时间：2023-10-25 11:06:38
液相色谱仪是由输液系统、进样器、色谱柱（柱温箱）、检测器和数据记录处理装置等部分组成的分析仪器。液相色谱仪利用试样中各组分在色谱柱内固定相和流动相间分配或吸附特性的差异，由流动相将试样带入色谱柱中进行分离，经检测器检测，依据组分的保留时间和响应值（峰面积或峰高）进行定性和定量分析。
1.测量依据：JJG705-2002《液相色谱仪检定规程》
2.环境条件：温度：（10-30）℃，湿度：（20-85）%RH
3.测量标准：液相色谱仪检定装置；测量范围，标准物质：萘-甲醇溶液（1×10-4～1×10-7）g/mL； 温度：（0-400）℃；不确定度：6%（k=2）。
3.测量对象：液相色谱仪（紫外可见光及二级管阵列、荧光和示差折光检测器）
5.测量过程：用电子天平和秒表检定流量设定值误差和流量稳定性误差；用数显温度计检定柱箱温度设定值误差和温度稳定性能；用微量进样器和标准物质检定仪器的检测限、定性定量重复性。
二、数学模型
（1）
式中：CL-最小检测浓度，g/mL
Nd-基线噪声，mm（mV）
C-标准溶液的浓度，g/mL
H-标准溶液的色谱峰高，mm（mV）
V-进样体积，μL
三、不确定度的来源和分析
根据不确定传递由（1）式得出
（2）
式中各不确定度分量比此独立，灵敏系数为+1
1.不确定度来源
1.1 B类不确定度
1.1.1 标物的相对不确定度是检定液相色谱仪的不确定度的主要来源，直接影响检定结果。标准物质的相对不确定度通常由标准物质证书给出，国家标准物质目录上列的检定液相色谱仪的标准物质为GBW（E）130168，其定值不确定度为4%，包含因子k=2，所以：u1=0.04÷2=0.02。
1.1.2 游标卡尺的标准不确定度u2
游标卡尺经上级传递，符合其技术要求，其最大允许误差为±0.02nm，半宽区间为0.02nm，在此区间认为均匀分布，故覆盖因子k= ，由游标卡尺引起的标准不确定度为：
1.1.3微量注射器的标准不确定度u3
微量注射器经上级传递，符合其技术要求，相对标准偏差1%，所以：
1.2 A类不确定度
1.2.1峰面积或峰高测量值的相对不确定度u4
峰面积或峰高测量不确定度主要是仪器测量的重复性引起的，重复进样6次，检定规程规定定量重复性为3%，因此
1.2.2流动相流速测量的不确定度u5
流动相流速测量的不确定度是由流量的不稳定性，电子天平，使用电子天平引起的不确定度，可以通过对流速连续重复测量得到，采用A类方法进行评定。
以一台北京东西电子研究所生产的高效液相色谱仪为例，用甲醇作流动相，设定流量1.0mL/min，进行重复测量，测量结果如下：
其标准偏差：
相对标准偏差：
流动相流速测量的不确定度
1.2.3 基线噪声测量的不确定度u6
基线噪声测量的不确定度主要来自游标卡尺的不确定度和用卡尺测量的不确定度，一般为0.02，如果用色谱工作站记录基线噪声，则其不确定度优于0.01。
2.不确定度分析
为标准物质的相对不确定度；
为标准高或峰面积测量的相对不确定度，还包括流动相流速测量的不确定度和游标卡尺的标准不确定度；
为微量注射器的标准不确定度。
四、不确定度的合成
五、扩展不确定度的评定
包含因子k=2时，扩展不确定度U=kuc=2×0.0270=0.054=6%。
关键词：高效液相色谱仪;检测过程;问题分析
一、高效液相色谱仪的使用现状分析
自第一台液相色谱仪面视后，科克兰等人陆续又出版了《液相色谱的现代实践》，这标志着高效液相色谱法（HPLC）的正式建立。在之后陆续的时间里，高效液相色谱成为主流的分离检测手段，在化学及医学等方面应用广泛。同时还极大的带动了其附带产品及技术的发展，如：检测技术、色谱柱、数据处理软件等。一路走来HPLC成为解决生化分析问题最有前途的方法。由于HPLC具有分辨率高、灵敏度高、速度快、等优点，因此被各种领域学科所应用。高效液相色谱仪是根据高效液相色谱法为基础，研制而成的基本仪器，主要是由溶液贮液器、泵、进样器、色谱分离柱、检测器、记录仪和数据处理系统组成。基本的工作原理是开始处理样品时，泵从溶液贮液器中抽出事先配置好的流动相，然后通过自动进样器带着进样针吸取的样品溶液流入到色谱分离柱（现在检验一般用的是C18柱）中，通过色谱柱，然后再进到检测器里去，最后数据处理系统会对整个分析过程进行数据处理，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，然后通过计算，完成分析过程。高效液相色谱仪适用的范围十分广、对色谱分析的速度快、准确率也高，而且也能反复检测，对于一些领域的应用已经得到广泛的认可。在这其中色谱分离柱是最主要的检测设备，因此在检测的过程中一定要保证它不受到污染。
二、高效液相色谱仪使用过程中常见问题分析
（一）柱压问题
柱压过高，导致这种情况的直接原因可能是色谱分离柱或进样器流动不畅通。出现这种情况的根本原因可能是流动相抽滤不干净，存有杂质，从而堆积在色谱柱或过滤器中，这时只要重新配置一遍流动相。解决“堵”的方法就是检查色谱分离柱，确定其流动是否畅通，具体操作是在泵工作的情况下将色谱柱的出口处拧开，看看是否有流动相流出，同时可以调节流速，观察流动相流出的流量，进而判断色谱柱是否堵了。还有一些原因，比如：流动相的流速过大（一般为1.0ml/min）、流动相的成分不符合标准（没有使用HPLC级别的试剂或者没有超声完全）等。这些按照药典调整成正确的设置即可。如果怀疑是在线过滤器堵了可以关闭排液阀，断开出口管路，设定流速为1ml/min，如压力>3kgf/cm2，则可能堵塞，可以考虑将其置于5%稀硝酸，超声波清洗一段时间。最后最好在检测验样品的时候加一个保护柱。有时候也会柱压过低，发生这个原因主要是连接不牢固，导致漏液，拧紧即可。更换流动相时没有进行脱气，导致仪器里面进入空气，一般的解决方法就是卸下超声清洗，然后进行脱气。
（二）基线漂移
在色谱仪启动之前，通常先启动半个小时后再进行操作，这样做是避免基线漂移。出现这种现象的原因很多，其一是色谱柱温差变化大，需要控制柱温，用色谱纯，也可多抽滤几次，除去醇溶性流动相外的其他流动相要勤更换，做到现配现用，以免滋生微生物，堵塞进样通道，造成基线不稳定，影响出峰。第三个原因是流路本身长期进样没有时间保养积淀的杂质。解决方法是用洗脱剂冲洗样品流动的通道，对于反相色谱系统的流动相首选甲醇-水系统，按照梯度洗脱的方法冲洗掉系统和色谱柱中的杂质，以免影响样品的质量。必要时可以用异丙醇。第四个可能性就是由于紫外灯的使用寿命到了，不能再继续工作，解决方法是换紫外灯。最后是样品本身性质的影响，对于流动相的影响较大，解决方法就是用保护柱检测样品，以免出现问题。
三、结论
从上面的内容可以看出，色谱仪的日常维护也是很多的，只有在平时的使用当中仔细应对，及时发现异常并解决，才能不让小问题演变为大问题，如果在日常使用过程中加以注意，那么就会延长其使用寿命，保证检测的准确性，也降低的检测的成本，对于检测的准确度能有效保证。在含量测定的过程中什么问题都有可能出现，我们需要的就是不断的完善自己的操作水平，细心留意从处理样品到进样过程中容易出错的地方，针对这些容易出错的部分逐一排查，然后妥善解决，才能保证在样品检测出的结果真实可靠。高效液相色谱仪做为含量测定的重要仪器，我们在使用和养护过程中要确保不能污染到色谱柱，这样才能保证检测结果的准确。
参考文献：
[1] 陈莲，高洪，肖啸. 高效液相色谱仪使用过程中常见问题及其解决方法[J].饲料工业.2005（07）.
[2] 黄加龙. 高效液相色谱仪使用中常见问题及解决办法[J].饲料工业.2006（08）.
[3] 刘萍，侯西成，郝满良.高效液相色谱仪使用中常见的问题及解决办法[J].饲料博览（技术版）.2007（01）.
[4] 张燕婉，孟宪敏. 高效液相色谱仪使用中常见问题及对策[J].中国医学装备.2006 （04） .
论文关键词：高效液相色谱仪；水环境；监测；前景
一、高效液相色谱仪及其技术简介
高效液相色谱（hplc)也叫高压液相色谱、高速液相色谱、高分离度液相色谱等。是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱。又因分析速度快而称为高速液相色谱。
高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时,经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器(能检测色谱柱流出组分及其量的变化的器件。指机械的、电子的或化学器件，用于区分、记录或指示环境中某一变量的变化，如温度、压力、电荷、电磁辐射、核辐射、粒子或分子等。)时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。
二、高效液相色谱仪的应用
高效液相色谱仪在水环境监测中的应用主要分为三个方面：一方面是对传统监测项目指标的监测；一方面是针对水体中的有机物进行监测；另一方面是利用其高效分离的技术特点在对水体中污染物质总量的监测的基础之上对不同价态及其形态的污染物进行分类定量监测。
（一）对传统污染物的监测
对传统污染物的监测主要是针对日常水体中常见污染物的重点监测。根据国家的相关要求及其本站的实际监测条件，对水体中主要污染物的监测包括了重金属元素（铜、锌、砷、汞、镉、铬等）、营养元素（氮、磷、钾等）、特殊元素（硒、氯、硫等）。通过如上监测对水体的日常污染状况进行把握与评价。同时，传统污染物的监测还包括了对特定企业排污点的污水监测，作为其环保达标的重要依据。
（二）对水体中的有机物
在传统的污染物的基础之上工业以及农业淋容等多方面因素会对水体中造成一定的有机物污染，在针对有机物的污染监测过程中传统的监测方法无法在精度与效率方面达到要求。在此方面应用高效液相色谱仪在对有机物进行定型的同时进行定量的监测。主要监测的项目包括了，工业有机污染物（氰化物、）挥发酚、石油类、总有机物等）、农业有机物（如杀虫剂、除草剂、消化抑制剂）、特殊有机物（微生物代谢物、医疗污染物、生活污水等）。针对如上的有机物监测一方面能够对水体中有机污染现状进行评价，另一方面可以鉴别污染物种类进而对排查污染源提供一定的帮助。
（三）对不同价态及其形态的污染物的监测
同种化学元素的不同存在价态以及形态对其生物毒性的影响至关重要。比如铬元素在水体中存在三价与六价之分，其中三价铬毒性较小且对在较大浓度范围内对人体有益，而六价铬则表现为较强的生物毒性，在较低浓度下对人体造成较大危害。在水环境的监测过程中传统的六价铬的监测方法是利用六价铬与二苯碳酰二肼的显色反映进行检测的。这种检测方式由于收到氧化还原条件的影响容易造成较大误差，进而使得对水体环境的判断失准。采用高效液相色谱仪能够同时监测同种元素的不同价态进而对水体的污染物及其毒性进行更好的定量分析，为后续的环境评价与治理奠定基础。
三、高效液相色谱仪的特点
（一）高效液相色谱仪的准确性
与传统的检测方法相比较，高效液相色谱仪具有更高的准确性，这种准确性主要表现在两个方面：一方面高效液相色谱仪为全自动检测仪器，在避免了人为误差出现的同时降低了机械误差。而机械误差经过标准物质的校订之后可以得到很好的控制，这就决定了高效液相色谱仪在监测过程中误差较小。同时，在另一方面高效液相色谱仪在监测原理上同样优于传统的监测方法，以火焰原子吸收测量水体中的重金属浓度为例，其以火焰原子激发的峰值为测定浓度结果，在测定过程中的波动式消耗会使得测量结果较实际浓度偏低的现象。而采用高效液相色谱仪则是利用全部曲线的面积来代替相对体积内的总量，在计算优化方面更具备准确性。
（二）高效液相色谱仪的高效性
高效液相色谱仪的高效性主要表现为三个方面：
1、高效液相色谱仪的检测效率本身，样品从进样到出结果仅需要30秒作用的时间对于单向测定，此时间还具有一定的下降空间。
2、高效液相色谱仪的多重测定效率。在针对多项目的测定过程中。利用高效液相色谱仪进行测定可以单次进样多指标共同检测的效果，大大的降低了进样的重复性工作，提高了整体的工作效率。
3、高效液相色谱仪的连续进样机制，在前一样品转移到检测室后，后一样品既可以做进样处理，在监测相同的项目指标的情况下，连续进样与单独进样的监测效率提高越30%。
此外，通过高效液相色谱仪与质谱仪的连用可以实现在定量分析的基础之上进行定性的监测。一方面省略了定性检测的二次步骤，另一方面降低了样品前处理的难度与过程。进而，降低了监测的时间。
（三）高效液相色谱仪的广泛性
高效液相色谱仪的广泛性主要表现为对监测物质的广泛性，其监测项目几乎涵盖了水体环境监测的所有基础项目。包括了重金属的测定、营养元素的测定、其他离子的测定、不同价态的测定、有机物的测定等等诸多方面。尤其是其针对有机物的测定方面还可以细致划分为多环芳烃类化合物的测定、酚类化合物的测定、苯胺类化合物的测定、邻苯二甲酸酯类化合物的测定、氯联苯和卤代化合物的测定、苯基脲类化合物的测定、酞酸酯类化合物的测定等等。几乎涵盖了所有类别的污染物种类，使得在实际的操作过程中可以根据不同的监测目标与监测目的进行合适的项目选择。
四、高效液相色谱仪的应用前景
（一）与评价软件连用
高效液相色谱仪与评价软件连用主要是利用高效液相色谱仪的数据收集功能以及数据计算功能。在高效液相色谱仪对数据计算的基础上结合电脑的评价软件对获得数据进行进一步处理的过程。通过与评价软件的连用可以达到在监测的过程中根据不同的监测目的进行合理的评价结果输出的方式。进一步使得环境监测具有高效化与准确性。
在具体的操作层面其可能应用主要分为两个方面：一方面是利用评价软件的评价功能对超标样品进行筛选。在测定前利用标准物质对环境标准进行测定。而在测定的过程中利用评价软件的筛选功能自动对超标样品进行报警或者标红处理，而对于未超标样品则可以采用忽略的处理方式。最终的数据输出结果为超标样品编号与浓度。这样能够有效的降低环境监测站的工作强度。
另一方面是利用预设的国家标准以及不同污染物的环境效应权重针对同一样品的权指标测定项目进行评价报告的生成。在测定的过程中自动的对比国家环境标准，进而生成科学的环境评价报告，为后续的环境治理提供一定的依据。
（二）与质谱仪连用
高效液相色谱仪只能够定性的分析被监测物质，或者通过对吸收光谱的设定来测定特定物质的浓度，而对于未知物质的监测则存在一定的不足。此方面的缺陷使得其在使用的过程中测定项目具有一定的盲目性。通过高效液相色谱仪与质谱仪的连用可以在同一样品测定的情况下测定未知样品中的特定物质种类以及物质浓度。方便并拓宽了水环境监测的广度。
（三）与连续进样装置的连用
高效液相色谱仪具有一定的连续进样能力。但是，此种进样依旧采用手动的模式进行。在手动模式下，一方面对进样效率的提高程度不显著。另一方面则表现为对进样的准确程度不精确。因此，采用高效液相色谱仪与连续进样装置的连用在进一步提高工作效率的同时，保障了进样的准确性与测定的自动化程度。在效率与精度方面对高效液相色谱仪的检测均是一种提高。
五、总结
方法：使用高效液相色谱仪对泰魄颗粒中的阿魏酸含量进行测定。
结果：记Y为阿魏酸的峰面积，X（ug）为进样量，则Y与X之间的回归关系为：Y=2513X+26.4821，线性范围为2.1ug/ml-12.3ug/ml，相关系数为r=0.999。
结论：该检测方法简单，灵敏度高，准确率高，可以用于相关药物中阿魏酸含量的检测中。
关键词：高效液相色谱 阿魏酸 泰魄颗粒
Doi：10.3969/j.issn.1671-8801.2013.08.051
By high performance liquid chromatography determination of Thai angular particles of ferulic acid content
Tian Jian
Abstract：Objective：To investigate and analysis using high performance liquid as the determination of the content of ferulic acid in taipo granules chromatograph.
Methods：Using high-performance liquid chromatography on the content of ferulic acid in taipo granules was determined.
Result： Y is the peak area of ferulic acid， X （UG） as the sample， the regression relationship between Y and X： Y=2513X+26.4821， the linear rang ：2.1ug/ml-12.3ug/ml，the correlation coefficients：r=0.999.
Conclusion：The method is simple， high sensitivity， high accuracy rate.
Keywords：High performance liquid chromatography Ferulic acid Taipo granules
【中图分类号】R4 【文献标识码】A 【文章编号】1671-8801（2013）08-0054-02
泰魄颗粒是一种由熟地、白术、枳壳、生地、郁李仁、当归、瓜蒌仁等成分组成颗粒药物，有润肠通便、滋阴养血之功效[1-3]。临床上常常使用该种药物治疗老年性或习惯性便秘，该药物能调节虚火，润肠降火，具有很好的治疗疗效[1，2]。为了保证该种药物的治疗疗效和药物质量，本文对泰魄颗粒中的有效组成成分阿魏酸的含量进行了测定，测定使用方法为高效液相色谱法，先将研究和测量分析过程整理如下。
1 材料与测量仪器
1.1 仪器。测量泰魄颗粒中所使用的仪器有以下几种：高效液相色谱仪（型号：LC-IOAP）、紫外分光检测器（型号：UV2930）、超声处理器（型号：kh-250db）、光学读书分析天平（型号：TG328A）。
1.2 试药。相关测定药物对照样品：阿魏酸样品；提供方：中国药品生物制品检定所；药品批号：110773-10254。测定药物：泰魄颗粒；纯分两种，一种为色谱纯（检测使用的甲醇），另外一种为分析纯（其他检测中使用到的试剂，水为超纯水）。
2 测定方法和结果
2.1 测定色谱条件。使用的色谱柱为功能较为完善的依立特ODS2柱；使用的流动相溶液为的浓度为1%冰醋酸-甲醇溶液，二者比例为70：30，溶液流动速率为每分钟1.0ml，检测波长设定为320nm，进样量数据设定为5ul。色谱柱所在温度为室温；根据阿魏酸相关计算法则以及理论塔板数进行相关计算结果应该不小于3000，相关分离度至少在2以上。根据上述设定好的色谱条件，将相关部门提供的样品中所含有的组成成分阿魏酸能得到充分分离，且对照样品和阴性对照样品溶液之间并没有峰重叠。
2.2 对照样品溶液的制定。精密称量合适量的阿魏酸对照药品，称取上述样品之前，需要用P2O5（五氧化二磷）干燥24小时才能称取，称取之后用浓度为70%的甲醇溶液进行溶解，并将溶解样品液制成浓度为12.5ug/ml的溶液，该溶液既是对照样品溶液。样品及对照品的高效液相色谱示意图如下图所示（见图1～2）。
2.3 检测样品溶液的制定。同样精密称取1.5g的使用P2O5干燥24小时候的样品药品，并将称取后的样品放置在容量瓶中，向容量瓶中加入合适剂量的浓度为70%的甲醇溶液进行溶解，充分震荡容量瓶，放置等待充分溶解并定容，取上层清夜随后使用0.40um的滤膜对容量瓶中的溶液进行过滤。
2.4 阴性溶液的制定。按照制定好的处方精密称取除当归以外的各种药材，通过相关的制作工艺进行相关组成成分的提取，依照上述方法制定成缺少当归药物的阴性药品溶液；精密量取5ml上述制定好的阴性药品溶液，依照上述检测样品溶液的制定方法，制成相关的阴性溶液。通过依照上述色谱条件进行相关分析，发现在与对照样品相对应的保留时间位置，并未出现无显著的其他峰值，检测结果判定为：该试验不会受到阴性样品的干扰。
2.5 测定法。取一定量的上述检测样品溶液和对照样品溶液，分别精密量取5ul的上述两种样品溶液，将量取后的样品溶液分别诸如液相色谱仪中，以上述色谱条件进行相关分析和测定，依据相关规定以阿魏酸的峰面积为基础条件和相关的外标记法来对检测样品中阿魏酸的含量进行计算。
2.6 相关线性关系的测定。取一定量的阿魏酸对照样品溶液，并精密量取10mg上述溶液，将量取后样品溶液置入棕色容量瓶中，容量瓶的容量为25ml，并向其中加入适量的流动相进行充分溶解并稀释，直至刻度，随后摇晃均匀，制定成浓度为400ug/ml的对照样品溶液以备用。分别精密吸取0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml的上述400ug/ml备用对照样品溶液并放入容量为100ml的棕色容量瓶中，随后添加适量的流动相进行稀释直至刻度线，摇晃均匀，随后进行进样测定。设横坐标（X）为对照样品溶液的进样溶度，纵坐标（Y）为峰面积积分值，进行相关曲线的绘制，回归方程为：Y=2513X+26.4821，相关系数r为0.999。相关结果分析表明：阿魏酸的进样浓度在2.1ug/ml-12.3ug/ml之间，且发现阿魏酸峰面积和进样溶度之间呈现正面的线性关系。
2.7 精密度检测试验。取一定量的上述定制好的测定样品溶液和对照样品溶液（浓度为6.0ug/ml），分别精密吸取上述两种样品溶液各5ul，对上述取样溶液分别进行6次重复进样，并记录色谱图的相关数据，测定和记录阿魏酸的面积，其中RSD为0.53%，这说明仪器精密性能良好。
2.8 稳定性检测试验。精密吸取5ul的检测样品溶液，放置0h、4h、8h、12h、16h、24h后分别进行一次测定，相关峰面积RSD的结果为0.72%，这说明24h内检测样品溶液具有一定的稳定性。
2.9 重现性检测实验。取合适量度的检测药品溶液，对同样批次的取样溶液实行平行检测，检测次数为6次，并根据相关算法来计算溶液中阿魏酸的含定量。相关结果显示：6次平行检测所计算出平均阿魏酸含量和RSD分别为42.59ug/ml和1.01%。
2.10 加样回收率测定试验。精密量取2ml上述已知阿魏酸含量的检测样品溶液（42.59ug/ml），一共量取6份，向每份量取样品中都精密添加2ml的阿魏酸对照样品溶液，根据上述测定样品溶液的制定方法，制成相关的检测对照样品溶液，随后进行相关测定。根据上述试验测定得出的结果和投料量来计算相关的回收率。结果测得的平均回收率和RSD为98.39%和0.85%。
综上，对上述四种指标进行对比总结，详细结果见下表1。
3 讨论
相关试验表明，用70%甲醇、纯甲醇、纯水等试剂分别稀释检测样品溶液，最后三种稀释液进行相关测定结果表明测定阿魏酸面积最大为70%甲醇稀释样品后的溶液，不会受到杂质峰的干扰，所以常常选用70%的甲醇溶液进行相关稀释[1]。
阿魏酸属于一种弱酸化合物，较易分离，因此在流动相中添加少量的弱酸物质可以对相关峰形进行改善，因此常常加入浓度为1%冰醋酸-甲醇溶液（70∶30）来进行相关调整，改善溶液测定中阿魏酸的峰形[2，3]。另外，需要注意的是阿魏酸的光稳定性和热稳定性较差，因此保存方式要得当[1-3]。
本文相关检测研究表明，使用高效液相色谱测定法来检测泰魄颗粒中组成成分阿魏酸的含量，检测方法简单，重现性、精密度、稳定性好，能用于泰魄颗粒的含量检测中。
参考文献
[1] 涂传发，王丽君.阿魏酸哌嗪与贝那普利联用对早期糖尿病肾病患者尿白蛋白排泄率的影响[J].药学实践杂志，2013（01）：49-50
[2] 王宏天，马继伟.内皮素拮抗剂阿魏酸钠联合奥美沙坦治疗早期糖尿病肾病的研究[J].中国中西医结合肾病杂志，2012（11）：981-983
SHIMADZU LC-20A全自动液相色谱仪（岛津制作所），METTLER XS105DU电子分析天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)，KQ-500DE型数控超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；纳他霉素对照品（批号：00105、含量：89.0%，以无水物计97.0%、德国Dr、上海安普科学仪器有限公司）；统一鲜橙多（批号：2011-10-17，广州统一企业有限公司）；甲醇为色谱纯；冰乙酸为优级纯。备溶液，备用。
（2）样品溶液的制备：精密量取鲜橙多供试样10mL,置50mL锥形瓶中，加入甲醇30mL,超声提取30min，提取液依次过0.45μm和0.22μm的滤膜，取滤液备用。
3.方法的专属性
取溶剂甲醇、样品溶液、加标样品溶液与对照品溶液，按上述色谱条件，分别依法注入液相色谱仪，记录色谱图。结果：溶剂甲醇对纳他霉素测定无干扰，样品未检出纳他霉素，
其内源性物质对纳他霉素测定无干扰，加标样品与对照品在
相同时间位置上检出纳他霉素峰（见图1）。
4.校准曲线和检出限、定量限
取2（1）项的标准储备液，甲醇分别稀释制成纳他霉素质量浓度为10μg/mL、5μg/mL、2μg/mL、1μg/mL、0.5μg/mL、0.25μg/mL的系列标准溶液，各取10μL，按上述色谱条件，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积为纵坐标（Y），与其对应的浓度为横坐标（X）绘制校准曲线，计算回归方程为：Y=58962X-5640，相关系数r=0.99998。显示纳他霉素的质量浓度在0.25～10μg/mL范围内具有良好的线性关系。在此色谱条件下，分别以信噪比（S/N）为3∶1时，相应的最低检出浓度0.1515μg/mL为方法检出限。以信噪比（S/N）为10∶1时，相应的最低检出浓度0.5051μg/mL为方法定量限。5.回收率和精密度
分别取统一鲜橙多样品10mL置50mL锥形瓶中，各加入3个浓度水平的纳他霉素对照品溶液（每个浓度做3个平行样，每个样注样2次），按照2（2）项的方法处理后，在上述色谱条件下，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，根据测定成分的峰面积，代入回归方程计算纳他霉素的含量和回收率，结果见表1。
从表1可看出，该方法的平均回收率为97.3%～107.0%，相对标准差（RSD）（n=6）为0.4%～1.0%，其准确性和精密度均能满足方法确认的技术要求。
6.样品测定
关键词:离子色谱;环境监测;使用;保养;处理
作为我国可持续发展战略中的重要组成部分，其监控效果对于我国环境有着重要影响。污水处理作为我国工业企业环境监测的重点，其监测数据的真实有效对于企业有着重要意义。一方面关系到企业污水处理等工程的运行与保养的指导，另一方面也关系到企业污水处理等工程是否达到国家标准。离子色谱法是水质、大气、土壤监测的最佳检验方法，尤其在工业废水监测等方面，具有稳定性好、重现性好、精密度好，其在水质监测有着广泛的应用。
1.离子色谱法概述
离子色谱是高效液相色谱的一种，故又称高效离子色谱（hpic）或现代离子色谱，其有别于传统离子交换色谱柱色谱的主要是树脂具有很高的交联度和较低的交换容量，进样体积很小，用柱塞泵输送淋洗液通常对淋出液进行在线自动连续电导检测。离子色谱法是高效液相色谱法中分离分析溶液中离子组分的方法。离子色谱中使用的固定相是离子交换树脂。离子交换树脂上分布有固定的带电荷的基团和能游动的配位离子。wWw.133229.cOm当样品加入离子交换色谱往后，如果用适当的溶液洗脱，样品离子即与树脂上能游动的离子进行交换，并且连续进行可逆交换吸附和解吸，最后达到吸附平衡。食品制造行业、制药业、纺织业等行业都有着离子色谱的应用。现代技术的发展更为离子色谱的应用提供了良好的发展空间，越来越简便的操作、更加精准的监测结果都为离子色谱的应用提供了基础。
2.离子色谱在环境监测的应用分析
环境监测对于城市环境、国家发展乃至人类生存都有着重要的意义，作为我国可持续发展路线实施的重要组成部分，加强环境监测、控制企业污水排放是目前环境监测机构的首要工作。操作简便、分析项目多、速度快、工作环境清洁等特点使得离子色谱在污水排放环境监测以及土壤环境监测等方面的应用不断增加。针对这样的情况，下面就离子色谱监测前处理以及仪器操作等进行了详细的论述。
2.1关于离子色谱在水环境方面监测方面的应用分析
传统城市污水监测，针对不同的监测指标有不同的方法，以硫酸盐为例，硫酸盐的测定其传统推荐方法为gb/t11899- 1989重量法 ,该方法是一经典方法 ,准确度高 ,但操作繁琐且耗时较长。而离子色谱法作为一种新的分析技术 ,广泛应用于水中常见阴离子和碱金属、碱土金属阳离子分析，其较传统方法省时省力、操作简便。而且利用城市污水离子色谱前处理柱系统可有效去除污水中的有机质及少量的重金属离子，减少了对色谱柱柱效的影响 ,该方法能完全满足对城市污水监测的要求。在进行城市污水监测及工业废水监测过程中要格外注意对有机质的去除，以保障检测结果的准确。
对于降水的监测是环境监测中的一个重要工作，离子色谱在降水常规监测中发挥重要作用。在进行降水监测离子的测定时，使用离子色谱仪进行可以有效的减少检验时间，增加检验准确性。
另外对于环境水质的分析也是环境监测的重要工作之一，采用离子色谱仪一般可以在20分～30分钟之内分析测试出常规项目：氟化物、氯化物、亚硝酸盐氮硝酸盐氮、硫酸盐等。通过标准溶液的配制，选择适合的浓度，配成多个项目的混合使用液，绘制标准曲线，通过标准曲线对环境水质样品进行定量分析，其精密度、准确度均达到环境监测实验室质量控制指标的要求。由此可以看出采用离子色谱法对水质进行监测可以极大的提高工作效率，对于在环境监测车上进行即时检验有着很大的帮助。
在进行污染源水样监测时，离子色谱由于其分离柱的特性导致在进行样品分析前必须对样品进行处理，以保护分离柱不被损坏。在进行土样等固体监测样品时，需经过超声波、溶液浸泡等提取离子于溶液中，再进行处理后进行分析。
2.2离子色谱在大气环境监测的应用
大气中的氯化氢含量很低，但是垃圾场等地由于垃圾自燃导致塑料垃圾燃烧，可以使得该区域氯化氢含量相对较高。氯化氢浓度过高，可以导致周围环境改变，长期处在这种环境下对周围居民、生物的健康有着严重的不良影响。传统监测方式很难检测氯化氢含量，采用离子色谱可以准确的测定出大气中氯化氢的含量。
其具体的试验方法是：首先进行采样，参考《空气和废气监测分析方法》，取2只大型气泡吸收管，分别装入10ml吸收液（2 mmol nahco3、1.3 mmol na2co3），用硅胶管串联后接在大气采样器上，再用硅胶管将微孔滤膜过滤器（孔径0.30 μm）套在吸收管的进气孔上，以1 l/min 流量，采气60 min。采样完毕后，将吸收液转入60 ml聚乙烯瓶中，带回实验室。采用离子色谱对样品进行分析测定。分析条件：阴离子交换柱，淋洗液2 mmolnahco3、1.3 mmol na2co3，流速800 μl/min，温度20.0。c，进样体积20 μl。在检测时，最好选用带有化学抑制柱，灵敏度高、检出限低的离子色谱仪，以增加检测精密度。同时由于仪器在分析中只需要淋洗液、再生液，而不需要其它试剂，因此可节约药品，对环境产生的污染小，利用此方法测定样品时，结果重现性好。采用离子色谱法对大气中氯化氢等有毒有害物质进行监测，方便、快捷，是目前大气环境监测的首选方法。
3.关于离子色谱仪的维护与保养
由于离子色谱仪是精密仪器，其日常维护与保养对于仪器的使用寿命及监测精度都有着重要的影响，因此离子色谱仪要经常用淋洗液冲洗色谱柱，防止分离柱的堵塞、流动项气泡的产生。为了对色谱系统通液维护和柱效活化，在分析中或冲柱时要经常进空白样。另外在进行分析前要确保样品已经进行清洁和处理，以保障仪器安全。
在检测结果出现重叠峰等情况时，说明分离柱收到了污染，要根绝离子色谱仪的维护手册，对分离柱进行清洁，具体的清洁方法按照说明书操作。另外还要经常根据不同品牌、型号的色谱仪说明书对仪器进行日常养护，并通过厂家维护人员的定期维护保障仪器监测精准度。
结论：离子色谱仪的发展为离子色谱在各行业的应用带来了更加广阔的空间，尤其是快速检验能力对于环境监测有着重要的意义。作为我国环境监测中的重要监测仪器，其操作人员的水品对于监测有着一定的影响，操作人员日常的养护及操作必须严格按照离子色谱监测手法进行，对于样品的处理必须严格，以此保障监测数据的真实性，为我国环境监测及保护提供及时有效的监测数据。
参考文献
[1]国家环保局.空气和废气监测分析方法[j].中国环境科学,1995.
[2]张海涛.环境监测新技术应用――离子色谱[j].环保信息,2006,1.
[3]王立新.离子色谱使用与养护[j].仪器分析,2007,4.
[4]赵嘉欣.离子色谱法――污水检测[j].分析化学仪器,2007,12.
【关键词】高效液相色谱；液相检验；医药分析
液相色谱法是一种以液体为流动相的色谱法，高效液相色谱法是现在应用十分广泛的一种液相色谱法，这种方法是20世纪60年代兴起的，经过不断的完善和发展，现已被应用于各个领域。在医药分析领域，液相检验的应用已经普及，而高效液相色谱法作为液相检验中的一种重要手段，也得到了大力的推广与应用，目前实验室最常用的P230高效液相色谱仪。
1高效液相色谱法及其系统构造
高效液相色谱法（High performance Liquid Chromatography，HPLC）是以经典液相色谱法为基础，通过引入气相色谱理论而迅速发展起来的。区别于经典液相色谱法柱效低、时间长的特点，高效液相色谱法采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器等技术，因此其检测有高压、高速、高效、高灵敏度、检验速度快、分辨率高等特点，更适宜于分离、分析热稳定性差、高沸点、有生理活性及相对分子量比较大的物质。
HPLC系统一般由输液泵、进样器、色谱柱、溶剂贮存器、检测器、检测数据记录器等组成。其中输液泵、色谱柱和检测器最为关键。制备型HPLC仪有馏分收集装置。新型HPLC仪增加了微机控制，可进行自动化仪器控制和数据处理。
输液泵性能的好坏直接影响分析结果的可靠性，好的输液泵应具备输出压力高，流量稳定、耐腐蚀，密封性能好，液缸容积小等特点；HPLC进样方式可分为：隔膜进样、阀进样、停流进样、自动进样，进样装置需要：密封性能好，重复性好，死体积小，对色谱系统的压力、流量影响小；色谱柱担负分离作用，是色谱系统的心脏，在选择色谱柱时要注意选择柱效高、选择性好，分析速度快的色谱柱；检测器是把洗脱液中组分的量转变为电信号，其要求线性范围宽、灵敏度高、重复性好、噪音低和适用范围广。
2高效液相色谱的原理及其在液相检验中的应用
2.1高效液相色谱的原理及分类高效液相色谱的原理主要依靠分离机制，其分离方法有多种，相应的分离机制也不同。根据分离机制的不同主要有四种基本类型色谱法：吸附色谱、分配色谱、分子排阻色谱及离子交换色谱法，其他还有胶束色谱法、化学键合色谱法及亲和色谱法等类别。在液相检验中，分离是核心，而色谱是一种分离分析手段。无论是那种分离方法，其分离原理都是一个物理过程，与液相层析的原理相似：将要检测分析的化合物通过进样器放入液相色谱仪，流动相携带着其流过色谱柱，由于不同物质在固定相上的保留时间不同出现的峰高或者峰面积定量以及出峰时间的不同而达到分离，从而或检测药物中不同成分的含量、或分析药效，或测定药物残留物杂质成分的浓度。
2.2药物含量检验中高效液相色谱的应用药物含量检验中定量分析的准确与否，关键在于检测器所产生的信号是否与被测样品的量始终呈一定的函数关系。高效液相色谱仪可使输出信号与样品量最好呈线性关系，这样进行定药物含量测定时既准确又方便。
例如，示差检测法就是用高效液相色谱测定多糖类药物，用电化学检测器检测高效的阴离子交换柱分离出多糖类药物，这种方法优于传统检验法，可直接对低浓度糖作定量分析，不需衍生和样品处理，在节约时间和资金的同时避免了有毒衍生试剂的使用。在检验中不同类型的糖（如单糖、糖胺聚糖、半乳糖、果糖等）适用于不同的离子交换柱。
2.3药效检验中高效液相色谱的应用药物的治疗效果取决于人体对药物的吸收，与药物成分及其代谢物在血液中的浓度有关。随着现代药物的选择性越来越高，所服用的剂量越来越低，这就需要提高药效。现阶段药效临床试验中采用人肝组织，首选高效液相色谱法检测药性药效，对混合物中微量组分进行结构分析，可搭配固定相和流动相以达到最佳分离效果。
例如，用内标法检测血液中药物浓度的总量限度。内标法是高效液相色谱的一种常用测定方法。首选提取血液，然后根据规定的方法配制不含药物的溶液，注入到高效液相色谱仪中，记录为色谱图I，然后再配制含有药物的溶液，以相同的条件注样，记录为色谱图II。然后将图I与图II进行比较，则可以通过杂质峰确认杂质峰的面积，从而达到检验的效果。
2.4药物残留中高效液相色谱的应用通常药物在使用一段时间后在体内产生残留物会影响认得某些生理功能，也就是人们所说的食药三分毒，如何分析药物残留物成分，减少其引起的不必要危害，高效液相色谱法起到了重要的作用。质谱仪是完成药物代谢物毒性鉴定的主要工具，是制药工业中毒理学试验的基础。
3结束语
今后的医药分析检验研究中，我们可以应用高效液相色谱法不受试样挥发性限制等优点，结合其它的先进技术，如色谱――光谱联用、柱切换技术、傅立叶变换红外线吸收光谱联用等，不断提高高效液相色谱在液相检验中的应用。
参考文献
[1]张庆合.高效液相色谱实用手册[M].化学工业出版社,2008年.
[2]陈立仁.高效液相色谱基础与实践[M].科学出版社,2001年.
[3]于世林.高效液相色谱方法及应用（第二版）[M],化学工业出版社，2005年.
[4]董玉中，陈萍.高效液相色谱法测定芩连口服液中黄芩苷的含量[J].安徽医药，2005.9(1):38～39.
[关键词]凝胶色谱法 测定 头孢美唑钠 聚合物
中图分类号：TH23 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2015）10-0332-01
头孢美唑钠是一种半合成抗生素，其属于第三代头孢菌素，在临床治疗中有着广泛的应用，在临床应用中发现，这一药物的抗菌性比较强，而且有着良好的药效。通过测定实验发现，为了提高头孢美唑钠的药效，必须控制好其生产的质量，控制高分子杂质的产生，这样可以防止患者的服用这一药物时出现过敏反应，还可以降低药物的毒性，防止药品医疗事故的发生。本文通过建立凝胶色谱法测定头孢美唑钠中聚合物的方法，提高了药品质量检测结果的可靠性，对药品生产安全也有着保障作用。
一、仪器与试药
1、仪器
KGF-02型高分子聚合物测定仪（上海金达生化仪器厂）；WHSOO}JSB伍豪色谱土作站（上海伍豪信息科技有限公司）；色谱柱（40一120 μm葡聚糖凝胶G 10为填料）；玻璃柱（内径1.3一1. 6 cm，柱高30一40 cm） ； BP211 D型分析天平[赛多利斯科学仪器（北京）有限公司]。
2、药品与试剂
头孢美唑钠对照品（批号：MZW S0901，质量分数：91.7%）；注射用头孢美唑钠（批号：090101，090102，090103深圳立健药业股份有限公司）；Naz HPOQ ， NaHz PO、均为分析纯；纯化水为公司自制；葡聚糖凝胶（Sephadex） G-0、蓝色葡聚糖2000（Amersham Bioscience公司）。
二、方法与结果
1、溶液的制备
1.1对照溶液的制备
实验人员首先需要称取适量头孢美唑钠原料，然后加入纯化水进行溶解，将其制备为1mL溶液含0.2mg头孢美唑的对照溶液。这一过程主要是定量稀释，对精确度有着较高的要求。
1.2供试品溶液的制备
采用精密的仪器，称取0.2g注射用头孢美唑钠，然后将其置于10mL的容量瓶中，再加入一定量的纯化水进行稀释，达到规定的刻度后做摇匀处理。这一过程要求研究人员必须规范操作。
2、色谱条件
色谱柱为葡聚糖凝胶G-10柱（40一120μm，柱内径1.3一1. 6 cm，柱高30一40 cm）；流动相A为pH7. 0的0. 02 mol/L磷酸盐缓冲液[0. 02 mol/LNaz HPOQ -0. 02 mol / L NaH2 PO4（体积比61： 39 ） ]，流动相B为纯化水；流速为1.5 mL/min；检测波长为254 nm；进样量为200μL。
3、系统适用性试验
精密称取蓝色葡聚糖2000适量，加纯化水定量稀释成质量浓度为0. 1 mg/mL的溶液，精密量取200 μL，注入液相色谱仪，分别以流动相A，B进行测定，记录色谱图。按蓝色葡聚糖2000峰计算理论塔板数应不低于700，拖尾因子应小于2. 0。在2种流动相系统中蓝色葡聚糖2000的保留时间的比值应在0. 93一1. 07之间，对照溶液主峰、供试品溶液中聚合物峰与相应色谱系统中蓝色葡聚糖2000峰的保留时间的比值均应在0. 93一1. 07之间。称取注射用头孢美唑钠约0. 2 g，置10 mL容量瓶中，用1 mg/mL的蓝色葡聚糖2000溶液溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取200μL注入液相色谱仪，用流动相A进行测定，记录色谱图。聚合物峰高与单体间，及聚合物之间的谷高比（分离度R）应大于2.0。另以流动相B为流动相，精密量取对照溶液200μL，连续测定5次，峰面积RSD值应不大于5. 0% 。见图1、表1（其中A表示蓝色葡聚糖2000在流动相A中，B表示蓝色葡聚糖2000在流动相B中，C表示对照溶液在流动相B中，D表示供试品溶液在流动相A中）。
4、注射用头孢美唑钠中聚合物的测定
取注射用头孢美唑钠约0. 2 g，精密称定，置于10 mL容量瓶中，加纯化水溶解并稀释至刻度，摇匀。立即精密量取200 μL注入液相色谱仪，以流动相A为流动相进行测定，记录色谱图。另精密量取对照溶液200 μL注入液相色谱仪，以流动相B为流动相进行测定，记录色谱图。
5、定量限的测定
分别取头孢美唑钠对照品适量，精密称定，加水稀释制成系列质量浓度的对照溶液。分别精密量取上述溶液200 μL注入液相色谱仪，以流动相B为流动相依法进行测定，以信噪比10： 1为指标，测得定量限为0.034μg/mL。
6、稳定性试验
取同一批注射用头孢美唑钠（批号：090101）约0. 2 g，精密称定，置于10 mL容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。分别于0，1，2，4 h精密吸取200 μL注入液相色谱仪，以流动相A为流动相进行测定，结果聚合物峰面积的RSD值为15. 62%，表明供试品溶液中聚合物的峰面积随放置时一间的延长而增大，因此应在供试品溶液配制后立即进样测定。
三、讨论
在不同的酸碱条件下，头孢菌素发生聚合反应的难易程度不同，一般在强碱与强酸条件下，注射用头孢美唑钠较易发生聚合反应，会生成一定量聚合物，本文采用凝胶色谱法对这一聚合物进行了测定，通过分析注射用头孢美唑钠的高分子聚合物含量，可以为头孢美唑钠的质量检验提供依据。由于头孢菌素在碱性以及酸性条件下会发生聚合反应，所以，在测定的过程中，选用了pH值为7的磷酸盐缓冲液作为流动相。
分子排阻色谱法是一种有效的药物检测方法，其对头孢高分子杂质有着较好的检测效果。在本次实验中，由于头孢美唑钠高分子聚合物对照品不宜获取，而且实验样品中高聚物的数量也比较少，为了提高实验的准确性，需要在配制检测分离度时，加入一定量的葡萄糖，这可以增加聚合物峰值面积，加入量的具体数值可依实际情况稳定，要保证聚合物峰面积达到规定值的2倍左右。通过实验证明，头孢美唑钠聚合物的分离度、拖尾因子以及保留时间符合药品适用性的要求。本次实验采用了封闭式凝胶柱，流相的流速达到了1.5mL/min，在洗脱处理后，聚合物既满足分离的质量要求，也提高了分离的效率，缩短了分析时间。
注射用头孢美唑钠聚合物的形成具有动态性，聚合物样品中高分子杂质的数量与溶液放置的时间有着较大关系，一般放置的时间越长，聚合物的质量分数越大，所以，为了保证测定的准确性，研究人员需要掌握好时间，这样才能提高测定结果的可靠性。当供试品溶液配制中得到聚合物后，一定要及时测定。另外，在测定的过程中，测定方法的选用需要参考《中国药典》的 相关检测要求，一定要考虑高分子杂质的影响。本次试验与研究表明：凝胶色谱法测定注射用头孢美唑钠聚合物，具有操作简单、灵敏度高、可控性强等优点，可以有效提高头孢美唑钠聚合物的质量控制水平。
参考文献
[1] 边原，何林，夏祺悦. 反相高效液相色谱法测定注射用头孢美唑钠的含量[J]. 中国药业. 2010（05）
[2] 蔡尾玉，黄凯文. 高效液相色谱法测定注射用头孢美唑钠中头孢美唑含量[J]. 中国民族民间医药. 2012（04）
[3] 王莹莹，龚莉，王成港，王春龙，陈常青. 头孢美唑钠的体外降解稳定性[J]. 中国新药杂志. 2012（12）