免疫调节剂范文

免疫调节剂篇1

关键词：高效免疫调节剂；人宫颈癌HeLa细胞；增殖

宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤，严重威胁广大妇女的生命和健康。宫颈癌的治疗是一个及其复杂的过程，如何纠正宫颈癌患者的整体免疫系统恢复到正常和协调上来，恢复机体的免疫监视，防止肿瘤的发生、发展和转移是宫颈癌治疗的关键之一。为此，我们采用多价疫苗组成的高效免疫调节剂（high-efficiency immune modulators， HIS），制备成含药血清，对人宫颈癌HeLa细胞进行体外培养，观察HIS对宫颈癌细胞增殖的影响。

1 材料

1.1 动物及细胞株

雄性SD大鼠，体重250-280g，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司（动物中心许可证号：SCXK（湘）2011-0003，动物合格证号：43004700003244，级别：SPF级）。人宫颈癌HeLa细胞人肝癌细胞株Bel-7402，由中国医学科学院医药研究所购进，赣南医学院科研中心传代培养。

1.2 药品和试剂

胎牛血清（Gibco，10099-141）、1640培养基（Gibco，12800-058）、0.25%胰酶（Gibco，25200-056）、MTT Formazan（Sigma，M2003-1G）、PI Annexin Ⅴ apoptosis detection kit（美国BD公司，3018688）

2. 方法

2.1 实验药物配置

HIS（中国发明专利申请号：200810107096.6）由江中肿瘤治疗研究组提供，将其配置成0.3 g/mL，此为中剂量，再分别浓缩、稀释成0.9 g/mL、0.1 g/mL，此为高、低剂量。4℃冰箱保存，大鼠按0.1 mL/100 g腹股沟皮下注射给药，每日一次。

2.2 含药血清制备

将20只清洁级SD大鼠随机分成4组：A、正常对照组；B、HIS低剂量组；C、HIS中剂量组；D、HIS高剂量组。A组每天腹股沟皮下注射生理盐水0.1mL/100g；B、C、D组分别给予低、中、高剂量HIS腹股沟皮下注射0.1mL/100g；连续治疗3天，于末次给药1h后，乙醚麻醉，腹主动脉取血，分离血清。将同组大鼠血清混匀， 56℃，30min水浴灭活，0.22μm薄膜滤菌器过滤，密封冷藏备用。

2.3 宫颈癌细胞HeLa的复苏与培养

HeLa细胞株复苏，CO2孵箱（5%CO2，37℃，95%湿度）传代培养，3代后用于以下实验。

2.4 MTT法检测HIS含药血清对HeLa细胞增殖的影响

将细胞数量调整为5×10/mL接种至96孔培养板，每孔200uL，分4组（正常血清对照组，HIS含药血清低、中、高剂量组），每组8个复孔，培养24h后弃培养液， 加含10%各组相应血清的1640培养液，继续培养24h、48h、72h后，每孔加入MTT 20μL，37℃作用4h，弃培养液，加入二甲基亚砜 100μL，37℃、l0min轻轻摇动培养板，上机检测，计算细胞增殖抑制率。

2.5 AnnexinⅤ/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡

常规培养24h后弃培养液， 加含10%相应血清的1640培养液继续培养48h，弃培养液，胰酶消化，收集细胞，离心，弃上清。取适量AnnexinⅤ Binding Buffer 重悬，计数，调细胞剂量为1×106个/mL，取40uL 细胞（即4×104个）放入离心管中。每管加AnnexinⅤ、PI各2uL，混合后避光放置15min，上机检测。

3 实验结果

3.1 HIS含药血清对HeLa细胞增殖的影响

与对照组比较，各组HIS含药血清对HeLa细胞生长有一定的抑制作用（p

3.2 AnnexinⅤ/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡

实验结果表明，随着HIS剂量的增加，细胞凋亡比例亦相应增加，分别为：（11.26±1.59）%、（17.67±1.72）%、（24.58±1.86）%，与正常血清对照组（6.92±1.07）%比较有显著性差异（p

4 讨论

宫颈癌是指发生在宫颈阴道部或移行带的鳞状上皮细胞及颈管内膜的柱状上皮细胞交界处的恶性肿瘤，其治疗是一个复杂的过程，目前临床常见的治疗手段是手术和放、化疗，其疗效值得肯定，但仍存在着一些弊端和毒副作用。

在动物实验中，我们观察了HIS对S180肉瘤小鼠肿瘤的影响，结果证实HIS可有效增强小鼠免疫功能[1]，同时促进肿瘤细胞凋亡 [2]。本次实验我们制备HIS含药血清，对人宫颈癌HeLa细胞进行体外培养，观察HIS对宫颈癌细胞增殖的影响。结果表明HIS能够有效抑制HeLa细胞的增殖，促进细胞凋亡，这为进一步在临床应用HIS治疗宫颈癌提供了实验依据。

参考文献

[1]常欣峰，宋春花，罗宝英，等. 高效免疫调节剂对S180肉瘤小鼠IL-6及IL-10表达的调节作用[J].长春中医药大学学报，2013，29（12）：958-960.

免疫调节剂篇2

[关键词]中药；他克莫司软膏；卡介菌多糖；白癜风；治疗

[中图分类号]R758.4+1 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455（2012）08-1396-03

白癜风为一种色素生成障碍性皮肤病，皮损处黑素的生成减少或消失。酪氨酸酶是皮肤黑素合成的关键酶，其活性降低可使黑素生成减少。离体及动物实验发现某些中药对酪氨酸酶有激活作用，并可促进黑素细胞增殖及黑素颗粒形成[1-3]。目前，白癜风的发病机制尚不十分清楚，主要认为与自身免疫有关[4]。本文选择对酪氨酸酶有激活作用及对动物致色素作用的中药，组成中药复方配合免疫调节剂（即他克莫司软膏外用、卡介菌多糖注射液）肌注治疗白癜风患者，取得了较好疗效，现报道如下。

1 材料和方法

1.1 临床资料：172例寻常型白癜风患者均为我院2004年10月～2010年10月门诊患者，其中男104例，女68例，年龄16～68岁，平均33.5岁，病程3个月～20年。将患者随机分成两组：治疗组87例，其中散发性46例，局限性41例；进展期45例，稳定期42例；对照组85例，其中散发性42例，局限性43例；进展期44例，稳定期41例。两组间性别、年龄、病程、白癜风分型及分期、皮损严重程度及部位等比较无显著性差异，具有可比性。按照中国中西医结合皮肤性病学会色素皮肤病学组的白癜风临床分型及疗效标准（草案）（2003年修订稿）[5]进行分型及分期。

1.2排除标准：①近2月内未接受皮质类固醇激素、免疫抑制剂、紫外线及光感性药物的系统治疗和外用治疗；②对他克莫司药物有过敏者；③伴有心、肝、肾及血液系统疾病等；④妊娠及哺乳期患者。

1.3方法

1.3.1 治疗方法：治疗组：口服中药方剂，旱莲草12g、女贞子15g、鸡血藤15g、刺蒺藜9g、黑芝麻15g、黄芩9g、苏叶9g、甘草6g，水煎服，每日一剂，分早晚服；0.1%他克莫司软膏(普特彼，安斯泰来制药(中国)有限公司)外用，每日两次；卡介菌多糖核酸注射液（斯奇康，湖南九芝堂斯奇康制药有限公司），2ml肌注，隔日一次。对照组：0.1%他克莫司软膏外用，每日两次；卡介菌多糖核酸注射液2ml肌注，隔日一次。两组治疗期间均每月随访一次，治疗3个月后判定疗效。

1.3.2 安全性评估：根据临床随访、不良反应记录结果予以综合评价。

2 疗效判定标准[5]

每例患者选取一块靶皮损，记录其面积，观察色素恢复情况。痊愈：白斑全部消退，恢复正常肤色；显效：白斑部分消退或缩小，恢复正常肤色的面积占皮损面积≥50%；有效：白斑部分消退或缩小＜50%；无效：白斑无变化或扩大。显效率=（痊愈例数+显效例数）/总例数×100%，总有效率=（痊愈例数+显效例数+有效例数）/总例数×100%。

3 结果

3.3 不良反应：治疗组87例口服中药方剂患者，开始有3例出现轻度的胃肠道反应，有1例轻度恶心，2例轻度腹泻，停用2～3天后症状好转，继续服药未出现明显不良反应。他克莫司外用局部皮肤出现9例一过性瘙痒，分别为治疗组4例和对照组5例，不影响治疗。

3.4 随访：172例患者中有108例疗程结束1年后进行了随访，部分患者出现白斑扩大，其中治疗组4例，均发生在半年后；对照组9例，其中3例发生在半年内，6例发生在半年后。

4 讨论

近年来，自身免疫致病学说受到重视，研究发现白癜风患者血清中的抗黑素细胞IgG、IgM抗体增高，通过补体选择性损伤体外培养的黑素细胞[6]。白癜风患者T细胞亚群存在异常，有研究发现非节段性活动期白癜风患者的外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞数目减少，且发现外周血和培养的CD4+CD25+T细胞上清中TGF-β1降低[7-10]。因而免疫调节和促进黑素生成是白癜风治疗的重要方面。

他克莫司(Tacrolimus)是从土壤真菌（链霉菌）中提取的一种大环内酯类化合物，属于钙调神经磷酸酶抑制剂，具有较强的免疫抑制作用。对T淋巴细胞有选择性的抑制作用，通过抑制Th细胞释放IL-2、IL-3、IFN-γ，并抑制IL-2R的表达，促进TGF-β的分泌而发挥强大的免疫抑制作用[11-12]。此外，他克莫司还可通过影响角质形成细胞而促进黑素细胞向黑素母细胞的生长，创造有利于黑素细胞迁移的环境[13]。经过多年的临床使用，他克莫司用于治疗白癜风已获得较好的评价。卡介菌多糖核酸是将卡介菌经热酚法去除菌体蛋白质，提取的菌体脂多糖等有效活性成分，为含核酸、多糖等十多种免疫活性物质的新一代免疫调节剂，可通过刺激机体的细胞免疫，调节和恢复体内辅T淋巴亚群的平衡，同时起到平衡体液免疫而调节人体免疫功能。

祖国医学认为白癜风的发病机理是六淫外袭，郁于经络；肝郁气滞，气血不和；肝肾不足，水火失济[14]。我们通过前期体外酶学实验、棕色豚鼠动物模型的致色素实验及分子生物学研究[1-3]，找出对酪氨酸酶活性具有激活作用、促进黑素细胞增殖和黑素颗粒生成及上调酪氨酸酶基因表达而促进酪氨酸酶合成的中药，组成中药复方，本方用旱莲草、女贞子、黑芝麻滋补肝肾以壮根本，这三种中药并有乌须发的功用，还有助于白斑的再着色，三者中又以旱莲草对豚鼠皮肤酪氨酸酶mRNA的表达，DOPA阳性细胞和含有黑素的细胞数的上调作用最强，作为主药，女贞子、黑芝麻作为辅药，苏叶发散风寒，刺蒺藜祛风活血，黄芩清热燥湿，以驱外邪，鸡血藤行血补血，作为佐药，甘草调和诸药，作为使药。在此基础上联合具有免疫调节作用的他克莫司及卡介菌多糖核酸治疗白癜风患者，从细胞免疫、体液免疫、黑素生成等多个环节进行治疗，取得了较满意的疗效。经过随访发现其复发率明显低于对照组，提示中西医结合治疗对白癜风患者皮损的稳定起到一定的作用。

[参考文献]

[1]刘之力，涂彩霞. 56种中药乙醇提取物对酪氨酸酶活性影响及动物致色素作用的研究[J].中华皮肤科杂志,2001,34(4):284-285.

[2]涂彩霞，张荣鑫，刘亚玲，等.18味中药乙醇提取物对小鼠B16黑素瘤细胞增殖及黑素生成的影响[J].中华皮肤科杂志,2006,39(7):393-395.

[3]涂彩霞，张荣鑫，马景昕，等. 6味中药乙醇提取物对小鼠B16黑素瘤细胞酪氨酸酶及其相关蛋白1/2 mRNA的影响[J].中华皮肤科杂志,2007,40(2):104-106.

[4]Borderé AC,Lambert J,van Geel N.Current and emerging therapy for the management of vitiligo[J].Clin Cosmet Investig Dermatol，2009，2:15-25.

[5]中国中西医结合学会皮肤性病专业委员会色素病学组.白癜风临床分型及疗效标准（2003年修订稿）[J].中华皮肤科杂志,2004,37(7):44.

[6]李志强，高天文，马翠玲，等. 白癜风患者血清中抗黑素细胞IgG、IgM抗体的检测及补体介导的血清细胞毒反应[J].临床皮肤科杂志,2000,29(5):258-260.

[7]白明辉，王竞，涂彩霞,等.白癜风患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的检测[J].中华皮肤科杂志,2009,42(7):460-463.

[8]王竞，涂彩霞，张蕴颖,等. 白癜风患者外周血CD4+CD25+Foxp3+和CD4+CD25+HLA-DR+T细胞的测定[J].中华皮肤科杂志,2010,43(1):54.

[9]Tu CX,Jin WW,Lin M,et al.Levels of TGF-β(1) in serum and culture supernatants of CD4(+)CD25 (+) T cells from patients with non-segmental vitiligo[J].Arch Dermatol Res,2011,303(9):685-689.

[10]李泓馨，王华，高天文.寻常型进展期白癜风患者外周血CD4+ CD25+调节性T细胞检测[J].临床皮肤科杂志,2008,37(11):714-716

[11]Caproni M,Torchia D,Antiga E,et al. The effects of tacrolimus ointment on regulatory T lymphocytes in atopic dermatitis[J].J Clin Immunol,2006,26(4):370-375.

[12]Berti S,Buggiani G,Lotti T.Use of tacrolimus ointment in vitiligo alone or in combination therapy[J]. Skin Therapy Lett,2009,14(4):5-7.

[13]Lan CC,Chen GS,Chiou MH,et al.Fk506 promotes melanocyte and melanoblast growth and creates a favourable milieu for cell migration via keratinocytes:possible mechanisms of how tacrolimus ointment induces repigmentation in patients with vitiligo[J].Br J Dermatol,2005,153(3):498-505.

[14]边天羽.中西医结合皮肤病学[M].2版.天津：天津科技出版社，1996:502.

免疫调节剂篇3

【摘要】

目的探讨三叶黄合剂对正常小鼠和免疫抑制小鼠细胞免疫功能的影响。方法用三叶黄合剂给正常小鼠和环磷酰胺（CTX）免疫抑制小鼠灌胃，然后用称重法检测小鼠胸腺、脾重量，用中性红比色法检测巨噬细胞活性，用RIA法检测白细胞介素-2（IL-2）含量，用MTT法检测NK细胞活性和T淋巴细胞增殖功能。结果三叶黄合剂对正常小鼠胸腺、脾重量和细胞免疫功能无显著影响，对CTX的免疫抑制作用有显著的抵抗作用，能增加免疫抑制小鼠胸腺和脾的重量，增强巨噬细胞的吞噬作用，促进IL-2分泌，增加NK细胞活性和T淋巴细胞增殖功能。结论三叶黄合剂对正常小鼠的细胞免疫功能无显著影响，但能抵抗CTX对小鼠细胞免疫功能的抑制作用。

【关键词】 三叶黄合剂 巨噬细胞 白细胞介素-2 T淋巴细胞 NK细胞

三叶黄合剂是根据中医基本理论及方剂组方原则提出的、以治疗乙型肝炎病毒感染为主的自拟方（以中药学家邓家刚教授为首的专家组拟定），由三姐妹、叶下珠、绞股蓝、黄芪、白术、田七等中草药制成，有解毒、利湿化瘀、益气健脾、扶正护肝之功。体外研究表明，三叶黄合剂对2215细胞分泌HBsAg和HBeAg均具有一定的抑制作用［1］。为探索其对正常或免疫抑制小鼠细胞免疫功能有无调节作用，我们研究了三叶黄合剂对小鼠细胞免疫功能的影响。现报道如下。

1 材料与仪器

1.1 动物昆明种小鼠120只，雌雄兼用，体重（20±2）g，广西中医学院实验动物中心提供。

1.2 药物与试剂三叶黄合剂，为三叶黄合剂水煎剂（低压浓缩至3.3 g生药/ml），4℃冰箱保存，应用时用蒸馏水配成所需浓度。MTT试剂盒：R＆D SYSTEMS产品；ConA（刀豆蛋白A），美国sigma公司产品；RPMI1640，美国GIBCO公司产品；IL-2试剂盒（125I-IL-2RIA），北京北方生物技术研究所产品；环磷酰胺(CTX)，上海华联制药有限公司产品；YAC-1细胞株：本院药理教研室保存；新生牛血清（NCS）：杭州四季青生物工程材料有限公司提供。

1.3 仪器Multiskan MK3型酶标仪，美国Thermo公司产品；Forma 311型CO2培养箱，美国Thermo公司；FJ-2008P型γ放射免疫计数器，西安国营二六二厂产品；722型分光光度计，上海第三分析仪器厂产品；AE260型电子天平，瑞士Mettler产品，B4i型离心机，美国Thermo公司产品。

2 方法

2.1 动物分组及给药方法实验动物随机分为12组，每组10只（其中6组用于检测胸腺、脾重量和巨噬细胞吞噬功能，6组用于检测其它指标）。第1组为对照组，用生理盐水灌胃，每鼠0.4 ml·d-1；第2组为药物对照组，每鼠用三叶黄合剂10 g·kg-1·d-1灌胃；第3组为模型组，用生理盐水灌胃，每鼠0.4 ml·d-1，于实验的第3，5，7天使用CTX 60 mg·kg-1·d-1，i.p造模；第4组为低剂量组，每鼠用三叶黄合剂5 g·kg-1·d-1灌胃，CTX用法与第3组同，共10 d；第5组为中剂量组，每鼠用三叶黄合剂10 g·kg-1·d-1灌胃，CTX用法与第3组同；第6组为高剂量组，每鼠用三叶黄合剂20 g·kg-1·d-1灌胃，CTX用法与第3组同。给药10 d，末次给药后24 h内检测指标。

2.2 免疫器官重量测定［2］末次给药后5 h脱颈椎处死小鼠，吸取腹腔液后，解剖小鼠取出胸腺和脾脏，于电子天平上称重。免疫器官系数＝免疫器官重量(mg)∕10 g体重。

2.3 巨噬细胞活性测定［3］末次给药后5 h脱颈椎处死小鼠，腹腔内注入5 ml冷Hank液，轻揉腹部数分钟后剖腹，无菌吸取腹腔液，装入含肝素的离心管中，2 000 r·min-1离心10 min，吸弃上清液，再用10％NCS-RPMI1640液5 ml重悬，共2次，调整细胞数为5×106个/ml，加入96孔细胞培养板中，每孔100 μl，每个样品做3个复孔，37℃，5%CO2培养箱中孵育4 h使巨噬细胞贴壁。然后用10％NCS-RPMI1640液洗3次，每孔加0.072%中性红100 μl，37℃、5%CO2继续培养4 h。用PBS（pH 7.4）洗3次。每孔加脱色剂（V/V：无水乙醇／冰醋酸1∶1）100 μl，室温放置1 h后振荡混匀，用酶标仪于A530 nm处测OD值。结果以3个复孔的±s表示。

2.4 血清(IL-2)含量测定末次给药后2 h摘眼球取血，室温下放置1 h，3 000 r·min-1离心10 min分离血清，用125I-IL-2RIA测定血清IL-2含量。有关操作方法按试剂盒说明书进行。

2.5 NK细胞活性测定(MTT法)［4］末次给药后5 h脱颈椎处死小鼠，无菌操作取出脾脏，制备成脾细胞悬液备用。将脾细胞配成1×106／ml细胞悬液作为效应细胞，取对数生长期的YAC-1细胞配成1×105／ml悬液作为靶细胞，效、靶细胞各取100 μl（效靶细胞的比例为10∶1）至96孔培养板中，每个样品做3个复孔，同时设不加靶细胞的效应细胞对照孔和不加效应细胞的靶细胞对照孔各3孔，置37℃、5 % CO2、相对湿度为100％培养箱中培养4 h，每孔加入10μl MTT溶液（5 mg/ml），再培养4 h，离心，弃上清，用PBS洗1次以除去效应细胞和被杀伤而脱落下来的靶细胞， 加入30％DMSO 100 μl，振荡后静置20 min， 用酶标仪于波长A570 nm处测OD值， 结果以3个复孔的±s表示NK细胞活性。计算方法为：NK细胞活性（％）= ［1－实验孔OD值－效应细胞孔OD值］/靶细胞孔OD值%×100%。

2.6 T淋巴细胞增殖反应测定(MTT 法)［5］将上述制备好的脾细胞配制成5×106／ml脾细胞悬液，台朌蓝染色检测细胞存活率＞95％。取脾细胞悬液100 μl 加入96 孔细胞培养板内，每个样品做3个复孔， 加入终浓度为5 μg/ ml的ConA液10 μl（同时设不加ConA的对照孔）， 置37℃、5％CO2、相对湿度为100％的CO2培养箱中培养44 h，加10 μl MTT 溶液（5 mg/ml），继续培养4 h，加入30％DMSO 100 μl，振荡后静置20 min，用酶标仪于波长A570 nm处测OD值，结果以3个复孔的±s表示。

2.7 统计分析计量数据以±s表示，采用华西医科大学的PEMS 3.1 for Windows统计软件进行t检验，P值表示差异有无显著性。

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3 结果

3.1 三叶黄合剂对小鼠免疫器官（胸腺、脾脏）重量的影响从表1可见，正常对照组与三叶黄合剂组比较，胸腺指数和脾指数差异均无显著性（P＞0.05）；三叶黄合剂大、中、小3个剂量组均能显著提高CTX免疫抑制小鼠的胸腺指数和脾指数，与CTX组比较差异有显著性或有高度显著性(P＜0.05或P＜0.01)，表明三叶黄合剂对正常小鼠的免疫功能无明显影响，而对免疫抑制小鼠的免疫功能有显著的提高作用。3个剂量的三叶黄合剂均基本能将免疫抑制小鼠的免疫功能提升到正常水平，除小剂量三叶黄合剂组与正常对照组比较P＜0.05外，大、中剂量三叶黄合剂组与正常对照组比较P＞0.05。表明大、中剂量三叶黄合剂基本上能将受一定剂量CTX免疫抑制小鼠的免疫功能调节至正常水平。从表1还可看到，虽然胸腺指数和脾指数都随剂量的加大而有所提高，但大、中、小3个剂量间比较差异均无显著性（P＞0.05），表明在一定的剂量范围内，三叶黄合剂对小鼠免疫功能的影响随剂量的加大而有所提高，但并无统计学意义。

表1 三叶黄合剂对小鼠免疫器官(胸腺、脾)重量的影响（略）

①第1组与第2，5，6组比较P＞0.05；与第4组比较 P＜0.05；与第3组比较 P＜0.01；②第3组与第4组比较P＜0.05，与其它组比较 P＜0.01；③第4～6组间比较 P＞0.05；④第3组与第4组比较P＞0.05；⑤第3组与其它组比较 P＜0.01

3.2 三叶黄合剂对小鼠IL-2含量的影响从表2可见，正常对照组与三叶黄合剂组比较，血清IL-2含量差异无显著性（P＞0.05）；三叶黄合剂大、中、小3个剂量组均能显著提高CTX免疫抑制小鼠的血清IL-2含量，与CTX组比较差异有高度显著性(P＜0.01)，表明三叶黄合剂对正常小鼠的血清IL-2含量无明显影响，而对免疫抑制小鼠的血清IL-2含量有显著的提高作用。3个剂量的三叶黄合剂均基本能将免疫抑制小鼠的血清IL-2含量提升到正常水平，除小剂量三叶黄合剂组与正常对照组比较差异有高度显著性外(P＜0.01)，大、中剂量三叶黄合剂组与正常对照组比较差异均无显著性（P＞0.05）。从表2还可看到，血清IL-2含量随三叶黄合剂的剂量增加而提高，呈现出明显的量-效关系。

表2 三叶黄合剂对小鼠血清IL-2含量的影响（略）

①第1组与2，5，6组比较P＞0.05；与第3，4组比较P＜0.01；②第3组与4组比较P＞0.05，与其它组比较P＜0.01；③第4组与第5，6组比较P＜0.01，与第5，6组比较P＞0.05

3.3 三叶黄合剂对小鼠淋巴细胞增殖反应、NK细胞活性和巨噬细胞活性的影响从表3可见，正常对照组与三叶黄合剂组比较，淋巴细胞增殖反应、NK细胞活性和巨噬细胞活性差异均无显著性（P＞0.05）；三叶黄合剂大、中、小3个剂量组均能显著提高CTX免疫抑制小鼠的淋巴细胞增殖反应、NK细胞活性和巨噬细胞活性，与CTX组比较差异有显著性或有高度显著性(P＜0.05或P＜0.01)，表明三叶黄合剂对正常小鼠的淋巴细胞增殖反应、NK细胞活性和巨噬细胞活性无明显影响，而对免疫抑制小鼠的T淋巴细胞增殖反应、NK细胞活性和巨噬细胞活性有显著的提升作用。3个剂量的三叶黄合剂基本上都能将CTX免疫抑制小鼠的免疫功能提升至正常水平，除小剂量三叶黄合剂组的T淋巴细胞增殖反应和NK细胞活性与正常对照组比较差异有显著性或高度显著性外(P＜0.01或P＜0.05)，小剂量三叶黄合剂组的巨噬细胞活性及大、中剂量三叶黄合剂组的和NK细胞活性与正常对照组比较均差异无显著性（P＞0.05）。从表3还可看到，淋巴细胞增殖反应、NK细胞活性和巨噬细胞活性随三叶黄合剂剂量的增加而逐步提升，其中小剂量三叶黄合剂组（第4组）的T淋巴细胞增殖反应与中、大剂量组（第5，6组）比较差异有高度显著性外（P＜0.01），而小剂量三叶黄合剂组（第4组）的NK细胞活性与中、大剂量组（第5，6组）比较差异有显著性外（P＜0.05），但大、中剂量（第5，6组）间比较差异均无显著性（P＞0.05），大，中，小3个剂量三叶黄合剂组（第4，5，6组）对巨噬细胞活性比较差异均无显著性（P＞0.05），表明在一定的剂量范围内，三叶黄合剂对小鼠免疫功能的影响虽随剂量的增加而有增高，但增到一定的剂量后，这种增加减缓。

表3 三叶黄合剂对小鼠T淋巴细胞增殖反应、NK细胞活性和巨噬细胞活性的影响（略）

①第1组与第2，5，6组比较P＞0.05；与第4组比较P＜0.05；与第3组比较P＜0.01；②第3组与第4组比较P＜0.05，与其它组比较P＜0.01；③第4组与6组比较P＜0.05，与第5比较P＞0.05，第5、6组比较P＞0.05；④第1组与第2，5，6组比较P＞0.05；与第3，4组比较P＜0.01；⑤第3组与第4组比较P＜0.05，与其它组比较P＜0.01；⑥第4组与第5，6组比较P＜0.01，第5，6组比较 P＞0.05；⑦第1组与第2，4，5，6组比较P＞0.05；与第3组比较P＜0.01；⑧第3组与第4组比较P＞0.05，与其它组比较P＜0.01；⑨第4～6组间比较P＞0.05

4 讨论

乙型肝炎病毒（HBV）引起肝炎的发生是由于病毒感染后，体内的细胞免疫在杀伤靶细胞以清除病毒感染的同时，造成了肝细胞损伤而发生肝炎。一般认为HBV感染后出现的肝组织慢性炎症重要原因之一是由于机体细胞免疫功能低下［6］。NK细胞作为非常重要的固有免疫系统成分，在抗病毒感染中发挥着重要的作用，并可通过释放细胞因子起到免疫调节的作用。朱培芳等［7］认为外周血NK细胞数减少与乙型肝炎慢性化有关。机体T淋巴细胞分为两个亚群，即CD4+辅助功能亚群(Th/ TDTH)和CD8+抑制及杀伤功能亚群（Ts/ Tc），具有调节整个机体免疫功能的作用。其数量、比例和功能的改变都可能影响着机体的免疫状态。CD4+ /CD8+细胞的比值是监视人体免疫功能，反映机体免疫状态的重要指标，比值失衡可以导致免疫系统紊乱及一系列免疫病理改变［8］。有资料表明［9］，慢性乙型肝炎患者体内CD4+T细胞数减少，而CD8+ T细胞数升高，由此导致了CD4+ /CD8+比值降低。IL-2既可直接抑制病毒基因的表达和复制，又可激活CTL、NK细胞和B细胞，对体液免疫和细胞免疫均有促进作用［10］。

本实验使用CTX制造免疫功能低下小鼠作为动物模型研究三叶黄合剂对小鼠细胞免疫功能的影响，结果显示三叶黄合剂对正常小鼠细胞免疫无明显影响，但能基本恢复CTX免疫抑制小鼠的细胞免疫。三叶黄合剂对CTX免疫抑制小鼠的胸腺指数、脾指数、血清IL-2含量、单核－巨噬细胞吞噬功能、NK细胞活性和T细胞增殖功能均有不同程度的正向调节作用，能使低下的免疫指标在较短时间内基本恢复到正常水平，提示三叶黄合剂对免疫受抑小鼠有较强的正免疫调节作用，推断，通过增强免疫抑制机体的细胞免疫功能可能是三叶黄合剂治疗乙型肝炎的作用机制之一。三叶黄合剂的作用有一定的剂量依赖关系，三叶黄合剂大、中、小剂量均有较好的免疫调节作用，但在一定的剂量范围内，免疫调节作用随剂量的增加而有增高，当增加到一定的剂量后，这种增加的速度逐步减缓。

虽然我们的研究显示三叶黄合剂对免疫抑制小鼠的细胞免疫有较强的正免疫调节作用，但其具体治疗由乙肝病毒感染引起慢性肝炎的作用机制仍有待进一步研究。

参考文献

［1］ 邓家刚，郑作文，王 勤，等.八个中药复方对2215细胞HBsAg和HBeAg分泌的影响［J］.广西中医药，2004，27(4)：43.

［2］ 王 坤，韦鹏涯，傅瑞全，等. 绿素酊对小鼠免疫功能的影响的实验研究［J］.广西医科大学学报，2001，18（6）：833.

［3］ 郑志竑，林 玲. 神经细胞的培养-理论与实践，第1版［M］.北京:科学出版社，2002：194.

［4］ 李波清，孟 玮，王志强，等.红茶菌调节小鼠免疫功能的实验研究［J］.时珍国医国药，2007，18（2）：378.

［5］ 林忠宁，董胜璋，董书芸，等．MTT 法检测T淋巴细胞增殖功能的方法学探讨与应用［J］.中国卫生检验杂志，2000，10(1)：8.

［6］ Bertoletti A， Gehring AJ. The immune response during hepatitis B virus infection［J］.J Gen Virol， 2006，87（6）：1439.

［7］ 朱培芳，周永列，王伯昌．HBeAb及HBcAg均阳性的慢性乙型肝炎患者外周血NK细胞数的研究［J］.江西医学检验，2001 ，19(2)：68.

［8］ Livingston BD， Alexander J， Crimi C， et al. Altered helper T lymphocyte function associated with chronic hepatitis B virus infection and its role in response to therapeutic vaccination in humans［J］.J Immunol. 1999，162(5)：3088.

［9］ 刘 源，韩亚萍，李 军，等．慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞亚群的测定分析［J］.南通医学院学报，2004，24 (2)：140.

免疫调节剂篇4

关键词：牛磺酸；环磷酰胺；免疫抑制；小鼠；抗氧化

Abstract： Taurine is one of the conditionally essential amino acids in the human body and it plays an important role in the physiological functions of the human body. In this research， our purpose was to evaluate the effect of taurine on immune functions and antioxidant capacity in animals. A mouse model of immunosuppression was established by intraperitoneal injection of mice of different ages with cyclophosphamide， and then the immunosuppressed mice were intraperitoneally injected with various doses of natural taurine physically extracted from bovine liver. After 12 hours， we measured immunological indicators and antioxidant parameters and correlated immunological indicators with total antioxidant capacity （T-AOC）. The results showed that taurine at both high and low doses had an immunoregulatory effect and improved antioxidant capacity in immunosuppressed mice of different ages and immune functions and antioxidant capacity in juvenile and old mice administered with taurine reached or exceeded the normal level. Correlation analysis revealed that there was a positive correlation between immune functions and antioxidant capacity in mice.

Key words： taurine； cyclophosphamide； immunosuppression； mice； antioxidant

DOI：10.15922/ki.rlyj.2016.11.001

中图分类号：TS254.9 文献标志码：A 文章编号：1001-8123（2016）11-0001-05

牛磺酸（Taurine，Tau）又称牛黄酸，是一种含硫的氨基酸，同时也是人体必需的营养素和条件性必需氨基酸之一[1]。经相关研究表明，牛磺酸有增加细胞抗氧化、抗自由基损伤以及抗病毒侵害的能力[2]，还可提高人体的免疫力、改善脂肪代谢、抗氧化等多种功能[3-5]，同时牛磺酸还具有增强视力、加快促进大脑发育、缓解疲劳的功能，另外牛磺酸还有一定的抗肿瘤活性等功能。与此同时，经国内外多项实验表明，牛磺酸对人体健康尤其是对新生婴幼儿听力、身高发育、神经系统、体质量等有着重要作用，但是婴幼儿自身合成牛磺酸的能力又极为有限，因此牛磺酸被广泛添加于婴幼儿乳粉和功能性食品中，以弥补母乳的不足[6]。由于国内外目前牛磺酸的提取存在着成本高、环境污染程度大和回收率低等现象，本实验从牛肝中提取天然高纯度牛磺酸并且较为深入地研究其对人体的免疫功能和抗氧化能力的影响。

近些年来，随着我国肉牛养殖业的迅猛发展以及人们饮食结构的逐渐改变，消费者对牛肉的需求量也日益增加，与此同时其副产物产量也随之大量增加，所以充分合理地利用这些副产品，无疑将成为企业增加效益的另一种重要途径。据调查研究发现，目前从我国对于肝脏的加工利用程度来看，肉牛屠宰后的肝脏大部分作为原料销向市场，只有少部分经过简单加工成饲料等，这样既造成宝贵资源的浪费，又污染了环境[7]。因此，基于国内外从牛肝中提取牛磺酸及对其深入研究的报道极少，本实验以牛肝为原料，采用简单的物理方法，从牛肝中提取天然牛磺酸，并且研究了牛磺酸对不同年龄免疫抑制小鼠免疫功能和抗氧化能力的影响，这项研究不仅有助于提高肉牛副产物利用率，而且也为国内外今后研究婴幼儿食品、功能性食品及牛磺酸免疫调节剂的开发提供理论和参考依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

实验所用牛肝脏 沈阳法库的八家子牧场。

挑选饲养、健康无病状的2 岁左右雪花牛10 头集中屠宰后采集肝脏，洗净、沥干，样品在冷冻状态下带回实验室，于4 ℃条件下保存样品。

实验所用动物：健康的昆明系小鼠，雄性、清洁级 辽宁长生生物技术有限公司；SPF级动物实验室饲料（符合试验室动物饲料相关标准） 沈阳市于洪区前民动物实验室饲料厂。

牛磺酸标准品 盐城捷阳精细化工有限公司；环磷酰胺 山西振东泰盛制药有限公司；总抗氧化能力（total antioxidant capacity，T-AOC）检测试剂盒、总超氧化物歧化酶（total superoxide dismutase，T-SOD）检测试剂盒、丙二醛（malondialdehyde，MDA）检测试剂盒、谷胱甘肽过氧化氢酶（glutathione peroxidase，

GSH-Px）检测试剂盒 南京建成生物科技公司；小鼠免疫球蛋白G（immunoglobulin G，IgG）酶联免疫检测试剂盒、小鼠白细胞介素-2（interleukin-2，IL-2）酶联免疫检测试剂盒 美国R&D公司；无水乙醇、活性炭（分析纯试剂） 国药集团化学试剂有限公司。

1.2 仪器与设备

WD2102A酶标仪 北京市六一仪器厂；TD6A高速冷冻离心机 德国Ependoff公司；UV-2100紫外-可见分光光度计 上海龙尼柯仪器有限公司；XH-B涡旋混匀器 北京中西远大科技公司；DNP-9162恒温恒湿培

养箱 精宏（上海）试验设备厂；GFL-70鼓风干燥箱 上海书培仪器有限公司；LDZX-30KBS高压蒸汽灭菌锅 上海申安有限公司；旋转蒸发仪 上海亚荣生化仪器厂。

1.3 方法

1.3.1 牛肝中牛磺酸的提取及测定[8]

将冷冻的牛肝样品解冻，再除去脂肪结缔组织，称取5.0 g，切碎研磨至糜状，加入20 mL蒸馏水充分混匀。将2 mol/L盐酸溶液加入到磨碎后的组织中，将组织液的pH值调节到5.5左右，再将调节后的组织液转移到锥形瓶中，用脱脂棉塞住瓶口，置于50 ℃水浴锅内，加热24 h后取出锥形瓶，再将温度调节到80 ℃，将锥形瓶放入水浴锅，继续恒温提取60 min后取出、冷却，用细纱布过滤，收集滤液。取上述提取液1.0 mL，加入2.0 mL显色剂并用蒸馏水稀释至8.0 mL，于100 ℃条件下水浴加热20 min，显黄色，冷却至室温，再在413.5 nm波长处检测，测定牛磺酸含量。按照式（1）计算提取率。

1.3.2 实验动物分组[9-10]

清洁级健康昆明种小鼠：21 日龄幼年小鼠、10 周龄中年小鼠和12 月龄老年小鼠各28 只，每组7 只，共4 组。

1.3.3 血样的制备

药物干预12 h后，将实验小鼠处死眼球采血，静置时间约1 h，于3 000 r/min离心10 min，取离心后上清液，迅速转移至-80 ℃冰箱保存。

1.3.4 组织样品的处理

无菌条件下，采用断颈椎方式处死小鼠，迅速取出脾脏、胸腺及肝脏组织，精确称取质量，放入液氮，取出所需组织后，快速转移至-80 ℃冰箱保存。检测时于冰水浴条件下，加生理盐水制得10 g/100 mL组织匀浆液，于3 000 r/min离心10 min取上清液备用。

1.3.5 免疫指标的测定[11-13]

1.3.5.1 脏器指数的测定

胸腺和脾脏指数以胸腺、脾脏的质量与小鼠体质量的比值表示。分别按照式（2）、（3）计算胸腺指数、脾脏指数。

1.3.5.2 免疫球蛋白、白细胞介素-2的测定[14]

免疫球蛋白（IgG）、白细胞介素-2（IL-2）含量的测定按照相应试剂盒说明操作，使用酶标仪于450 nm波长处测定。

1.3.6 抗氧化指标的测定[15-17]

T-AOC、SOD、MDA、GSH-Px测定按照相应试剂盒说明操作，使用分光光度计于520 nm波长处比色测定。

1.4 数据处理

使用SPSS 17.0/PC统计软件进行分析，结果用平均值±

标准差的形式表示，显著性检验用方差分析（analysis of variance，ANOVA），各组间数据采用最小显著差数（least significant difference，LSD）法进行比较分析。

2 结果与分析

2.1 牛磺酸对小鼠免疫功能的影响

2.1.1 牛磺酸对小鼠免疫器官指数的影响

Y、M、O分别为幼年组、中年组、老年组。下同。

由图1a可知，幼年组和中年组小鼠注射环磷酰胺后，与空白组比较脾脏指数呈下降趋势，组间数据有显著性差异（P

由图1b可知，幼年、中年和老年3 个年龄小鼠的模型组与空白组比较，小鼠胸腺指数均显著降低

（P

2.1.2 牛磺酸对小鼠血清免疫球蛋白IgG的影响

IgG是免疫球蛋白的最主要的成分，也是血清免疫球蛋白中含量最多的一种[18]。一般情况下，血清免疫球蛋白的含量与年龄有一定关系，机体IgG的含量可表示机体体液免疫水平的高低。对实验小鼠的血清样本进行IgG检测，结果如表2所示。

由表2可知，牛磺酸对小鼠的血清IgG水平具有调节作用，对于中年小鼠，牛磺酸可提高血清IgG水平，但不同剂量对免疫的增强作用无显著差异；对于老年组小鼠，牛磺酸增强免疫力的作用与剂量成正相关；幼年模型组小鼠血清IgG水平升高，而补充一定剂量牛磺酸的小鼠血清IgG含量降低，并趋向于机体正常水平。说明灌胃牛磺酸可以增强机体体液的免疫力，且对免疫的调节是双向的。

2.1.3 牛磺酸对小鼠血清IL-2的影响

由表3可知，各模型组小鼠与空白组比较，模型组小鼠血清IL-2（P

2.2 牛磺酸对小鼠抗氧化水平的影响

由表4～7可知，环磷酰胺可使机体免疫功能受到抑制，导致氧化与抗氧化状态向氧化方向倾斜，诱导机体发生氧化应激，导致损伤机体[20]。小鼠受到免疫抑制剂的刺激后，体内的氧化还原系统失衡，导致T-AOC能力下降，SOD和GSH-Px酶活力降低，MDA含量上升，而灌胃牛磺酸的小鼠T-AOC、SOD和GSH-Px的水平得到提高，MDA含量下降，但不同剂量牛磺酸对不同年龄的影响各不相同。幼年组小鼠灌胃高、低剂量的牛磺酸对机体抗氧化能力的提升效果差异显著，血清中T-AOC水平低于对照组；中年组小鼠两剂量组间抗氧化水平没有显著的差异；老年组小鼠，高剂量牛磺酸对血清中的

GSH-Px、MDA作用效果显著优于低剂量的作用效果。因此，高、低剂量牛磺酸可提高幼年组和老年组的机体抗氧化能力。

2.3 免疫指标与T-AOC的相关性分析

由表8可知，血清IgG与T-AOC存在一定的相关性，幼年组小鼠血清IgG与T-AOC相关性极显著；中年组小鼠血清IgG水平与T-AOC不显著；老年组小鼠血清IgG水平与T-AOC相关性显著。通过相关性分析结果可发现，幼年组和老年组的免疫水平和抗氧化能力有较大的相关性，而中年组相关性较小，可能是由于中年组机体自我调节能力较强，牛磺酸对其影响较弱。

IL-2与T-AOC存在一定的相关性，幼年及老年小鼠IL-2与血清T-AOC相关性显著，中年组小鼠IL-2与其血清T-AOC相关性极显著。通过对免疫指标和总抗氧化能力的相关性分析可以发现，小鼠抗氧化能力升高免疫能力也随之升高。

3 讨 论

本实验通过物理方法对牛肝中牛磺酸进行提取，并测定脾脏、胸腺器官的免疫指标、体液免疫指标血清IgG、细胞因子指标IL-2。结果表明，灌胃牛磺酸可减轻免疫抑制对幼年和中年小鼠脾脏的退化作用，但不同剂量对中年组的效果没有显著差异，牛磺酸可显著抑制老年小鼠的脾脏肥大现象，且高剂量效果优于低剂量。牛磺酸对小鼠的血清IgG水平具有调节作用，对于中年小鼠，牛磺酸可提高血清IgG水平，但不同剂量对免疫的增强作用无显著差异；对于老年组小鼠，牛磺酸的增强免疫力作用与剂量成正相关；幼年模型组小鼠血清IgG水平升高，而补充一定剂量牛磺酸的小鼠血清IgG含量降低，并趋向于机体正常水平，说明灌胃牛磺酸可以增强机体的免疫力，且对免疫的调节是双向的。模型组小鼠血清IL-2水平出现显著降低，而补充牛磺酸的小鼠免疫抑制后IL-2水平没有明显降低，表明牛磺酸可以抵抗环磷酰胺的免疫抑制作用，维持机体免疫功能的稳定，且高剂量效果优于低剂量，但对幼年和中年小鼠两剂量差异不显著；幼年组小鼠灌胃高、低剂量的牛磺酸对机体抗氧化能力的提升效果差异显著，中年组小鼠两剂量组间抗氧化水平没有显著的差异；老年组小鼠，高剂量牛磺酸对其脾脏T-AOC、MDA以及肝脏和血清中的GSH-Px、MDA作用效果显著优于低剂量的作用效果。小鼠的血清IgG、IL-2与T-AOC存在一定相关性。

参考文献：

[1] BIRDSALL T.The arpeutie applications of taurine[J]. Alternative Medical Review， 1998， 3（2）： 128-136.

[2] HUXTABLE R J. Physiological actions of taurine[J]. Physiological Review， 1992， 72（1）： 101-164.

[3] GURER H， OZGUNES H， SAYGIN E， et al. Antioxidant effect of taurine against lead-induced oxidative stress[J]. Archives of Environmental Contamination and Toxicology， 2001， 41（4）： 397-402.

[4] 王芙蓉， 佟建明， 张晓鸣， 等. 牛磺酸对鹌鹑生产性能、免疫功能及抗氧化能力的影响[J]. 食品与生物技术学报， 2011， 30（2）： 190-193.

[5] BBEYRANVAND M R， KHALAFI M K， ROSHAN V D， et al. Effect taurine supplementation on exercise capacity of patients with heart[J]. Journal of Cardiology， 2011， 57（3）： 333-337. DOI：10.1016/j.jjcc.2011.01.007.

[6] 白小琼， 孔德义. 牛磺酸研究进展[J]. 中国食物与营养， 2011， 17（5）： 78-80.

[7] 孙娜. 牛肝中牛磺酸提取纯化工艺研究[D]. 兰州： 甘肃农业大学， 2013.

[8] 龚丽芬， 陈碧娥， 郑志福. 从文蛤提取牛磺酸的工艺[J]. 华侨大学学报（自然科学版）， 2003， 24（3）： 300-304.

[9] 郭杰， 王蓓， 戎瑞雪， 等. 牛磺酸对顺铂所致H22荷瘤小鼠免疫器官及淋巴细胞损伤的保护作用[J]. 食品科学， 2015， 36（5）： 200-204. DOI：10.7506/spkx1002-6630-201505038.

[10] 赵明明， 范秋领. 牛磺酸营养液对小鼠免疫功能影响的研究[J]. 食品与药品， 2011， 13（3）： 97-99.

[11] 黄春喜， 袁建敏， 周淑亮， 等. 牛磺酸对肉仔鸡生长性能、免疫功能及抗氧化能力的影响[J]. 食品与生物技术学报， 2011， 30（2）： 190-193. DOI：10.16303/ki.1005-4545.2009.06.022.

[12] 刘玉芝， 刘艳琴. 牛磺酸对肉仔鸡生产性能和免疫功能的影响[J]. 扬州大学学报（农业与生命科学版）， 2008， 29（4）： 45-48.

[13] 杨小然. 牛磺酸对蛋雏鸭生长性能和血液生化指标的影响[D]. 哈尔滨： 东北农业大学， 2012.

[14] 张和平， 郭军， 李立民， 等. 牛初乳中免疫球蛋白的测定[J]. 中国乳品工业， 2001， 29（2）：22-24.

[15] 李丽娟， 王安， 王鹏. 牛磺酸对爱拔益加肉雏鸡生长性能及抗氧化功能的影响[J]. 动物营养学报， 2010， 22（3）： 696-701. DOI：10.3969/j.issn.1006-267x.2010.03.026.

[16] 王芙蓉， 谢中国， 叶兴乾， 等. 牛磺酸对大鼠铁利用和抗氧化能力的影响[J]. 食品与生物技术学报， 2013， 32（5）： 546-550.

[17] FANG Y J， CHIU C H， CHANG Y Y， et al. Taurine ameliorates alcoholic steatohepatitis via enhancing self-antioxidant capacity and alcohol metabolism[J]. Food Research International， 2011， 44（9）： 3105-3110. DOI：10.1016/j.fooddres.2011.08.004.

[18] 曾得寿， 黄冠庆， 高振华， 等. 牛磺酸对动物免疫功能的影响[J]. 饲料工业， 2007， 28（5）： 20-23.

[19] MOCHIZUKI H H， YOKOGOSHI H. Increasing effect of dietary taurine on the serunl HDL-cholesterol concentrationin rats[J]. Bioseience Biotechnology Biochemistry， 1998， 62（3）： 578-579.

[20] TMK M， NAH S A R. Cytoprotective effects of DL-alpha-lipoic acid or squalene on cyclophosphamide-induced oxidativeinjury： an experimental study on rat myocardium， testicles and urinary bladder[J]. Food and Chemical Toxicology， 2010， 48（9）： 2326-2336. DOI：10.1016/j.fct.2010.05.067.

[21] 王清滨. 牛磺酸对投喂高脂饲料草鱼幼鱼生长、抗氧化能力及脂质代谢的影响[D]. 长春： 吉林农业大学， 2014.

[22] 高梦祥， 姚小东. 田螺中牛磺酸的提取工艺研究[J]. 长江大学学报（自然科学版）， 2005， 2（8）： 84-87.

[23] 崔忠艾， 李苹苹， 王道波， 等. 贻贝废弃液中天然牛磺酸的提取研究[J]. 安徽农业科学， 2010， 38（16）： 8671-8673. DOI：10.13989/ki.0517-6611.2010.16.021.

[24] 胡文正. 蛤蚧牛磺酸的提取及常压耐缺氧能力研究[J]. 食品工业， 2014， 35（11）： 179-182.

[25] 章骞， 郑福来， 翁凌， 等. 鲍鱼内脏中天然牛磺酸的提取与检测[J]. 食品安全质量检测学报， 2014（1）： 70-76.

[26] 王瑞芳， 张凌晶， 翁凌， 等. 天然牛磺酸提取新工艺研究[J]. 食品科学， 2009， 30（4）： 111-113.

[27] 杨广会， 周燕霞， 徐晓莉， 等. 鱿鱼中牛磺酸的提取工艺研究[J]. 食品工业科技， 2010， 31（6）： 215-217. DOI：10.13386/j.issn1002-0306.2010.06.013.

[28] 蒋燕， 胡建民， 杨建成， 等. 牛磺酸对胰岛素抵抗高血压大鼠血压和胰岛素敏感性的影响[J]. 中国兽医科技， 2005， 35（6）： 480-483. DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2005.06.016.

[29] 林树梅. CSD基因在大鼠胰岛细胞中的表达及牛磺酸对大鼠糖尿病治疗作用研究[D]. 沈阳： 沈阳农业大学， 2009.

[30] 李和生， 王鸿飞， 陈檬， 等. 蛤蜊中牛磺酸提取的工艺条件研究[J]. 食品技术， 2005， 7（12）： 39-42. DOI：10.13684/ki.spkj.2005.07.012.

[31] 万鹏， 任南南， 蔡冰娜， 等. 香港巨牡蛎中牛磺酸的超声、酶解提取工艺研究[J]. 广东农业科学， 2014， 41（20）： 114-118. DOI：10.16768/j.issn.1004-874x.2014.20.009.

[32] SCHULLER-LEVIS G， MEHTA P D， RUDELLI R， et al. Immunologic consequences of taurine deficiency in cats[J]. Journal of Leukocyte Biology， 1990， 47（4）： 321-331.

[33] SAPRE N， CORCORAN N M. Modulating the immune response to Bacillus Calmette-Guérin （BCG）： a novel way to increase the immunotherapeutic effect of BCG for treatment of bladder cancer？[J]. Bju International， 2013， 112（6）： 852-853.

免疫调节剂篇5

中图分类号：：R392.2文献标识码：ADOI：10.3969/j.issn.10031383.2017.02.030

铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo）为兰科石斛属，其新鲜或干燥茎[1]，干品称为铁皮枫斗，是铁皮石斛主要药用成分，其性味甘，微寒。中医理论认为，铁皮石斛具有益胃生津、滋阴清热等功效，主要用于热病津伤、口干烦渴、胃阴不足、食少干呕、病后虚热不退、目暗不明[2]。现代药理和临床研究证明，铁皮石斛具有调节免疫、调节胃肠功能、降血糖、抗白内障、抗肿瘤、抗肝损伤、促进干燥症病人唾液分泌等作用[3]。目前铁皮石斛广泛应用于恶性肿瘤的辅助治疗、慢性咽炎、慢性胃炎及久病体虚免疫功能低下等诸多疾病，特别是在免疫功能失调疾病中的研究成为热点。本文就铁皮石斛对机体免疫调节作用研究的进展作一综述。

1铁皮石斛生物化学性状

铁皮石斛成分复杂，主要包括多糖、生物碱类化合物、多种氨基酸、菲类化合物等，其中最主要的药物活性成分为多糖。Zha等[4]研究表明，多糖类物质能通过促进肝细胞、脾细胞的增殖并增加IFNγ及IL4的分泌从而提高免疫功能，同时，多糖类物质在抗肿瘤[5]、抗氧化[6]、抗炎[7]等研究方面已经得到证实，多糖具有不同的药用功效，其机制可能与多糖对机体体液免疫和细胞免疫功能的促进和诱生多种细胞因子生成有关。石斛碱是石斛属植物中具有抗肿瘤作用的有效成分之一[8]。此外，铁皮石斛中含有两种菲类化合物鼓槌菲和毛兰素，这两种化合物亦具有抗肿瘤活性。综上，铁皮石斛具有多种生物学活性，其中多糖成分尤为重要。

2铁皮石斛对机体免疫功能的调节作用

细胞免疫和体液免疫是机体免疫应答的重要组成部分，其中主要参与机体免疫应答的细胞是T淋巴细胞和B淋巴细胞免疫，正常情况下，机体主要通过T淋巴细胞和B淋巴细胞间的相互作用维持正常的免疫功能，其中某一淋巴细胞数量或功能的异常，均可能会导致机体的免疫紊乱，从而可出现自身免疫性疾病。细胞因子作为细胞间信号传递分子，主要是由免疫细胞和某些非免疫细胞合成分泌，其功能的异常亦可导致机体的免疫紊乱。

铁皮石斛可通过多条途径、多个层面对免疫系统发挥作用。大量研究证明，铁皮石斛活性多糖不仅能激活T淋巴细胞、B淋巴细胞、巨噬细胞和自然杀伤细胞（NK）等免疫细胞，还能活化补体，促进细胞因子的生成，对机体免疫系统发挥多方面的调节作用。

2.1铁皮石斛对机体的特异性免疫调节作用

铁皮石斛多糖具有调节机体特异性免疫的作用，程东等人[9]将铁皮石斛制剂分为3个剂量组，剂量分别为3.33、6.67和20.00 ml/（kg・BW），连续灌胃30 d后观察小鼠的足跖肿胀度、脾淋巴细胞转化能力、抗体生成细胞数、血清溶血素水平，发现铁皮石斛制剂均能增加各项指标水平，且随着铁皮石斛剂量增加各个观察指标水平亦增加（P

2.2铁皮石斛对机体的非特异性免疫调节作用

巨噬细胞主要功能是吞噬及消化细胞碎片或病原体，并激活免疫细胞，释放不同的细胞因子，参与人体的非特异性免疫。NK细胞是机体的重要免疫监视细胞，其活性的高低可以反映机体非特异性免疫功能状况。程东等人[9]研究发现铁皮石斛制剂不仅能调控机体的特异性免疫，而且能提高小鼠的腹腔巨噬细胞吞噬百分率，增强小鼠巨噬细胞吞噬能力，显著提高小鼠的非特异性免疫。Xio等[17]发现铁皮石斛不仅能升高环磷酰胺模型小鼠外周血白细胞数，增加模型鼠胸腺或脾脏指数，且能增加NK细胞和巨噬细胞活性，促进模型鼠体内细胞转化作用，以对抗环磷酰胺造成小鼠功能低下，提高小鼠的非特性免疫功能。Huang等[18]通过体外研究表明，铁皮石斛多糖及纯化的DOPA1和DOPA2均能够促进RAW 264.7巨噬细胞的细胞活性和NO生成，具有免疫刺激活性。Liu等[19]将不同剂量的铁皮石斛及其多糖灌胃给予健康BALB/c小鼠，发现铁皮石斛及其多糖能显著增强NK细胞活性及巨噬细胞吞噬功能，从而提高BALB/c小鼠非特异性免疫功能，同时亦能促进小鼠脾细胞IFNγ的产生，并且吞噬功能与IFNγ的释放有关。可见，铁皮石斛不仅具有特异性免疫调节作用，同时也能增加巨噬细胞和自然杀伤细胞等非特异性免疫细胞的活性，发挥非特异性免疫调节功能。

2.3铁皮石斛对肿瘤的免疫调节作用

因为铁皮石斛具有增强机体免疫功能和抗癌作用，故临床上常用于恶性肿瘤的辅助治疗。王杰等人[20]将不同剂量组的鲜铁皮石斛提取物多糖及生物碱预处理Lewis肺癌荷瘤小鼠，发现鲜铁皮石斛生物碱、多糖提取物对Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤均有明显的抑制作用，其中多糖高剂量组，生物碱高、中剂量组抑制瘤重效果最为显著，其作用机制可能与提高脾脏指数，调节血清中TNFα、IL2水平，增强体液免疫与细胞免疫有关。姚庆华等[21]用铁皮石斛枫斗颗粒干预肿瘤化疗阴虚患者，观察各项指标发现NK细胞和CD+4/CD+8比值与治疗前相比有显著性差异（P

2.4铁皮石斛对其他疾病的免疫调节作用

持续存在的刺激因素可使NFκB过度表达，导致炎症反应，诱导细胞凋亡，陈泳荪等[23]研究发现铁皮石斛多糖通过抑制高糖诱导的血管内皮细胞（ECV304）NFκB因子的过量表达，从而达到保护糖尿病血管的病变。Sjǒgrens综合征为一种主要影响唾液腺的慢性自身免疫性疾病，Lin等[24]研究发现，铁皮石斛多糖可以通过提高AQP5的表达和保护细胞免受凋亡，平衡促炎因子的紊乱，故可用于治疗Sjǒgrens综合征。IL6和TNFα主要是由单核细胞和淋巴细胞分泌的炎症细胞因子，在机体的免疫调节中起到重要作用，其水平的高低可以判断各种炎症程度，冯霞等人[25]通过铁皮石斛水提取物对SD大鼠胃损伤的研究发现，与对照组比较，适宜浓度的铁皮石斛具有良好的胃损伤预防效果。此外，铁皮石斛多糖还具有抗疲劳[26]、抗衰老[27]、抗肝损伤[28]、促进干燥症病人唾液分泌[29]、抑菌[30]、促进毛发生长[31]、降血压[32]等作用。铁皮石斛由于其有多种成分，因此对较多疾病有调节作用，是否与免疫机制有关，值得在成分和作用的机制上进一步研究。

3小结

综上所述，细胞免疫和细胞因子在免疫性疾病的发生、发展中起到十分重要的作用。铁皮石斛调节机体的免疫力机制之一可能是通过促进机体体液免疫和细胞免疫功能、诱生多种细胞因子来实现的，是一类很有研究价值的中药类免疫调节剂，基于以上机制，可以推测铁皮石斛对慢性肾小球肾炎等其他疾病的细胞免疫和细胞因子具有调控作用，值得进一步研究。

参考文献

[1]鲜小林，陈睿，万斌，等.西南地区野生春石斛资源搜集、保存与观赏利用价值评价[J].西南农业学报，2013，26（3）：11841189.

[2]李桂锋，李进进，许继勇，等.铁皮石斛研究综述[J].中药材，2010，33（1）：150153.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010：265266.

[4]Zha XQ，Zhao HW，Bansal V，et al.Immunoregulatory activities of Dendrobium huoshanense polysaccharides in mouse intestine，spleen and liver[J].Int J Biol Macromol，2014，64：377382.

[5]陈志国，叶松山，范迎，等.金钗石斛多糖提取工艺的优化及对小鼠脾细胞增殖的影响[J].中国实验方剂学杂志，2011，17（15）：2732.

[6]娥珍，黄梅华，辛明，等.铁皮石斛纳米粉与超微粉的物理特性和体外抗氧化活性比较研究[J].热带作物学报，2015，36（12）：21842191.

[7]Lin X，Shaw PC，Sze SC，et AL.Dendrobium officinale polysaccharides ameliorate the abnormality of aquaporin 5，proinflammatory cytok ines and inhibit apoptosis in the experimental Sjogren’s syndrome mice[J].Int Immunopharmacol，2011，11（12）：20252032.

[8]邵曰凤，胡粉青，邹澄，等.石斛属植物化学成分和药理活性研究现状[J].天然产物研究与开发，2012，24（S1）：152157，121.

[9]程东，韩晓英，姚文环，等.铁皮石斛制剂免疫调节作用研究[J].毒理学杂志，2014，44（6）：486488.

[10]刘亚娟，王诗豪，张铭，等.铁皮石斛多糖抗癌及免疫活性研究[J].广州化工，2014，42（10）：5860，65.

[11]李伟，张静，周雯，等.铁皮石斛对免疫抑制小鼠的免疫调节作用和血清细胞因子的影响[J].卫生研究，2016，45（1）：137139.

[12]蔡海兰，黄晓君，聂少平，等.铁皮石斛多糖对RAW264.7细胞分泌TNFα的影响[J].中国药理学通报，2012，28（11）：15531556.

[13]Xiang L，Stephen Sze CW，Nq TB，et al.Polysaccharides of Dendrobium officinale inhibit TNFαinduced apoptosis in A253 cell line[J].Inflammation Research，2013，62（3）：313324.

[14]Meng LZ，Lv GP，Hu DJ，et al.Effects of polysaccharides from different species of Dendrobium （ Shihu） on macrophage function[J].Molecules，2013，18（5）：57795791.

[15]He TB，Huang YP，Yang L，et al.Structural characterization and immunomodulating activity of polysaccharide from Dendrobium officinale[J].Int J Biol Macromol，2016，83：3441.

[16]宋美芳，李光，陈曦，等.两种石斛多糖提高小鼠免疫活性的初步研究[J].中国药学杂志，2013，48（6）：428431.

[17]Xia LJ，Liu XF，Ren FZ，et al.Partial characterization and immunomodulatory activity of polysaccharides from the stem of Dendrobium officinale in vitro[J].Journal of Functional Foods，2012，4：294301.

[18]Huang K，Li Y，Tao S，et al.Purification，Characterization and Biological Activity of Polysaccharides from Dendrobium officinale[J].Molecules，2016，21（6）：701.

[19]Liu XF，Zhu J，Ge SY，et al.Orally administered Dendrobium officinale and its polysaccharides enhance immune functions in BALB/c mice[J].Nat Prod Commun，2011，6（6）：867870.

[20]王杰，葛f华，周萃，等.鲜铁皮石斛提取物抗 Lewis 肺癌机的制研究响[J].中国现代应用药学，2014，31（8）：953957.

[21]姚庆华，陈超，杨维红，等.铁皮枫斗晶对肿瘤化疗患者的辅助治疗作用[J].浙江中医药大学学报，2010，34（4）：505.

[22]金乐红，刘传飞，唐婷，等.石斛多糖抗肿瘤作用的实验研究[J].中国药学杂志，2010，45（22） ：17341737.

[23]陈泳荪，刘文洪.铁皮石斛多糖提取工艺及其对高糖诱导血管内皮细胞NFκB表达干预的研究[J].山西中医学院学报，2011，12（2）：2831.

[24]Lin X，Sze SC W，Tong Y，et al.Protective effect of Dendrobium officinale polysaccharides on experimental sjogren syndrome[J].Journal of Complementary and Integrative Medicine，2010，7（1）：118.

[25]冯霞，赵欣.铁皮石斛水提物对SD大鼠胃损伤的预防效果[J].江苏农业科学，2013，41（7）：294295.

[26]鹿伟，陈玉满，徐彩菊，等.铁皮石斛抗疲劳作用研究[J].中国卫生检验杂志，2010，20（10）：2488.

[27]李利娜.铁皮石斛多糖改善D半乳糖诱导小鼠衰老作用研究[D].苏州：苏州大学，2012.

[28]梁楚燕，李焕彬，候少贞，等.铁皮石斛护肝及抗胃溃疡作用研究[J].世界科学技术中医药现代化，2013，15（2）：233237.

[29]Lin X，Nq TB，Feng YB，et al.Dendrobium candidum extract increases the expression of aquaporin5 in labia glands from patients with Sjǒgren’s syndrome[J].Phytomedicine，2011，18（23）：194198.

[30]李蕾，丁长春，李付惠.两种石斛多糖的抑菌作用研究[J].安徽农业科学，2011，39（10）：57535754.

[31]陈健，戚辉，李金标，等.铁皮石斛多糖促进毛发生长的实验研究[J].中国中药杂志，2014，39（2）：291295.

[32]吴人照，杨兵勋，李亚平，等.铁皮石斛多糖对SHRsp大鼠抗高血压中风作用的实验研究[J].中国中医药科技，2011，18（3）：204205.

（收稿日期：2016-11-16修回日期：2017-04-10）

基金项目：广西中医药专项课题（GZLC1650）

作者简介：梁柳丹，女，医学学士，在读硕士研究生，研究方向：肾内科。Email：

免疫调节剂篇6

口服冻干粉的危害 脾氨肽具有增强免疫的作用，对于经常发烧感冒的症状，是可以起到一定改善的。脾氨肽冻干粉是生物制剂，脾氨肽口服冻干粉是免疫体调节剂，临床上疗效显著，安全性高，目前尚未发现明显的副作用，所以口服并不会有太大不良反应与副作用。当然，服用脾氨肽口服冻干粉时一定要按量服用，如果过量服用可能会出现过敏、皮疹等不适症状。服用脾氨肽口服冻干粉这种产品一般是用于呼吸道感染、支气管炎、肺炎、支气管哮喘、带状疱疹等。如果没有过敏那么就是不会有其他的副作用的，对身体没有什么危害，不用担心的，平时可以继续的口服。不过一定要在医生指导下。

口服冻干粉什么时间吃最好 脾氨肽口服冻干粉一般是在饭前吃的，因为在饭前吃可以修复胃黏膜，还可以促进肠胃的消化，因此在服用冻干粉的时候，最好是在饭前吃。由于冻干粉是一种活性的菌类，因此在服用的时候尽量不要用特别热的开水，否则会影响到冻干粉的效果，而且还会损伤肠道。脾氨肽口服冻干粉是免疫调节剂，服用的时间一般是隔1天或者每天1次，用10ml的凉开水溶解2-4mg口服，主要用于细胞免疫功能低下、免疫缺陷和自身免疫功能性紊乱性疾病，比如反复的呼吸道感染、支气管炎、肺炎、支气管哮喘、咳嗽变异性哮喘以及皮肤病等。如果你是想调节免疫力的话，可以喝口服液，那个药可以双向调节咱们人体的免疫力，没有副作用，安全性更高，而且它增强免疫力的同时还可以治疗过敏，效果很不错的。

口服冻干粉的储存方式 脾氨肽口服冻干粉是治疗细胞免疫功能低下的药，一般的情况下，本品是要密封置2～8℃储藏的，以及放在阴凉透风干燥处，注意避光措施。凡在高温下会变质或变形的药品都应放在2～10℃的低温环境中保存，夏季室内达不到要求时就要将这些药品放在冰箱中冷藏。同时已拆开过包装的而未服完的药品，为防止其变质，也建议放入冰箱中保存。某些中药材在夏季受潮后易生虫，所以放进冰箱保存是有效的方法。有研究表明，温度每升高10℃，药物中的各种材料的化学反应速度就会相应增加3～4倍，强光及高温都容易导致药品变质。

口服冻干粉是什么药 脾氨肽口服冻干粉是从猪脾脏中所提取的多肽，以及核苷酸类物质，是免疫调节剂。这个药物能够触发和增强机体的细胞免疫功能，可以促进机体的免疫平衡。脾胺肽口服冻干粉作为免疫调节剂，主要是可以用于治疗免疫功能低下、免疫缺陷和自身免疫功能紊乱性疾病，比如反复的呼吸道感染、支气管炎、肺炎、哮喘、重症带状疱疹以及牛皮癣等。另外，也可以用于恶性肿瘤患者的放化疗以及改善患者的术后生活质量，可以降低各种原因所引起的感冒、发热或者其它感染的发生率，起到辅助治疗的作用。总之，脾氨肽口服冻干粉主要作为免疫调节剂，增强机体的免疫功能，促进机体的免疫平衡。

免疫调节剂篇7

关键词：实验性变态反应性脑脊髓炎；雷公藤内酯醇；可溶性白介素2受体

中图分类号：R744.5　文献标识码：A 文章编号：1673－7717(2007)07－1394－03

临床上对多发性硬化(multiple sclerosis，MS)主要采用抑制免疫治疗，但由于免疫抑制剂副作用大，治疗后复发率高，因此MS的临床治疗效果不佳。实验性变态反应性脑脊髓炎(experimental allergic encephalomyelitis，EAE)因与MS有共同的免疫及病理特征，故公认为研究MS的理想动物模型。应用中药多靶点作用抑制免疫反应也是一种特异的免疫治疗手段，国内多采用有免疫抑制、抗炎作用的中药或其制剂干预EAE来研究其发病机制。雷公藤内酯醇(Triptolide，Tri)对EAE的研究国内外报道少。本实验旨在探讨Tri对EAE大鼠外周血SIL－2R表达的影响，为Tri临床治疗MS提供试验依据。

1 材料与方法

1．1实验动物与分组

Wistar大鼠38只，雌性，6－8周，体重(200±20)g，购自第三军医大学大坪医院动物中心，清洁级，动物中心许可证号：SCXK(渝)20020003。豚鼠6只雌雄不拘，体重450－500g，购于遵义医学院实验动物中心。大鼠随机分为：正常组，生理盐水和福氏完全佐剂(complete freund's adjuvant,CFA)对照组(NS/CFA组)，左旋咪唑对照组(levamisole，LMS)，Tri对照组，低剂量Tri组(LTri组)，高剂量Tri组(HTri组)，每组5只；模型组8只。

1．2 主要药物及试剂

雷公藤内酯醇由福建省医学科学研究所提供；福氏完全佐剂和左旋咪唑均购自Sigma公司；SIL－2R检测试剂盒购自晶美生物工程(北京)公司。

1．3 动物模型制作

动物适应性喂养1周，采用笔者以往报道的方法制作模型。即将豚鼠脊髓与等体积NS研匀，反复多次冰冻，研磨，制成无黏性匀浆，与等体积CFA混合抽打成油包水样乳剂。模型组和治疗组每只大鼠双后足掌皮下和尾近端注入0.4mL和0.1mL乳剂。注入后即刻、24、48h腹腔注射LMS10mg/kg。在免疫同时及每间隔24h连续16天经腹腔注射2％丙二醇溶解的Tri0.2mg/(kg・d)(LTri组)和0.4me/(kg・d)(HTri组)。NS/CFA组、LMS和Tri对照组分别注入等量NS/CFA、LMS和Tri，用法同模型组。

1．3．1 临床表现将注射日定为第0天，出现临床症状开始评分，2次/日。每组大鼠每日临床积分值由当日该组大鼠临床积分总和除以该组大鼠数目获得。各组大鼠临床总积分均值，均指在出现临床症状到第16天。按Koh报道的评分标准记录：无症状为0分，尾部远端肌张力丧失为0.25分，全尾张力丧失为0.5分，共济失调步态为1.0分，单后肢麻痹为2.0分，双后肢麻痹为3.0分。

1．3．2 取材所有大鼠于免疫后第16天，10％水合氯醛麻醉后心内取血3mL，离心留取血清－20℃待检，用NS及pH7.4的4％甲醛灌注固定，冠状切取大脑视交叉、小脑皮层、脑干、颈膨大、胸髓和腰膨大等部位组织，石蜡包埋，制成5μ.m厚脑和脊髓切片，进行HE染色、Loyez氏髓鞘染色。

1．3．3 SIL－2R检测采用ELISA法，在遵义医学院免疫学教研室检测，检测过程严格按说明书操作。

1．4 统计学方法

数据以均数(x)±标准差(s)表示，输入SPSS12.0软件包进行统计学处理。

2 结　果

2．1 临床表现

正常组、NS/CFA组、Tri对照组、LMS组和HTri组均未出现症状，临床评分均为0分，但LMS组有少食、萎靡、活动度差等。LTfi组于第14天出现症状，临床评分为(O.34±0.24)分；模型组于第13天出现症状，临床评分为(3.27±1.70)分，明显高于HTri和LTfi组(P＜0.01)。

2．2　病理改变

正常组、NS/CFA组、Tri组、LMS对照组和HTfi组HE染色及Loyez氏髓鞘染色未见异常。模型组HE染色见脑和脊髓白质内小血管周围有大量淋巴细胞、巨噬细胞等炎性细胞浸润，形成“袖套”样改变，有胶质细胞结节形成；Loyez氏髓鞘染色见髓鞘结构疏松、部分髓鞘脱失。LTri组HE染色见脑和脊髓白质内小血管周围亦有淋巴细胞、巨噬细胞等炎性细胞浸润，但较模型组明显减少；loyez氏髓鞘染色见部分髓鞘脱失。

2．3　Tri对SIL－2R的影响

3 讨　论

EAE发病机制主要是免疫损伤，研究发现，在EAE和MS的发病中细胞因子对疾病的预后产生决定性影响，Th1表型的细胞因子如IL－2、IL－12、TNF－α、IFN－γ正向调节细胞免疫，使病情加重，而Th2表型的细胞因子-IL－10、转移生长因子－β、IL－4负向调节细胞免疫，使病情缓解。在IL－2存在的情况下，MBP特异性Th细胞产生，针对MBP的特异性和非特异性免疫反应起动，介导免疫反应和免疫病理损伤。对EAE的发生，IL－2发挥关键作用。

近年研究认为，在某些诱因的作用下，自身髓鞘成分MBP被免疫系统识别，抗原提呈细胞捕捉和处理抗原，分泌IL－1，Th1细胞接受抗原信息，表达IL－2受体，分泌IL－2；T细胞本身还可通过自身分泌的细胞因子调节作用，如T细胞产生的IL－2反过来刺激T细胞本身IL－2受体表达和进一步分泌IL－2。鉴于在EAE对照组动物以及非中枢神经组织中很难检测到IL－2，但可以通过检测外周血清中SIL－2R表达的水平来反应IL－2。

IL－2和IL－2R系统在淋巴细胞活化增殖过程中居于举足轻重的地位，因此监测IL－2R的变化对自身免疫病MS辅助诊断、病情转归及预后判断有重要的参考价值，本实验通过检测EAE大鼠外周血清中SIL－2R发现：模型组SIL－2R为(52.84±3.98)mg/mL，较正常组、NS/CFA和Tfi对照组明显增高，有统计学意义。SIL－2R表达增高对EAE的发生和发展起着重要作用。

Tri是雷公藤二萜化合物中免疫抑制作用最强的单体，具有免疫抑制、抗炎等作用，广泛用于治疗多种自身免疫性疾病及移植排异反应。邹小明等，研究结果：不同浓度的Tfi对ConA诱导的小鼠脾脏淋巴细胞合成和分泌IL－2的功能没有明显的影响，但Tri对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞表面IL－2R表达却有明显的抑制，随着Tfi浓度的增加，小鼠脾脏淋巴细胞中IL－2R+细胞数呈递减趋势，Tri发挥抗排斥效应，主要是通过抑制IL－2R的表达，从而使IL－2与IL－2R的相互作用受到影响，最终抑制了淋巴细胞增殖。本实验应用Tri干预EAE发现：高剂量Tri治疗组未出现症状，HE染色和Loyez氏髓鞘染色无异常，其外周血清SIL－2R表达水平较模型组和低剂量Tri组明显降低，差异有显著性；低剂量组出现症状日期比模型组延迟、临床症状轻、病情没有进展。

本研究结论：外周血清的SIL－2R水平增高在大鼠急性EAE中发挥重要作用；高剂量Tri能预防大鼠急性EkE发生，低剂量Tri能减轻EAE病情；Tri的治疗作用机制主要是通过抑制了外周血清的SIL－2R的表达，避免了EAE发生或减轻病情。且这种作用有剂量相关性。

免疫调节剂篇8

多糖( polysaccharides)是由许多相同或不同的单糖以α-或β-糖苷键所连接而成的结构复杂的生物大分子化合物，又称多聚糖，是构成生命的四大基本物质之一。中药所含的化学成分多种多样，其中大多数都含具有药理作用的活性成分之一多糖。现代药理研究表明，在目前已报道的一百余种中药多糖中，大多数具有多方面的作用，如抗感染、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、免疫调节、降血糖及延缓衰老等，且其毒副作用小，有的已广泛应用于临床[1]。而大量实验和临床研究证实，许多具有补益功效的中药所含的多糖具有肯定的调节机体免疫功能作用，如促进免疫细胞增殖与分化，活化免疫细胞，分泌免疫调节因子等等[2]。在当前药物研究趋势由化学合成药物转向天然药物的今天，人们对中药多糖类药物的研究也越来越活跃。本文对近年来补益中药所含多糖成分的免疫调节作用研究进展综述如下。

1对免疫器官的影响

当前关于补益中药多糖对于免疫器官的影响主要集中在胸腺与脾的研究方面，胸腺是培育和选择T细胞的重要中枢淋巴器官，脾脏则含有各种免疫细胞，是机体进行免疫应答的主要场所。大枣多糖大、中、小剂量（400、200、100 mg・kg-1）可使小鼠胸腺皮质显著增厚，脾小节显著增大，而且能使胸腺皮质淋巴细胞数和脾淋巴细胞数显著增加，其中以大、中剂量的大枣多糖对胸腺、脾脏萎缩的拮抗作用为强，结果表明其可明显提高机体免疫功能[3]。而怀山药多糖则可明显拮抗小鼠脾和胸腺的萎缩，使皮质厚度增加，皮质细胞数增加，淋巴细胞数增加，以大剂量400mg・kg-1怀山药多糖作用为优，表明其多糖明显能兴奋免疫器官，增强免疫细胞功能[4]。同样菟丝子多糖、麦冬多糖、太子参多糖、淫羊藿多糖以及枸杞多糖均能对小鼠免疫损伤的胸腺和脾脏具有保护作用，可明显增加胸腺和脾脏重量，脏器指数显著升高。

2对T细胞功能的影响

T细胞既是免疫应答的效应细胞，也参与免疫应答的调节，抗原刺激在体内发生的体液免疫或细胞免疫都是由抗原递呈细胞和Th细胞的相互作用开始的[5]。而正常情况下，CD4+亚群具有辅助和诱导功能，CD8+亚群具有抑制和细胞毒功能，而CD4+/CD8+比值减少是免疫低下、缺陷的重要指征[6]。许多补益中药多糖对机体免疫的调节作用是通过影响T细胞功能来实现的。

徐梓辉等[6]予以薏苡仁多糖50、100、200 mg・ kg-1・ d-1能使免疫低下大鼠T淋巴细胞亚群的CD3、CD4、CD8比例均有不同程度的恢复(P

3对B细胞功能的影响

B细胞是抗体产生细胞，B细肥接受抗原刺激后增殖分化为浆细胞产生抗体，发生抗体依赖或抗体介导的免疫应答，而近来证明B细胞本身也是一种抗原递呈细胞，将捕捉的抗原信息递呈给Th细胞，使抗原聚集，利于免疫应答发生[9]。

研究表明白术多糖对小鼠的免疫增强作用有明显的剂量效应关系，在低剂量(20mg・kg-1・d-1)时对小鼠某些免疫指标无明显影响，但在中、高剂量(50、80 mg・kg-1・d-1)时能提高刺激B细胞分化增殖转变为浆细胞的功能，明显增加机体内抗体水平，增强体液免疫功能[10]。

4对巨噬细胞(MФ)功能的影响

单核巨噬细胞是一类十分重要的抗原递呈细胞，参与摄取、加工、处理、递呈抗原并激发免疫应答。巨噬细胞摄取抗原后在胞内加工，精选出免疫原性多肽，与胞内MHC-II类分子结合成Ag-MHC-II类分子复合物，并将复合物递呈给Th细胞。巨噬细胞通过递呈抗原和分泌各种细胞因子来进行免疫调节。

国外报道甘草有多种免疫增强功能，能激活网状内皮系统及具有抗补体活性。国内有研究发现对正常小鼠予以甘草多糖(GPS)三个剂量（0.25、0.5、1g・kg-1・d-1）分别灌胃和腹腔注射连续10d后测定墨汁廓清指数，结果与对照组比较灌胃高剂量组有显著性差异(P

5对自然杀伤细胞(NK)功能的影响

NK细胞主要存在于血和淋巴组织，其表面没有特异性抗原识别抗体，也不受MHC限制，亦不需要抗体存在和抗原的刺激即能发挥杀伤作用，还能分泌多种免疫调节因子，在机体的免疫监视和免疫调节过程中具有重要作用。前述牛膝多糖(ABP)不仅对T细胞功能有重要影响。

6对红细胞功能的影响

红细胞的免疫功能已经引起了人们的广泛重视，近年来红细胞免疫粘附功能维持正常的重要性已得到证实，其中以清除免疫复合物及促进吞噬细胞功能最为突出。王红玲等研究发现黄精多糖( PSP)对免疫低下患儿及健康儿童红细胞功能有增强作用，在一定浓度范围内PSP可显著增加红细胞C3b受体花环率且呈剂量依赖关系，能降低免疫低下患儿红细胞免疫复合物(IC)花环率。而实验研究表明牛膝多糖(ABP，60mg・ kg-1・d-1)对正常和免疫低下小鼠以及薏苡仁多糖（50、100、200 mg・ kg-1・ d-1）对免疫低下小鼠的红细胞C3b受体花环结合率均有显著提高，也能明显降低免疫复合物花环率（E-ICR)。

7对细胞因子的影响

现代医学研究表明许多细胞因子在机体免疫功能调节过程中发挥了相当重要的作用，主要免疫调节因子有IL-1、IL-2、IL-6、IFN-γ和TNF-α等等，能直接或间接地作用于包括单核巨噬细胞、T细胞、B细胞、NK细胞、中性粒细胞等从而发挥生物学效应。

IL-2、IFN-γ主要由活化的T细胞产生，是机体体液免疫和细胞免疫调节的重要因子。IL-1主要由活化的单核巨噬细胞产生，以促进T、B细胞的活化与增殖。有研究表明大枣多糖(100、200、400mg・ kg-1・d-1)均能增强免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞分泌产生IL-1及提高IL-1的活性，并能促进脾细胞的增殖。黄芪多糖（APS）亦能促进IL-1、IL-2、IL- 3、IL-4及IL- 6的产生，进而增强T淋巴细胞增殖，调节Thl、Th2细胞的分化并维持Thl/Th2比值平衡。

TNF-α由活化的单核巨噬细胞产生后可促进B细胞的分化成浆细胞产生Ig参与体液免疫、增强吞噬细胞的活性等。甘草多糖(GPS)、人参多糖均可诱导TNF-α生成而激活机体免疫系统。

综上所述，补益类中药所含多糖成分对机体免疫系统具有广泛的调节作用，但不同的多糖对免疫系统的调节又各具特点，或以激活T细胞为主，或以活化单核巨噬细胞为主，或增强特异性免疫功能，或增强非特异性免疫功能。目前已有部分多糖在临床中使用效果明显，加之补益类中药资源丰富、品种繁多、成本低廉、毒副作用小等特点，因此，开发相关补益中药多糖成分的天然植物免疫调节剂值得进一步广泛而深入研究。

参考文献

[1]陈靠山.功能多糖的研究进展[J].皖南医学院学报,2005;24(3):161-163

[2]白吉庆,王小平,贺新怀,等.中药多糖的免疫佐剂作用[J].陕西中医学院学报,2005; 28(4):64-65

[3]苗明三.大枣多糖对小鼠气血双虚模型胸腺及脾脏组织的影响[J].中国临床康复,2004;8(27):5894-5895

[4]蒋艳玲.怀山药多糖对衰老小鼠免疫器官组织的影响[J].河南中医药学刊,2002;17(6):18-19

[5]贺新怀,席孝贤.中医药免疫学[M].北京:人民军医出版社,2002:63,94

[6]徐梓辉,周世文,黄文权,等.薏苡仁多糖对实验性糖尿病大鼠红细胞免疫、T淋巴细胞亚群的影响[J].湖南中医学院学报,2001;21(1):17-19

[7]刘彦平,张玉叶.枸杞多糖对小鼠T淋巴细胞亚群和淋巴细胞转化作用的研究[J].青海医学院学报,2000;21(4):4-5

[8]谭允育,康娟娟,王娟娟.沙参对正常小鼠免疫功能影响的实验研究[J].北京中医药大学学报,1999; 22(6):39-41

[9]贺新怀,席孝贤.中医药免疫学[M].北京:人民军医出版社,2002:129