时间：2023-11-23 07:48:34
论文摘要：蒸发光散射检测器作为高效液相色谱仪的一个重要组成部分，具有高效、快速的特点，在石油样品的范围检测越来越广。本文主要针对蒸发光散射检测技术在石油化工领域中的应用进行了分析。
蒸发光散射检测器(ELSD)作为一种新型的通用型检测器,显示了极大的优越性,引起了广大科研工作者的注意,在一定程度上弥补了HPLC传统检测器上的不足。笔者综述了ELSD的仪器结构、工作原理以及影响检测的因素,重点介绍其在石油化工领域中的应用。
1.ELSD的结构和工作原理
1966年, Ford第一次介绍了ELSD,当时它被称为蒸发分析器( Evaporative Analyzer) ,后来又被称为质量检测器(Mass Detector) 、光散射检测器(Light Scaterring Detector) 等,属于一种具有较高灵敏度的通用检测器。它运用光散射技术使高分子量和低分子量化合物检测时通过质量敏感(Mass Responsive)模式来完成。对于各种已经商品化的ELSD主要由3部分组成:雾化器、加热漂移管和光散射池。
1.1雾化器
雾化器直接和分析柱的出口相连接,从柱后出来的流出物进入雾化器,在雾化器的末端与通入的气体(通常是氮气或氦气)充分混合成均匀的小液滴,可以通过调节气体的流速和洗脱液的流速来调节所产生液滴的大小。对于ELSD的稳定性在很大程度上取决于物化器气体流速,气体流速如果低于正常流速,会产生较大体积的液滴,大液滴会凝聚在加热漂移管上使响应值降低,大液滴中的流动相如果不能完全蒸发,则会形成尖峰;如果气体流速过高,则大液滴的数量会减少,响应值降低。
1.2加热漂移管
加热漂移管是ELSD的一个重要部件。柱流出物经过物化器后变成气溶胶,然后经过加热漂移管。加热漂移管的作用是使气溶胶中的易挥发组分挥发,流动相中的不易挥发组分经过加热漂移管进入散射池。加热漂移管的重要参数是在保证流动相完全蒸发的前提下设置尽量低的温度,特别是对于一些不稳定的化合物,更应该在低温下蒸发掉流动相。
1.3光散射池
在光散射池中,样品颗粒散射光源发出的光经过检测器产生电信号。在仪器的实际结构中,光源大多数使用多色光源,但是也有的厂家使用激光源。激光源除强度较大以外,有本征的缺憾,即对于一些具有生色基团的化合物,如果其吸收波长正好与激光光源波长相等,这种化合物就不会被检测到;另一方面,因散射光强度和(D/I)有关,所以多色光的散射强度使ELSD的响应因子更接近于一个真正的质量检测器,而单色光ELSD的响应因子会有较大的变化。经样品颗粒散射的光被光电倍增管或硅晶体光电二极管接收,其发展趋势是硅晶体光电二极管被逐步取代光电倍增管。
2．影响ELSD检测的因素
Charleswoortin最早研究了ELSD的检测原理,并为它以后的发展奠定了基础,后来经过大量的学者研究逐渐加以完善,并由Mengerink系统地总结如下:
2.1 物化器
散射光的强度与进入光散射池的颗粒大小有关, ,因此也就与在雾化过程中产生的液滴大小有关。可以用Nukiya-ma和Tanasawa的经验公式计算气溶胶中的液滴平均直径(D) 。液滴直径的大小与表面张力、流动相的密度和粘度以及气体的流速有关,可以通过调节这些参数来实现对液滴大小的调节,以提高检测器的灵敏度。
2.2 加热漂移管
加热漂移管的作用是把柱流出物中的流动相加热蒸发掉,只剩下化合物的颗粒。其温度的设定值应根据洗脱液的组成和性质而定,例如当流动相的沸点高时,应该升高操作温度,使其完全蒸发,同时要尽量保持较低的温度,以免使待分析的物质加热蒸发,而导致检测器的灵敏度降低。
2.3 光散射池
当一个颗粒与光作用时,共有3 种类型的散射过程发生: Rayleigh散射、Mie散射和折射- 反射。这3种过程均与颗粒的直径(D)及波长(λ)有关,当D /λ < 0. 1时产生Ray-leigh散射;当0. 1 < D /λ < 1 时,产生Mie散射; 当D /λ > 1时,产生折射- 反射。散射光的强度主要来自于两种不同的组合,即Rayleigh散射和Mie散射或Mie散射和折射- 反射。冯埃生和Trathnigg等人分别考察了影响ELSD检测的因素,发现加热漂移管的温度对基线水平和噪声的影响有明显的规律:温度较低时,流动相不能完全蒸发掉,基线水平较高;温度过高时可能会带来更大的噪声。
3. ELSD在石油化工领域中的应用
由于ELSD具有其它传统检测器无法比拟的优点,所以在碳水化合物、氨基酸、表面活性剂、医药、磷酯类化合物等检测方面发挥了巨大的作用,但是在石油化工领域,由于物质的复杂性而应用比较少。Padlo等人用HPLC - ELSD体系对VGO 馏分油和减压渣油进行模拟蒸馏,当加热漂移管的温度为40～80℃时流动相为正戊烷,工作温度为115～150℃时流动相为正己烷,结果发现当加热漂移管的温度为40℃时,对应油样中只有沸点大于315℃的组分才能被检测到,也就是说检测限为315℃,同样当加热漂移管的温度为80、115、150℃时,对应油样沸点检测限分别大于380、435、482℃,依据不同的ELSD操作温度可以得到油品的沸点分布结果。把实验结果与气相模拟蒸馏的结果进行对比,表明前者具有分析时间短、样品用量小、不使用色谱柱、使用范围广等优点。Padlo、朱继升等人采用Padlo建立了正相高效液相色谱法,用PAC (丙胺氰基柱) 、DNAP (二硝基苯胺丙烷) 、D IOL (正相硅胶键合二醇) 3个液相色谱柱串连,通过柱切换和梯度洗脱等手段将沸点大于315℃ (600°F)煤液化油分成饱和烃、芳烃(1～5环)和极性化合物3个组分,然后用二极管阵列检测器、蒸发光散射检测器分别对各个组分进行定性、定量分析,并把结果与气相模拟蒸馏法和重量法测得的结果进行对比,结果表明前者在准确性和重复性方面均与后者相媲美。Ashraf采用带有两个正相色谱柱(丙胺氰基柱PAC和二硝基苯胺丙烷DNAP)和两个检测器(二极管阵列检测器DVD和蒸发光散射检测器ELSD)的多维HPLC系统,成功运用于瓦斯油(VGO) 、重瓦斯油(HVGO) 、减压渣油(VR)以及深拔馏分(DD)中6种烃类组分的芳香烃含量、质量和支链分布的定量测定。这些烃类组分包括饱和烃(脂肪烃和环烷烃) , 1～4环芳香烃和极性化合物(高于4环的含N、O杂环化合物) 。这种独特的HPLC系统以正己烷、二氯甲烷和异丙醇为流动相,采用梯度洗脱有效分离烃类组分,对蒸发光散射检测器进行较宽范围质量校正以及独特的算法将二极管阵列检测器光谱转换成芳香烃含量。此方法在分离初、馏点高于340℃的样品时具有其它方法不具备的优点。Bartle对蒸发光散射检测器在凝胶渗透色谱(GPC)中的应用做了进一步的探索研究,研究发现在测定煤液化油提取物时,对于一些窄分布、高分子量(大于300)的馏分有较好的灵敏度和线性关系,从某种程度上可以称之为质量检测器,相对于传统GPC检测器而言具有巨大的优越性;但是对于低分子量的馏分,由于沸点低,在蒸发除去流动相的过程中,待分析物也一同被气化而损失掉,所以应用ELSD测定煤液化油提取物时只能测定高分子量(大300)馏分;Xie Rong等人采用配有蒸发光散射检测器、粘度计、示差折光检测器的GPC系统成功地分析了聚合物的螺旋半径、固有粘度、分子量及其分布; L i同样将ELSD应用在GPC上测定沥青和渣油的分子量和分子量分布,并把测定结果与用薄层色谱的测定结果进行对比。
4结束语
综上所述，通过调节气体流速和加热漂移管的温度,使响应值、信噪比达到最大。ELSD的响应不依赖于被检测物质的光学性质,只能检测沸点低于流动相的样品。ELSD检测灵敏度高,检测限达到ng级且检测过程中基线稳定,能进行梯度洗脱。
参考文献
【关键词】高效液相色谱；检测器；联用技术；药物分析
高效液相色谱法是现代药物分析与药物质量控制的一种重要手段。高效液相色谱法引用了气相色谱的理论，用高压输送流动相，用小粒径的填料填充色谱柱，使得柱效率远高于经典液相色谱。色谱柱后连有高灵敏度的检测器，色谱柱分离出的样品组分和含量被转化成可供检测的信号，可以对样品进行定性和定量分析以及各组分分离情况的判断，因此检测器的好坏直接决定药物分析的准确度和灵敏度。笔者查阅相关文献，对高效液相色谱仪与不同的检测器联用技术及其在药物分析与药物质量控制中的应用做一小结。
1 高效液相色谱仪联用二极管阵列检测器（HPLC-DAD）
二极管阵列检测器是一种光学多通道检测器，20世纪80年代开始使用。其原理是由光源发出的光线经过样品池，然后经分光技术，使所有波长的光在检测端同时被检测，得到时间、波长和光强度的三维谱图。在实际应用中，二极管阵列检测器可以同时检测出多个波长的色谱图，宽谱带检测和计算不同波长的相对吸光度，所以一次进样就能得到样品所有组分的信息，而每个组分都有全波段的光谱吸收图，从而对样品进行定性、定量分析。刘欣荣等[1]采用高效液相色谱仪联用二极管阵列检测器对羟基喜树碱人血清白蛋白纳米颗粒中的药物含量进行了测定，该方法准确可靠、简单易行。林佶等[2]采用高效液相色谱仪联用二极管阵列检测器对三七中人参皂苷Rb1的纯度进行了鉴定，选择203nm作为DAD检测人参皂苷Rb1的波长，用外标法准确测得三七样品中人参皂苷Rb1的平均含量。
2 高效液相色谱仪联用荧光检测器（HPLC-FLD）
荧光检测器也是高效液相色谱仪常用的一种检测器，用于检测能产生荧光的化合物。荧光检测器由激发光源、激发光单色器、样品池、发射光单色器、和检测发光强度的光电检测器组成。光源发出的光经过激发光单色器后得到所需波长的激发光，激发光通过样品池被荧光物质吸收，荧光物质受激发后发射荧光，经发射光单色器后由光电检测器接收。荧光检测器选择性高，只对荧光物质有响应；灵敏度也高，最低检出限可达10-12ug/ml，适用于多环芳烃及各种荧光物质的痕量分析，也可用于检测不发荧光但经化学反应后可发荧光的物质。孙丽等[3]采用反相高效液相色谱联用荧光检测器，准确测定了维压静片中利血平的含量。
3 高效液相色谱仪联用示差折光检测器（HPLC-RID）
示差检测器是根据折射原理设计的一种检测器，可连续检测样品流路与参比流路间液体折光指数差值的检测器。光从一种介质进入到另一种介质中时，由于两种物质的折射率不同就会产生折射。当样品组分和流动相的折光率不同时，就可被检测。示差折光检测器是一种浓度型检测器，在一定浓度范围内检测器的响应信号与溶质浓度成正比，但其不适用于梯度脱洗。戴立波等[4]用高效液相色谱仪联用示差折光检测器建立了一种简单、快速、准确分析肌醇的方法，能及时得到生产各个环节中肌醇质量分数的指标，可用于监测肌醇生成的整个过程。
4 高效液相色谱仪联用蒸发光散射检测器（HPLC-ELSD）
20世纪80年代澳大利亚的Union Carbide研究实验室的科学家研制开发第一台ELSD，并将其转化为商品。此后，通过不断改进，ELSD的操作性能得到不断提高。现在ELSD越来越多的作为通用型检测器用于高效液相色谱、超临界色谱和逆流色谱中。蒸发光散射检测器的检测原理是先将柱洗脱液雾化形成气溶胶，然后在加热的漂移管中将溶剂蒸发，最后剩下的不挥发性溶质颗粒在光散射检测池中得到检测。蒸发光散射检测器不需要样品含有发色基团即可检测挥发性低于流动相的任何样品。蒸发光散射检测器灵敏度比示差折光检测器高，对温度变化不敏感，基线稳定，适合与梯度洗脱液相色谱联用。碳水化合物、类脂、脂肪酸和氨基酸、药物以及聚合物等的检测均可使用蒸发光散射检测器。段瑞等[5]用高效液相色谱仪联用蒸发光散射检测器测定了红药片中三七皂苷R1及人参皂苷Rg1、Re、Rb1的含量。该方法准确，分离效果好，无干扰，可用于红药片的质量控制。刘亚风等[6]采用超高效亲水作用色谱联用蒸发光散射检测器测定了牛磺酸颗粒和牛磺酸滴眼液中牛磺酸的含量。该方法省去了复杂的样品预处理，缩短了牛磺酸的分析时间，提高了检测工作效率。
5 高效液相色谱仪联用电化学检测器（HPLC-ECD）
电化学检测器可检测具有电活性的物质，包括极谱检测器、库仑检测器、安培检测器和电导检测器等。前三种统称为伏安检测器，用于具有氧化还原性质化合物的检测，电导检测器主要用于离子检测。电化学检测器灵敏度很高，尤其适用于痕量组分分析，缺点是干扰比较多，电极寿命有限，对温度和流速的变化比较敏感。李海英等[7]将高效液相色谱仪―电化学检测器联用技术用于硫酸阿奇霉素含量的测定及有关物质概况的分析，取得了可喜的结果。
6 高效液相色谱仪联用质谱检测器（HPLC-MSD）
质谱检测器是一种灵敏度高、选择性好、指纹性强的通用型检测器，可用于微量或痕量分析。高效液相色谱仪联用质谱检测器是一种高度自动化、常规化的分析手段，发挥了色谱分离的长处和质谱定性结构分析的优势，在中药色谱指纹图谱研究中发挥着重要作用。蔡爽等[8]将超高效液相色谱联用质谱用于2型糖尿病大鼠粪样代谢物指纹图谱研究，该研究有利于糖尿病的早期诊断。徐娟等[9]用超高效液相色谱联用质谱法同时检测口腔卫生用品中的5种硝基咪唑类药物。该方法操作简单，结果稳定可靠，为监管部门规范管理口腔卫生用品市场提供了依据。
总之，高效液相色谱法吸取了经典液相色谱和气相色谱两种方法的优点，其检测器也从固定单波长紫外检测器发展到可变波长紫外一可见光检测器、示差析光检测器、荧光检测器、蒸发光散射检测器、电化学检测器、质谱检测器以及核磁共振检测器等。随着科学技术的进步，检测器会向着灵敏度高、选择性好、适应范围广等方向发展，检测器的联用技术也逐步完善。将不同的检测器联用可以在一次进样分析中得到更多、更准确的信息，这使高效液相色谱检测技术在药物分析与药物质量控制方面具有不可替代的作用。
【参考文献】
[1]刘欣荣，王龙，卢懿，等.HPLC法测定羟基喜树碱人血清白蛋白纳米颗粒中的药物含量[J].沈阳药科大学学报，2009，1：48.
[2]林佶，段志敏，万玉萍，等.HPLC二极管阵列检测器定量分析三七中人参皂苷Rb1[J].实用预防医学，2004，12（6）：1273.
[3]孙丽，游强，闻京伟.中国药品标准[S].2003，4（6）.
[4]戴立波，李建桥，胡清.采用带示差折光检测器的高效液相色谱法检测肌醇[J].化学工业与工程技术，2006，8.
[5]段瑞，沙冬旭，杨文.沈阳药科大学学报，2008，5：376.
[6]刘亚风，祝伟霞，袁萍，等.超高效亲水作用色谱―蒸发光散射检测牛磺酸颗粒和牛磺酸滴眼液中牛磺酸的含量[J].分析试验室，2011，3：101.
[7]李海英，陈悦.西北药学杂志，2003，8：147.
[8]蔡爽，霍韬光，徐静华，等.超高效液相色谱―质谱用于2型糖尿病大鼠粪样代谢物指纹图谱研究[J].沈阳药科大学学报，2009，10：811.
关键词：高效液相色谱法 食品检测 技术
高效液相色谱又称为高压液相色谱、高速液相色谱、高分离度液相色谱，是 20 世纪 60 年代末 70 年代初发展起来的一种新型分离分析技术，随着不断地改进与发展，目前已成为应用极为广泛的化学分离分析的重要手段。它是在经典液相色谱基础上，引入了气相色谱的理论，在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，因而具备速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化的特点。本文简要介绍高效液相色谱法的分析原理和特点，高效液相色谱仪基本知识，重点评述其在食品分析中的应用。
1高效液相色谱法的原理和特点
1.1 高效液相色谱法的原理
高效液相色谱法是在经典液相色谱法基础上发展起来的。高效液相色谱法是在高压条件下溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换的过程，它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同引起排阻作用的差别使不同溶质得以分离。
1.2 高效液相色谱法的特点
从分离原理上讲，高效液相色谱法和经典液相色谱法没有本质的差别，但由于它采用了新型高压输液泵、高灵敏度检测器和高效微粒固定相，因而使经典的液相色谱法焕发出新的活力。经过近 30 年的发展，现在高效液相色谱法在分析速度、分离效能、检测灵敏度和操作自动化方面，都达到了与气相色谱相媲美的程度，并保持了经典液相色谱法对样品适用范围广、可供选择的流动相种类多和便于制备色谱的优点。其优点概括如下：采用高效微粒固定相使色谱分离效能大大提高；采用新型高压输液泵使分离时间大大缩短；采用高灵敏度的检测器使仪器的检测灵敏度大大提高；由于HPLC 具有高柱效、流动相可以控制和改善分离过程的特点，故其选择性高。
2高效液相色谱仪
高效液相色谱仪的主要部件有：贮液罐、高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪和数据处理装置。其基本的工作流程是：贮液罐中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。
2.1 贮液罐
贮液罐的材料应耐腐蚀，可为玻璃、不锈钢、氟塑料或特种塑料聚醚醚酮（PEEK）。容积为 0.5 L～2.0 L。对凝胶色谱仪、制备型仪器，其容积应大些。贮液罐放置位置要高于泵体，以便保持一定的输液静压差。在使用过程中贮液罐应密闭，以防溶剂蒸发引起流动相组成的变化，还可防止空气中氧气和二氧化碳重新溶解于已脱气的流动相中。
2.2 高压输液泵
高压输液泵可分为恒压泵和恒流泵。对高压输液泵的要求是。
1）泵体材料能耐化学腐蚀。通常采用普通耐酸不锈钢或优质耐酸不锈钢。
2）能在高压下连续工作。通常要求耐压 40 MPa/cm～50 MPa/cm 能在 8 h～24 h 连续工作。
3）输出流量范围宽。
4）输出流量稳定，重复性高。
2.3 色谱柱
色谱柱包括柱管和固定相两部分。柱壁材料有玻璃、不锈钢、铝、铜及内壁光滑的聚合材料的其它金属一般色谱柱长 5 cm～30 cm，内径为 4 mm～5 mm，凝胶色谱柱内径为 3 mm～12 mm，制备色谱柱内径较大，可达 25 mm 以上。
2.4 检测器
高效液相色谱法中的检测器主要用来监视经色谱柱分离后的组分随淋洗液流出的浓度变化，所描记的图形用于进行定性和定量分析，因此，要求检测器应该具有灵敏度高、重复性好、线性范围宽、适应范围广、对流量和温度的变化不敏感等特性。常用的检测器为紫外吸收检测器（UVD）、折光指数检测器（RID）、电导检测器（ECD）和荧光检测器（FD）。在高效液相色谱中没有通用检测器，实际应用时按需要和结合各种检测器的特点进行选择应用。
3高效液相色谱法在食品分析中的应用
3.1 在乳品分析中的应用
乳及乳制品的质量评价比较复杂，包括营养成分及含量、乳品的风味物质、药物残留和毒物种类及含量等多个方面，HPLC 法可用于乳品中多种质量控制指标的检测。乳及乳制品中富含糖、脂、蛋白质、维生素等营养以及强化的营养物质，HPLC 技术几乎可用于各种营养成分的检测。在低分子糖类的测定中多采用氨基键合柱、糖类分析专用柱进行分离，也有研究者利用低成本非特定色谱柱测定低分子糖，如 Mullin 等通过树脂柱分离，脉冲安培检测器测定奶酪和牛奶中的乳糖等并取得良好的效果。在氨基酸的检测中，利用 6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸脂柱前衍生氨基酸，Nova-Pak C18色谱柱，乙腈磷酸缓冲液梯度洗脱，紫外 UV248 nm 检测，可同时准确测定奶粉中Lys、Met、Asp 等 16 种氨基酸。用 YWG C18色谱柱，甲醇乙酸胺为流动相，紫外检测器 230 nm 处测定了 AD 奶和活性乳中的山梨酸和苯甲酸含量。用 ORH-801 型有机酸专用色谱柱，以浓度0.01 mol/L 硫酸溶液为流动相，用折光检测器对全脂奶粉和酸奶中乳酸与乳酸盐进行测定，最低检测限可达1.53×10-10kg。随着分离柱的不断改进，高灵敏度的检测仪器的引入，HPLC 法已深入到乳品分析中的方方面面。相信在不久的将来 HPLC 法将在乳品工业中发挥更大的作用。
3.2 在肉制品分析中的应用
HPLC 法可以测定肉制品中的兽药残留、致癌物质含量等。腌腊肉品中常添加硝酸盐或亚硝酸盐作发色剂用，由于添加量过大或自身的还原作用在肉品中生成 N-亚硝胺。N-亚硝胺可诱发肝癌、结肠癌等。过去采用气相色谱法测定食物中挥发性亚硝胺，其中仅色谱测定一步便需耗时 1 h 之多，而采用高效液相色谱法则只需要 13 min 左右。应用岛津 LC-4A 高效液相色谱仪测定肉类抗生素残留量，对色谱分离实验参数，包括色谱柱、流动相配比、缓冲液、pH、温度、检测波长等，进行了系统的试验，使肉类食品中的四环素、土霉素和金霉素能够同时分离和定量测定。建立了用 HLPC 测定鸡肝中土霉素、金霉素、四环素方法。通过研究建立了同时检测动物肌肉组织中环丙沙星、单诺沙星、恩诺沙星、沙拉沙星、二氟沙星、恶喹酸、氟甲喹 7种喹诺酮类药物的 HPLC-FLD 检测方法。
4结语
关键词：水质检测：高效液相色谱技术；应用技术
作为一种常见的水质检测技术，高效液相色谱技术是通过固相萃取的方式使溶质的分析能力大大提升，因此被广泛的应用于环境、医疗等领域。此外，高效液相色谱技术还能对具有高沸点的有机物质及高分子物质进行有效的分析，因此具有较高的研究价值，本文将立足于高效液相色谱技术的应用特点，深入研究水质检测中对高效液相色谱技术的应用。
一、高效液相色谱技术概述
高效液相色谱技术是一种高效的分离分析技术，诞生于上世纪七十年代中期，并在医疗、环境等领域都得到了广泛的实践，该技术立足于经典液相色谱的技术和理论，并辅以计算机、色谱柱，普遍应用于有机化学、食品卫生、环境科学等领域，并表现出了良好的应用效果。高效液相色谱技术主要依靠高效液相色谱仪，该仪器的造价低廉、自动化程高，主要由高压输液系统、色谱分离系统、检测器、数据处理系统组成。其中高压输液系统负责输送流动相，色谱分离系统负责将样品进行分析检测，数据处理系统是将分析检测的结果输出，并在数据处理器的帮助下完成记录与处理工作。因此高效液相色谱技术对高效液相色谱仪具有较高的依赖性，为了实现快速的分离分析，应该不断的对色谱柱进行完善。此外，还应该根据不同的工作需求，调整高效液相色谱仪的高压送流系统、色谱分离系统，使高效液相色谱技术在水质检测工作中发挥出更大的作用。[1]
二、高效液相色谱技术的应用特点
（一）局限性
虽然高效液相色谱技术能够对具有高沸点的有机物质及高分子的有机物质进行有效的分析，然而高效液相色谱技术本身还具有一定的局限性。首先，样品的易挥发性限制了高效液相色谱技术的使用范围，在离子型化合物、热不稳定化合物的分离分析工作中，高效液相色谱技术并不适用。此外，有些样品不容易汽化，沸点低，溶质在固定相的传质速度慢，使用高效液相色谱技术达不到理想的效果。相关工作人员在进行分离分析实验之前，需要根据实验对象的生物活性、费电、热稳定等性能有一个清楚的认识，并判断使用高效液相色谱技术能否获得理想的应用效果。[2]
（二）分离效能高
分离效能高是高效液相色谱技术重要的应用特点，在应用过程中，该技术能够根据溶质中的分析原理与气象色谱法差距，对热稳定性不足、高分子物质进行有效的分析及分类。尤其使用液相色谱的填充柱的分离效能，远远高于气象谱柱的理论大板数。这是因为液相色谱的的分离更加简单，相比气象色谱，液相色谱的分配很少受到分离过程中额外要素的影响，因此液相色谱分离的收益要远远大于气象色谱的分离收益。
（三）选择性好
选择性如何，是评价一个分离分析技术的重要指标。液相色谱中有很多种柱填料，能够控制和改善分离过程中选择性，因此高效液相色谱技术具有较好的选择性，流动相在分离的过程中会对载气产生影响，不仅可以分析不同类型的有机化合物，还能分析在性质上极为相似的同分异构体。
（四）分析速度快
高效液相色谱技术的分析速度很快，这得益于高压输液泵的使用，不仅加快流动相的流速，还能增加固定相的效能，使分析时间大大缩短，尤其在低温的环境下，会在一定程度上增加分子间的色谱分离效率，从而加快分子的分析速度，通常来说完成一个无机化合物的分析仅需要几分钟。[3]
三、高效液相色谱技术在水质检测中的应用
（一）水中农药的分离分析
农药的使用，能够在一定程度上增加农作物的产量，但也会造成环境污染。近年来，许多农民为了增加农作物的产量，过量的使用农药，不仅没有提高农作物的产量，还造成了大范围的水污染，影响到周边的生态环境。过度的使用农药，无法有效的提高产量，因为过量的农药不会被农作物吸收，反而会残留在农作物上，或者被水溶解。因此相关研究人员非常重视农药成分的分析，这不仅关乎农作物的产量，还与环境问题息息相关。相比传统的分离分析技术，高效液相色谱技术具有较为突出的科学性，能够准确的反映出水中的农药残留物的含量、毒性，因此被广泛的应用于水中农药的检测工作。此外，使用高效液相色谱技术，还能在不挥发物质、热稳定不足的物质以及强极性物质检测中发挥出巨大的作用，可以通过固相萃取、液相色谱不连用在线技术检测出富集土壤、蔬菜以及水中的残留农药，可以说高效液相色谱技术在水中农药的检测中具有广阔的应用空间，相关工作人员可以对高效液相色谱技术进行深入研究，应用于杀虫剂的分离、萃取，农药的检测等商用价值较高的领域。[4]
（二）水中酚类化合物分析
大部分工厂在生产的过程中都会排放污染物，尤其在石油化工、造纸厂、炼焦等领域，在生产过程中产生的污水量很大，远远超过了周边生态环境可承受的容量，这在一定程度上造成了水源的污染。酚类化合物是工厂生产过程中排放的主要污染物，如果用常规的水处理技术，很难获得满意的净水效果。如果长时间引用这种含有酚类化合物的水源，会影响人的身体健康，甚至会出现头昏脑涨、出疹等症状。然而路酚类化合物也拥有巨大的利用价值，可以提取用于消毒剂、杀虫剂的制作。在水中酚类化合物的分析中，使用气象色谱、液相色谱法以及分光度法都能取得良好的效果，这就需要相关工作人员针对水中的卤代酚物质分布情况、含量进行研究，并使用合适的分离分析方法进行操作。相比液相色谱法，气相色谱法的适用性较弱。
（三）水中多环芳烃的检测分析
水中多环芳烃化合物具有挥发性，在不完全燃烧条件下，有的有机物质会产生碳氢化合物，这种致癌物质在全球范围分布十分广泛，因此加强水中多环芳烃物质的检测，也是水质检测的重要部分，水中多环芳烃化合物的特点在于不容易汽化，可以借助荧光检测仪等仪器，减少光信号的干扰，从而使反相色谱柱的分离效果更加理想。[5]
结语：
综上所述，高效液相色谱技术是一种灵敏度高、准确性高、分离高效能的分析方法，适用于水中农药，多环芳烃物质、酚类化合物检测当中，并发挥着重要的作用。
参考文献：
[1]刘红卫.高效液相色谱技术在食品安全分析中的应用研究及《出口中国苦水玫瑰油检验规程》标准的制订[D].兰州大学，2007.
[2]王传蓉.高效液相色谱技术在饲料分析中的应用[A].中国奶业协会.第四届中国奶业大论文集[C].中国奶业协会：，2013：2.
[3]张婉，王覃，周悦，杜宁，李津廷，张经华.超高效液相色谱技术在食品安全检测中的应用[J].现代科学仪器，2010，04：119-122.
[4]赵欣欣，韩齐，孙方达.甘油二酯的制备及高效液相色谱技术在其检测中的应用研究进展[A].食品装备产业技术创新战略联盟.2015年国际包装与食品工程、农产品加工学术年会论文集[C].食品装备产业技术创新战略联盟：，2015：6.
关键词：食品添加剂检测高效液相色谱
1、前言
食品添加剂是食品工业的基础原料，对食品的生产工艺和安全卫生都起到至关重要的作用。食品添加剂的种类越来越多，但滥用以及超标准使用添加剂，都会给消费者的健康带来损害.食品添加剂的检测，目的在于监督和保证正确合理地使用食品添加剂。近年来高效液相色谱法也已经被广泛研究，但均只能对该单一物质进行检测， 如果沿用国家标准逐一分开检测，不但增加了工作成本，而且降低了工作效率，在对食品质量的监督抽查中，会涉及传统防腐剂山梨酸、苯甲酸，甜味剂糖精钠等食品添加剂的检测.本方法探讨了用高效液相色谱法同时对山梨酸、苯甲酸、脱氢乙酸、糖精钠的检测。
2、材料和方法
2.1主要仪器及试剂
液相色谱仪：UV98-1型，配有紫外检测器,北京温分分析仪器；紫外可见分光光度计：TU-1810，北京谱析通用仪表有限责任公司.离心机：5000r/min，TGL-16A高速离心机，长沙平凡仪器仪表有限公司；甲醇：色谱纯，国药集团；乙酸铵：优级纯，国药集团；氢氧化钠：优级纯，科密欧试剂；
标准储备液(1 g/L):分别准确称取0.100 0 g山梨酸、苯甲酸、糖精钠、脱氢乙酸,用10mL的氢氧化钠溶液(0.5 mol/L)溶解,用超纯水定容至100 mL
2.2样品处理
2.2.1固态食品
称取粉碎5.00 g(准确到0.1 mg)试样于25 mL的比色管中,加10 mL超纯水,超声提取10min,再振荡提取10 min后用超纯水定容至25 mL,摇匀. 蛋白质含量高的样品在定容前需加人少量亚铁氰化钾及乙酸锌以沉淀蛋白质，以4000 r/min速度离心5min,上清液经水系0.45μm微孔滤膜过滤后,供高效液相色谱测定。
2.2.2液态食品
直接称取10.00 g(准确到0.1 mg )液态食品于25 mL的比色管中(如含有二氧化碳微温搅拌除去,如果含有乙醇,水浴加热除去),超声提取10 min,再振荡提取10 min后用超纯水定容至25 mL摇匀，蛋白质含量高的样品在定容前需加人少量亚铁氰化钾及乙酸锌以沉淀蛋白质. 以4000 r/min速度离心5min,上清液经水系0.45μm微孔滤膜过滤后,供高效液相色谱测定。
2.3色谱条件
色谱柱：Kmmasil-C18-5um 4.6×250mm；流动相：甲醇-乙酸铵溶液（0.02mol/L）（8:92）；流速：0.8mL/min；检测器：紫外检 测器，230nm波长， 进样量：100uL。
2.4工作曲线
将标准储备液用超纯水配制成质量浓度为10、20、50、100、200、300 mg/L的混合标准溶液系列,经水系0.45μm微孔滤膜过滤后,按照仪器工作条件,用高效液相色谱仪测定。
2.5样品测定
处理后的样液经水系0.45μm微孔滤膜过滤后,按照仪器工作条件,在高效液相色谱仪上测定,以保留时间定性,峰面积定量。
2.6结果计算
样品中添加剂含量（g/kg）=C×V×10-3/m式中，C为样品中添加剂浓度（mg/L），V为样液体积（mL），m为样品质量（g）。
3、结果
3.1流动相的选择
采用甲醇和0.02 mol/L乙酸铵水溶液做流动相,流速为0.8 mL/min。实验结果表明在甲醇-乙酸铵溶液体系里,随着甲醇在流动相中比例增大(从5%逐渐升至20%),4种添加剂保留时间都缩短。当甲醇在流动相中比例为8%时, 4种添加剂分离效果最好；改变流动相流速发现:随着流速降低,4种添加剂保留时间都增长,当流速为0.8 mL/min时,保留时间和灵敏度都比较理想。
3.2样品的提取
防腐剂、甜味剂都是以易溶于水的盐的形式添加到食品当中的，所以本方法采用直接用水溶解样品并加以提取，减少使用有机物方法提取的污染，重要是保证了样品的高回收率。
3.3波长的选择
用紫外检测器.通过波长扫描发现,波长在214 nm附近,只有糖精钠有良好的吸收,波长在293 nm附近,只有脱氢乙酸有良好的吸收,而波长为230 nm时山梨酸、苯甲酸、糖精钠、脱氢乙酸均有良好的吸收。
3.4标准曲线及线性范围
按照工作曲线方法配制6种不同浓度的混合标准溶液,按照色谱条件测定，结果表明:山梨酸、苯甲酸、脱氢乙酸、糖精钠的浓度在0~300 mg/L内呈线性关系,线性回归方程及相关系数见表1.
3.6重现性及回收率
分别称取同一样品（n=3），按本方法加标测定，加标回收率为98.1%~102.7%结果见表2.
3.7检出限
检出限为最低相应值（3倍仪器噪音水平）与绝对相应值的比值.经实验证明，该法检测山梨酸、苯甲酸、脱氢乙酸，糖精钠的检出限分别为0.15、0.25、0.55、0.22 mg/kg.
4、结论
食品添加剂的检测，一直以来都是各个检测机构重要的检测项目.在优化高效液相色谱条件下,成功地对山梨酸、苯甲酸、糖精钠、脱氢乙酸食品添加剂进行同时检测，实验结果表明, 高效液相色谱方法快速、简便、灵敏度高、重现性好，值得在食品日常监督检测中推广应用。
参考文献:
[1] GB/T5009.29- 2003.食品中山梨酸、苯甲酸的测定.
[2] GB/T23495-2009.食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定高效液相色谱法
1 仪器与试药
1.1 仪器
岛津LC-2010 高效液相色谱;高效液相色谱- 质谱联用仪(Thermo Ultimate 3000 液相色谱仪;LCQFleet质谱);岛津SPD-M10AVP 检测器;ThermofisherC18 色谱柱(150 mm2.1 mm，5 Aglilent C18 色谱柱(250 mm4.6 mm，5 Kiomosil C18 色谱柱(250 mm4.6 mm，5 Techmate C18 色谱柱(250 mm 4.6 mm，5 m)。
1.2 试剂与试药
甲醇、甲酸、四氢呋喃为色谱纯，其余试剂均为分析纯。松香酸(北京振翔工贸有限责任公司，批号：514-10-3);乳香酸(中国药品生物制品检定所，批号：111760-200601)。小儿化毒制剂均为国家药品评价抽验样品。
2 方法与结果
2.1 高效液相色谱法
2.1.1 色谱条件
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈- 四氢呋喃-0.1% 甲酸(45:25:30)为流动相;流速：1. 0 mLmin-1;检测波长：241 nm;柱温: 30℃;进样量：10 L。
2.1.2 溶液的配制
取松香酸对照品适量，加乙醇制成每1 mL 含10 g 的溶液，作为对照品溶液。取11- 羰基-- 乳香酸对照品适量，加乙醇制成每1 mL 含4 g的溶液，作为参照溶液。取小儿化毒散(胶囊)取样量0.6 g，精密加入乙醇25 mL，密塞，称定重量，超声处理20 min 后，放冷至室温，再称定重量，用乙醇补足减失重量，取上清液，用微孔滤膜(0.45 m)滤过，取续滤液作为供试品溶液。取原药材，照处方量折算后，分别制成缺少乳香药材和没药药材的样品，按供试品溶液制备方法制成阴性样品溶液。
2.1.3 专属性实验
取松香酸对照品溶液，参比溶液及阴性对照溶液各10 L，按2.1.1 项下条件试验。结果表明阴性样品无干扰，专属性良好。
2.1.4 检测限
取松香酸对照品适量，配制成浓度为1.286 gmL-1 的对照品溶液。另取供试品0.6 g，乙醇定容至25 mL。上述两种溶液各取10 L，加入液相色谱仪。得到对照品信噪比为8.7。根据以下公式计算得出仪器检出限(IDL)为4.43 ng，方法检出限(MDL)为18.4 gg-1。IDL=MDL= IDLK3QI/NVW式中V 为进样体积，K 为稀释倍数，W 为取样量，Q为进样量，I/N 为信噪比。
2 .1. 5 耐用性
用不同品牌十八烷基键合硅胶色谱柱3 根，对供试品溶液和对照品溶液测定，记录色谱图，结果样品色谱峰分离度，理论塔板数，均能满足要求，耐用性良好。
2.1.6 仪器精密度
取浓度为12.86 gmL-1 的松香酸对照品溶液2.1.1 项下条件连续5 次，由峰面积计算精密度，RSD 为1.2 %(n=5)，表明仪器精密度良好。
2.1.7 线性
精密量取松香酸对照品贮备液适量，加乙醇分别制为浓度为2.572、6.43、12.86、19.29、25.72、32.15 gmL-1 的溶液，分别取10 L 注入液相色谱仪，得到色谱峰面积，以进样量为纵坐标，以峰面积为横坐标，绘制标准曲线。结果表明进样量在25.72~321.5 ng之间，呈良好的线性关系，回归方程为Y=0.038 1X+1.698 1，相关系数R2=0.999 7。
2.1.8 测定
取小儿化毒制剂样品，按2.1.2项下方法制备，按2.1.1项下色谱条件对5 家生产企业的共56批次样品进行检测，结果有1 家生产企业的全部5 批样品均检出松香酸。
2.2.1 色谱条件
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈- 四氢呋喃-0.1% 甲酸(45:25:30)为流动相;流速：1. 0 mLmin-1;检测波长：210~260 nm ;柱温: 30℃;进样量：10 L。
2.2.2 确认
取已检出松香酸的样品，按2.1.2项下方法制备供试品，分别取供试品溶液以及松香酸对照品溶液10 L，注入高效液相色谱仪，进行光谱扫描，结果表明供试品吸收光谱与松香酸对照品吸收光谱相似度为0.999 9(图2)，均在保留时间t=13.66 min 处有最大吸收，最大吸收值波长为241 nm，检出松香酸。供试品与对照试剂相似度比较结果。
2.3 HPLC-MS 验证
2.3.1 色谱与质谱条件
Thermofisher C18 色谱柱(150 mm2.1 mm，5流动相为乙腈- 四氢呋喃-0.1% 甲酸(45:25:30);流速：1. 0 mLmin-1;检测波长：241 nm;柱温:30℃;ESI- 扫描：毛细管电压3.0 KV，锥孔电压40 KV，源温度150℃，毛细管温度350℃，扫描范围100~1 000 m/z。
2.3.2 验证
取已检出松香酸样品，按2.1.2项下方法制备供试品溶液，取供试品溶液1 L 及对照品溶液5 L，注入高效液相色谱- 质谱联用仪，进行测定，结果供试品与松香酸对照品均在保留时间t=6.74 min 处出现相应的色谱峰，且具有相同的质谱特征(图3)。可以判定样品中含有松香酸。
3 讨论
本实验建立的高效液相色谱方法能够有效地对小儿化毒制剂中非法存在的松香酸进行检测，简便、快速，准确。用此法对56 批小儿化毒制剂进行检测, 共发现5 批存在非法添加。表明目前小儿化毒制剂中存在松香酸非法添加现象，鉴于现行标准无法检测小儿化毒系列制剂中松香酸的存在，此方法可作为补充检验。DAD 光谱扫描可有效的避免假阳性结果的出现。若供试品色谱中，出现与松香酸对照品色谱中相应位置的色谱峰，采用DAD 检测器比较相应色谱峰在210 ~260 nm 波长范围的紫外- 可见吸收光谱，若吸收光谱相同，均在2412 nm 显示最大吸收;且该色谱峰面积大于11- 羰基-- 乳香酸参照溶液色谱峰的峰面积值，则视为阳性检出。
关键词 妇炎栓 质量控制 TLC HPLC
doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2010.02.017
仪器与试剂
实验仪器:Lc-2010高相液相色谱仪;Class-VP 色谱工作站;色谱柱:国产C18柱(5μm,4.6×250mm);流动相:甲醇-水(20:80);10A-VP型高相液相色谱仪;检测波长:286nm
实验药品与试剂:夏枯草、金银花、丹酚酸B对照品,妇炎栓3批;甲醇、己晴均为色谱纯,其他试剂为分析纯;水为重蒸馏水。
薄层鉴别
夏枯草薄层鉴别:取本品4枚,切碎,加甲醇50ml,加热回流1小时,放冷滤过,滤液蒸干,残渣用石油醚(30～60℃)浸泡2次,每次15ml(约2分钟),弃去石油醚液,残渣加1ml甲醇使溶解,作为供试品溶液。另取夏枯草对照药材1g,加水回流1小时,滤过,滤液蒸干,残渣加1ml甲醇使溶解,作为对照品溶液。按照处方工艺,依次取处方量药材,缺夏枯草药材制成栓剂,按供试品溶液的制备方法制成阴性对照液。吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以环己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-冰醋酸(20:5:8:0.5)为展开剂,展开,凉干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在100℃加热至斑点显色清晰,分别置日光及紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,分别显相同颜色的斑点或荧光斑点,阴性对照液无干扰。
金银花薄层鉴别:取本品4枚,切碎,加水50ml,加热熔化调pH为10,放冷滤过,滤液用20ml乙酸乙酯萃取,弃取乙酸乙酯液,水层调pH为4,用20ml乙酸乙酯萃取,滤液蒸干,加甲醇1ml溶解,作为供试品溶液。另取金银花对照药材0.2g,加甲醇回流30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加2ml甲醇使溶解,作为对照品溶液。按照处方工艺,依次取处方量药材,缺金银花药材制成栓剂,按供试品溶液的制备方法制成阴性对照液。吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各10μl,分别点于同一硅胶H薄层板上,氯仿-丙酮-甲酸(6:4:2)为展开剂,展开,取出,凉干,置日光下一段时间及紫外光(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,分别显相同颜色的荧光斑点,阴性对照液无干扰。
含量测定
方法的建立:本制剂中君药为丹参,收载于2005年版《中华人民共和国药典》一部,丹参主含醇溶性成分丹参酮ⅡA和水溶性成分丹酚酸B,根据处方工艺,故拟采用高效液相色谱法对处方中丹参的丹酚酸B进行含量测定,做为附炎栓的定量指标。
对照品溶液的制备:精密称取丹酚酸B对照品,加甲醇制成每1ml含0.051mg的溶液。
供试品溶液的制备:取本品10粒,精密称定,剪碎,取约6g,置圆低烧瓶中,精密加入甲醇(75%)50ml,加热回流2小时,放冷,用甲醇(75%)补足减失重量,摇匀,放冷滤过,取续滤液即得。
阴性对照液的制备:按上述供试品溶液制备方法制成阴性对照液。
色谱条件:Lc-2010高效液相色谱仪;Class-vp色谱工作站;色谱柱:国产C18柱(5μm,4.6×250mm);流动相:甲醇-水(20:80);10A-VP型高效液相色谱仪;检测波长:286nm。
结果:按照以上条件进行实验,理论塔板数N=2350,分离度R=1.6。
干扰试验:取供试品溶液及阴性对照品溶液各10μl,按上述色谱条件进样测定。结果显示阴性对照溶液在丹酚酸B保留时间处无色谱峰,供试品溶液中丹酚酸B与其他成分分离好,表明在此条件下,其他药材成分对测定无干扰。
线性关系考察:精密称取丹酚酸B对照品适量,加甲醇制成每1ml含0.051mg的溶液,分别精密吸取上述溶液2、4、6、8、10μl,注入液相色谱仪,测定,以进样浓度对蜂面积积分值计算,线性范围:0.102～1.33μg。回归方程C=6.51×10-7-9.83×10-3,r=0.9999。
精密度试验:精密吸取对照品溶液10μl,连续进样5次,测定峰面积积分值,RSD=0.7%
稳定性试验:标准品溶液自配好后,每隔一定时间测定1次蜂面积分值,丹酚酸B在配制后24小时内,积分值基本不变。RSD=0.9%。
重现性试验:取同一批号样品,按含量测定方法平行测定5份,RSD=1.4%。
回收率试验:在己知含量的样品中,定量加入对照品,依法提取,用所建立的方法进行测定。结果见表1。
样品测定:精密度试验,精密吸取对照品溶液10μl,连续进样5次,测定峰面积积分值。结果见表2。
讨 论
本品中夏枯草、金银花、丹参均为主要药味,方法学研究结果表明,采用专属性很强的薄层色谱法对夏枯草、金银花进行定性鉴别,采用高效液相色谱法测定丹参中的丹酚酸B的含量,可以有效控制妇炎栓的质量,保证用药的有效性。参照文献[1],在制定含量测定标准的实验中,采用回流提取、超声提取等多种提取方法进行实验,比较了用甲醇的不同浓度加热回流提取,制剂中丹酚酸B的含量以甲醇(75%)提取转移率为高。从色谱图看,经精密度、稳定性、重复性、回收率实验,表明本法操作较为简单、准确性、重复性好,可作为妇炎栓的含量测定方法。
参考文献
关键词 液相色谱仪；检定；液相色谱法
中图分类号TH7 文献标识码A 文章编号 1674-6708（2013）107-0078-02
液相色谱仪是广泛应用在研究所，实验室等场所、对所研究样品进行分离分析的常规仪器之一。它的优点主要有：1）可以在短时间内把样品分析出来；2）对于所分析样品没有太多要求，只要能制成液体即可；3）不需要太多的样品就可以分析出来；4）对于各组分含量很少的样品也能分析出来。以上优点决定了该仪器在生物、医药、食品、材料等各领域研究工作的广泛应用。
1 液相色谱仪的原理
高压泵利用高压把流动相压进系统中，然后样品溶液从进入到流动相中，并跟随流动相运动，最终进入色谱柱中，由于样品溶液的各个组成物质具有不同的性质，在色谱柱中运动时会有一定的差异，经过一段时间的运动以后，运动速度差异会变得越来越大，这样就被分成多个部分分别从色谱柱中流出，这样在检测器中就记录下了这些样品组分的浓度，然后以图谱的形式呈现出来。
2 液相色谱仪的组成
液相色谱仪主要由加入样品系统、输送样品系统、分离样品系统、检测结果系统和结果分析处理系统组成。
2.1样品加入系统
一般是用安装有隔膜的注射器或者是利用高压来加进样品，为了提高所分析样品的重复性，要在加样时注意使每次加入的样品量保持相同。
2.2样品输送系统
高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分组成了输送样品系统。高压泵的一般压强为 14.7MPa～44MPa，如此高的压强可以使待分析样品液体以相当大的速度通过层析柱，较大速度可降低样品在层析柱中向四周扩散。贮存器和密度梯度仪的作用是使样品流动相随着所用固定相和样品的变化而变化，具体包括改变洗脱液的吸水性、阴阳离子浓度、PH值，这样就可使各种样品成分最终都可以实现有效的分离，增强分离的效果。
2.3样品分离系统
首先，长度一般为1dm～5dm，内径为0.2cm～0.5cm的色谱柱、有时候需要有连接管和保持温度恒定的仪器等组成了样品分离系统。色谱柱的材料是不锈钢，、厚壁玻璃管、钛合金等。色谱柱内是半径为2.5μm～5μm的固定相，固定相中的基质材料是树脂或硅胶，它们的特点是有一定的化学惰性、多孔、比表面积大，另外还通过运用各种方法偶联上各种极性基团。这样就可以筛选出结构不同的多种物质。例如，如果上述硅胶表面被PSA偶联以后，就可以很轻松地把成纤维细胞中产生的一种糖蛋白分离出来。
其次，固定相中所装的物质粒度小，柱床特别容易达到均匀、致密的状态，这样就可以极大地降低扩散效应。这样就有利于缩小各个条带的宽度、并且提高分辨率。当然，这也正好符合了柱效理论。
最后，恒温器可以使仪器内的温度使从25℃升高到60℃左右，温度越高，样品在层析柱中传输的速度也就越大，分析时间也就减少，从而提高液相色谱仪的分析分离效率。
3 液相色谱仪各部分的检定方法和注意事项
液相色谱仪是高精度仪器之一，其检定需要根据《液相色谱仪》的相关规定来进行，这一部分内容是国家计量检定规程（JJG705-2002）中独立的一部分。接下来简单介绍一下常规检定项目的检定方法及注意事项。
3.1泵流量设定量误差Ss和流量稳定性误差SR
3.1.1检定方法
泵流量的检测是根据液相色谱仪上标定的流量标准来设定好标准流量，然后打开仪器，按照正确的操作步骤进行操作，等到压力趋于稳定以后在规定的时间内收集流动相于处理过可以直接使用的容量瓶中，同时由同一个人计时，在规定的时间内收集好流动相（以上操作重复三次），然后在分析天平上称量所收集的流动相的质量。按照公式
1）；
2）来计算误差值。
3.1.2注意事项
收集流动相和计时要由同一个人来完成，这样就可以减少不同时而造成的计时误差；由于甲醇是极易挥发的液体，所以在收集的过程中要密封，收集好以后立即称重，称重结果要换算成体积然后保留小数点后三位有效数字；这一过程要重复至少三次以减少偶然误差，增强结果说服力。
3.2 色谱柱温箱温度的检定
3.2.1检定方法
在色谱柱温箱内固定一个温度计，使温度计的探头能够测量色谱柱的温度。分别选择35℃和45℃作为检测温度进行检定。按照液相色谱仪的操作规程操作，等到温度稳定在一定值时，记录下温度计的读数，与此同时开始用秒表计时，每隔10min记一次读数，总共记录7组数据，然后求出算术平均数，算数平均数与所设定的35℃或45℃的差值就是柱温箱温度设定值误差ΔTs，而读数中最高温度与最低温度的差值是控温稳定性Tc。
3.2.2 注意事项
温度的升高在通常情况下会加大理论塔板数，峰和峰之间的距离变小，但是要保证每个峰的面积不变，所以在峰距变小的情况下，峰的高度就会增高，所以温度升高会使保留的时间变短，而温度降低正好相反。
3.3基线噪声与基线漂移的检定
3.3.1检定方法
在进行这个项目的检定时，用C18作为色谱柱的材料，用无水甲醇作为液相色谱仪中的流动相，设定适当的高压使流速为1.0dm3/min，并且使仪器处于最灵敏的状态，记录纸的移动速度设定为0.5～1cm/min。按照正确的操作步骤操作，待稳定运行半小时后，根据检测器的衰减倍数和对应的标度来算基线噪声。所用的公式是Nd=KB。基线漂移的值是在一个小时内检测器基线偏离坐标原点的距离。
3.3.2注意事项
在进行此项目鉴定时，仪器中不能有无水甲醇以外的其他物质作为流动相；如果基线处于非正常状态，那么需要排除故障使仪器处于正常工作状态，这样测定的值才具有真实性；在测得基本的数据以后，要注意在计算过程中换算各个数据的单位，否则所得结果将是不正确的。
3.4最小检测浓度的检定
3.4.1检定方法
与上述检定基线噪声的条件差不多，把流动相改为用一定浓度的萘、甲醇混合溶液，按照正确操作步骤操作仪器，记录下结果图，按照公式来计算最小检测浓度。
3.4.2注意事项
在计算的时候，分母中的“20”是按照20的进样体积计算，而不是按照浓度来计算的。
3.5整机性能的检定
3.5.1检定方法
首先使整个仪器处于正常工作的状态，按照仪器本身所配置的检测器来选择测量参数：紫外检测器和二极管阵列检测器用无水甲醇作为流动相，流量设定在，波长值设定为254nm，0.04的灵敏度，待基线稳定后加入5?～10?的萘甲醇标准溶液；荧光检测器则与上述两个检测器不同，它所用的流动相是85%的甲醇溶液，流量相同，两个波长值分别是345nm、455nm，灵敏度值选择居中的档位，待基线稳定后加入相同体积的硫酸奎宁/高氯酸水溶液；折光率检测器用无水乙醇做流动相，流速值、灵敏度值选择的选择与荧光检测器的相同，加入5～10?1kg/L的丙三醇溶液。以上各检测器的检测值要得到六组，并记录峰的保留时间和峰面积，按照下面的公式计算RSD。
3.5.2注意事项
要使仪器处于正常工作中，这样才能使得数据具有说服力。要真实记录各组数据。
6定性（定量）=
4 结论
以上只是介绍了液相色谱仪的几个常见项目的检定方法及注意事项，液相色谱仪的更新速度在不断地加快，这就对检定人员提出了更高的要求，需要他们不断地学习新的检定方法，多思考，多总结，提高自己的检定水平，为更多研究人员提供更可靠的服务。
参考文献
[1]杨进，冯念伦.高效液相色谱原理、临床应用及常见故障处理[J].医疗设备信息，2001，16（1）：18-19.
[2]陈岚.液相色谱仪检定方法及注意事项[J].电源技术应用，2013（1）：319.