开始出现病情反复，不能进食、精神萎靡、嗜睡、四肢麻木、表情淡漠、呼之能对答。查血气分析：血钾2.90 mmol/L，血钠134.0 mmol/L，血氯107.0 mmol/L，乳酸3.2 mmol/L，pH值7.51，二氧化碳分压21.0 mmHg，氧分压118.0 mmHg，碳酸氢根浓度16.0 mmol/L，标准碳酸氢盐20.1 mmol/L，标准碱剩余-6.6 mmol/L。6月30日出现眼球震颤、频繁瞬目、尿失禁症状。神经系统查体：四肢肌力Ⅲ级以上，肌张力不亢，四肢腱反射（+），双侧对称，双侧巴氏征（-）；^颅磁共振未发现明显异常；多科会诊讨论考虑：Wernicke 脑病。
2治疗方法
患者共住院32 d，入院后主要治疗药物及其用法用量、用药疗程见表1。
3药学监护过程
6月30日，我们根据临床多学科会诊意见对该患者进行药学监护，协助医生制订给药方案并对原有给药方案进行调整。
3.1 维生素B1的用药监护
维生素B1是Wernicke脑病特异性治疗手段之一，早期、足量补充可明显缓解Wernicke脑病患者精神症状。但考虑该患者维生素B1皮试强阳性，因此药师建议采用脱敏治疗，同时向患者及家属进行充分告知，签署知情同意书，医师采纳药师的意见。在静脉滴注维生素B1前30 min，肌注马来酸氯苯那敏注射液10 mg、盐酸异丙嗪注射液50 mg。随后缓慢滴注维生素B1注射液500 mg+0.9%氯化钠注射液100 mL，q8h，密切观察患者用药反应并对患者进行心电监护。
3.1.1 维生素B1给药剂量调整 7月2日将维生素B1给药剂量调整为200 mg，静滴，q12h；7月12日患者神经症状基本消失，维生素B1由静脉滴注改为肌注，给药剂量改为100 mg，给药频率由q12h改为qd。
3.1.2 维生素B1不良反应的监测 为防止该患者发生过敏性休克，在给药的初期需严格控制滴速1 mL/min，密切观察患者用药反应，15 min后滴速可调整为2 mL/min。
3.2 肠外营养治疗方案制订
3.2.1 停用所有口服制剂 该患者由于剧烈呕吐、长时间无法正常饮食，钾离子、钠离子水平偏低，肠道功能混乱，常规的口服制剂无法吸收，因此建议医师停用所有口服制剂。
3.2.2 肠外营养处方的制订 考虑该患者肝功能异常：谷丙转氨酶（ALT）102 U/L（正常范围7～40 U/L）、谷氨酰转肽酶（GGT）35 U/L（正常范围7～45 U/L）、谷草转氨酶（AST）58 U/L（7～35 U/L）、碱性磷酸酶（ALP）112 U/L（正常范围7～35 U/L）、白蛋白（ALB）35.1 g/L（正常范围40～55 g/L）。因此，建议医师在制订肠外营养处方时，脂肪乳应选用中长链或结构脂肪乳，不宜选用长链脂肪乳；同时Wernicke脑病常伴镁缺乏[4]，可影响体内维生素B1的利用，因此肠外营养处方中应补充硫酸镁。根据患者的身高、体重、应急系数等，药师测算出患者的能量供应为1350 Kcal/d，其中碳水化合物占55%～60%、蛋白质占15%～20%、脂肪占20%～25%。为此拟订肠外营养处方：5%葡萄糖氯化钠注射液500 mL+50%葡萄糖注射液200 mL+复方氨基酸（18AA-Ⅱ）500 mL+20%丙氨酰谷氨酰胺注射液100 mL+20%结构脂肪乳注射液（C6～24）250 mL+多种微量元素注射液10 mL+10%氯化钾注射液30 mL+注射用脂溶性维生素Ⅱ/注射用水溶性维生素1盒+25%硫酸镁注射液5 mL+复合磷酸氢钾注射液2 mL+胰岛素6 IU。
3.3 血清电解质水平监测
该患者为高龄孕妇，卧床，脂肪肝、肝功能异常，进行呕吐加剧，长时间未正常进食，多种因素影响患者的血清电解质水平，因此我们在药学监护过程中需严密观察患者血清电解质水平，特别是血钾水平。患者入院后血清电解质水平变化见表2，正常情况下人体血清钾浓度为3.5～5.5 mmol/L。
患者入院时血清K+为3.59 mmol/L，接近正常值范围低限。随着患者妊娠呕吐加剧及使用复方甘草酸苷注射液后，住院期间反复出现低血钾，补钾治疗后仍不能完全纠正。6月30日临床药师会诊后建议：（1）复方甘草酸苷注射液易引发低血钾不良反应倾向[5]，应停止使用；（2）调整氯化钾注射液的给药方案，将氯化钾注射液加入到肠外营养中静脉滴注，促进吸收。医师采纳以上方案，7月3日监测电解质K+已达到3.90 mmol/L的正常值。
3.4 肝功能监护
患者由于妊娠剧烈呕吐、无法正常进食，入院时已有低蛋白血症、其他肝功能指标均异常。考虑到患者进行肠外营养支持可能会进一步加重肝脏损害，药师建议脂肪乳由长链型改为结构型，医师采纳以上方案。7月6日查肝功能：总蛋白（TP）58.0 g/L、白蛋白（ALB）32.0 g/L、谷丙转氨酶（ALT）59.0 U/L、谷草转氨酶30 U/L、胆碱酯酶2999 U/L、总胆红素13 μmol/L、结合胆红素3 μmol/L、非结合胆红素10 μmol/L，由于患者已逐渐恢复胃肠功能，因此建议医师停止肠外营养支持，改为半流质饮食，医师采纳以上方案。
3.5预后
经3周治疗，患者精神症状缓解，消化道功能基本恢复正常、无呕吐现象发生，但留有记忆力减退等后遗症，在整个药学监护期间，未发生药物不良反应，患者于7月14日出院。
4 讨论
Wernicke脑病是由于维生素B1缺乏引起的中枢神经系统疾病，人体维生素B1的储存量只有30～50 mg[6]。维生素B1主要从食物中摄取，其含量虽不高却是人体重要的有机化合物。若健康人摄取食物中不含维生素B1，18 d即可发生维生素B1缺乏[7]。本例患者由于妊娠剧烈呕吐已达1个多月，无法从饮食中得到足够维生素B1的补充，导致维生素B1缺乏。
维生素B1的活化形式是焦磷酸硫胺素（TPP），后者是α-酮酸氧化脱羧酶复合物的辅酶，参与线粒体内丙酮酸等的氧化脱羧反应。维生素B1缺乏时丙酮酸的氧化脱羧反应受阻，丙酮酸难以进入三羧酸循环，脑组织细胞内的有氧氧化减弱，同时丙酮酸和乳酸堆积，毒化中枢神经系统。Wernicke脑病在补充维生素B1时，应禁止使用葡萄糖和激素。因为大量补充葡萄糖可降低丙酮酸脱氢酶的活性，导致丙酮酸含量增加，继而诱发 Wernicke脑病[8]；激素可阻止丙酮酸氧化，使意识障碍加深。因此，维生素B1静滴时应采用0.9%氯化钠注射液作为溶媒，不能用葡萄糖注射液稀释。在给药前进行抗过敏治疗时也不能用地塞米松等激素类药物，必须使用其他药物如马来酸氯苯那敏、盐酸异丙嗪等作为抗过敏治疗药物。
Wernicke脑病因缺乏典型临床表现，而且无特异的检查方法，故导致诊断困难。目前主要诊断依据[7，9-11]：（1）有无引起缺乏维生素B1的原发因素；（2）有“三联征”中至少1项（意识或精神障碍、眼征或共济失调）；（3）血中丙酮酸浓度高于正常或维生素B1浓度低于正常，以及特征性MRI异常表现（体、丘脑、中脑导水管周围及顶盖部出现对称性T2WI、FLAIR和DWI高信号）；（4）维生素B1治疗后临床症状明显改善；（5）排除其他原因引起的中枢神经系统损害。
Wernicke脑病需与急性酒精中毒、急性精神障碍、脑桥中央髓鞘溶解症、小脑萎缩、硬膜下血肿、脑震荡、多发性硬化、肌病、横纹肌溶解症、大脑动脉梗死、病毒性脑炎、血管性痴呆等鉴别[12]。
Wernicke脑病诊断明确后，补充维生素B1的量一定要充足，否则仅能起到延缓 Wernicke脑病的发生，而无防治之效。维生素B1治疗Wernicke脑病的给药剂量目前尚未有统一标准。欧洲神经病学会联盟（ENFS）的推荐意见[13]：（1）在疑似或者确诊患者中应用；（2）推荐静脉给予维生素B1 200 mg，q8h；（3）在使用碳水化合物前予以补充治疗，继之正常饮食；（4）治疗应持续进行，直到临床症状、体征不再改善。秦高平等[7]认为：在开始治疗的12 h内静脉滴注维生素B1，安全剂量可达1 g，以确保有足够的吸收。但也有报道[14，15]：症状持续的典型病例初期给药剂量为500 mg，q8h，静脉注射，连续给药2 d，此后可每日静脉给药250 mg，直到患者可以口服维生素B1。使用维生素B1对Wernicke脑病尽管在几天或几个月内可能不会有明显的改善，但是共济失调及急性精神错乱状态可以得到显著的缓解。即使WernickeX病症状已经发生数月，用高剂量的维生素B1治疗有时仍可痊愈[16]。
临床药师作为临床治疗团队中的一员，在本例患者的药物治疗过程中积极参与药学监测，为患者合理、安全用药提供保障。
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