猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫效果试验

【摘 要】为了更好地了解猪口蹄疫O型合成肽疫苗的免疫效果，笔者选择了3个规模养殖场进行试验，每个猪场实验猪分为2组，分别采用免疫猪口蹄疫O型合成肽疫苗和猪口蹄疫O型高效灭活疫苗，用猪口蹄疫O型VP1结构蛋白抗体ELISA试剂盒（VP1-ELISA）和正向间接血凝试验对免疫不同口蹄疫疫苗21d的猪血清进行检测。结果表明，免疫猪口蹄疫O型合成肽疫苗用VP1-ELISA检测，抗体阳性率达到91.66%；免疫口蹄疫O型高效灭活疫苗用正向间接血凝试验检测，免疫合格率为57.5%。由此可见，猪口蹄疫O型合成肽疫苗接种后的免疫效果要优于传统灭活疫苗。

【关键词】猪；口蹄疫；O型合成肽疫苗；VP1-ELISA；正向间接血凝试验

1 前言

口蹄疫是偶蹄动物的一种急性、高度接触性、发热性传染病[1]，给世界畜牧业造成了很大的损失。1974年，国际兽疫局（OIE）将该病列为国际动物卫生法典中18个A类疾病之首，在许多国家和地区都有该病的发生与流行[2，3] 。目前对该病的防制主要是采取禁运、紧急屠宰和强制性免疫接种措施，而疫苗免疫是最主要的也是最经济的手段。细胞灭活苗一直作为控制口蹄疫发生与流行的常规疫苗[4]，虽然细胞疫苗具有较好的免疫效力，但由于细胞苗的抗原生产难以准确定量，而且该产品的自身缺陷使之无法克服过敏等疫苗引起的不良反应和生物安全隐患问题[5]，同时，疫苗的使用也会严重干扰口蹄疫的诊断，故许多科学家把寻找安全性好、免疫力高和抗原覆盖广的新型疫苗作为现在口蹄疫疫苗研究的主要方向。口蹄疫病毒的衣壳蛋白VP1是其最主要的抗原蛋白，具有很强的抗原性，是诱导产生中和抗体的主要成分[6]。猪口蹄疫O型合成肽疫苗采用固相多肽合成技术，在体外人工合成口蹄疫病毒VP1结构蛋白中最主要抗原位点（合成肽），并连接人工T细胞位点，以此作为免疫原与进口佐剂混合配制成油乳剂疫苗，这种疫苗能够很好地预防猪O型口蹄疫的发生。

本试验选择了资兴市的3个规模化养猪场，应用猪口蹄疫O型合成肽疫苗、猪口蹄疫O型灭活疫苗进行免疫试验。通过观察免疫后临床反应和测定免疫前和首次免疫后21d的抗体效价水平，对猪口蹄疫O型普通灭活疫苗与猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫家畜后的免疫反应情况以及抗体水平进行比较。现将试验结果报告如下：

2 材料和方法

2.1 材料

2.1.1 试验猪场

资兴市的3个规模化养猪场，分别是资兴市白廊乡的欧克亮养殖场（A场）、欧全春养殖场（B场）和欧植亮养殖场（C场）。

2.1.2 试验动物

选用品种、来源相同的同一批仔猪（60日龄左右），共240头。

2.1.3 试验疫苗

猪口蹄疫O型合成肽疫苗，中牧实业股份有限公司生产，批号为1012005；猪口蹄疫O型灭活疫苗，国内某知名企业生产，批号为1012002。

2.1.4 检测试剂盒

猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体ELISA诊断试剂盒，批号为201012004，上海优耐特生物医药有限公司生产；口蹄疫O型正向间接血凝试验诊断液，批号为1101008，中国科学院兰州兽医研究所生产。

2.2 方法

2.2.1 试验分组

每个猪场试验猪分为2组，每组40头，分别接种猪口蹄疫灭活疫苗与猪口蹄疫O型多肽苗。

2.2.2 免疫时间与剂量

试验从2011年2月开始，即开始60日龄首免，免疫剂量按说明书使用。

2.2.3 血样采集

首免前采血检测母源抗体水平，免疫后21d采血检测抗体水平。

2.2.4 检测方法

母源抗体和灭活疫苗的抗体使用猪口蹄疫O型正向间接血凝试验检测，按照NY/SY 150-2000操作；免疫合成肽疫苗的抗体使用猪O型口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体ELISA试剂盒检测。

2.2.5 判定标准

按农业部《2011年国家动物疫病强制免疫计划》进行，猪O型口蹄疫抗体正向间接血凝试验的抗体效价达到1∶32即为合格，VP1结构蛋白抗体ELISA检测结果根据试剂盒规定判定。

3 结果

3.1 接种疫苗后的猪群反应

免疫口蹄疫O型传统灭活疫苗的A场、C场分别有2头仔猪出现过敏反应，其他猪无明显的反应，采食量在免疫后前3d稍有点下降。免疫口蹄疫O型合成肽疫苗的猪未出现应激反应，免疫后的采食量无明显的变化。

3.2 母源抗体正向间接血凝试验检测结果

检测未免疫的240份血清，抗体效价达到1∶32的为0份。

3.3 免疫传统灭活疫苗后的抗体检测结果

检测的120份血清中，效价达到1∶32的有69份，免疫合格率为57.5%。其中A场的40份血清中，有25份的抗体效价达到1∶32，免疫合格率为63%；B场的40份中，有20份血清的抗体效价达到1∶32，免疫合格率为50%；C场的40份中，有23份血清的抗体效价达到1∶32，免疫合格率为58%（结果详见表1）。

3.4 VP1结构蛋白抗体ELISA检测结果

4 讨论

（1）从此次试验的整体结果来看，A场和B场的试验结果无显著差异。接种疫苗21d后，免疫口蹄疫合成肽疫苗的总体合格率（91.67%）明显要高于传统的灭活疫苗的合格率（57.5%），同安徽[7]、上海[8]等动物疫控中心所得到的试验结果基本一致，表现出了合成肽苗良好的免疫原性。此次试验只选取了3个场地进行试验，口蹄疫合成肽疫苗还有待进一步推广，以积累更多的数据评价合成肽疫苗的效果。

（2）从接种后的临床反应来看，接种合成肽疫苗的猪均未出现过敏反应，免疫后的采食量无明显的变化，这说明接种合成肽疫苗对猪群基本无副反应，其主要原因是合成肽疫苗的核心抗原为人工合成的多肽，无细胞碎片等杂质，更无小牛血清等异体蛋白。从其他地方使用的情况来看，免疫合成肽疫苗后也很少出现大的不良反应，对妊娠母猪也没有导致流产、早产、死胎和木乃伊胎等情况出现，对产仔成长也没有影响[9]。

（3）试验同时还发现，VP1结构蛋白抗体ELISA诊断试剂盒比较适合用于猪口蹄疫O型合成肽疫苗的抗体检测，不适合传统全病毒灭活疫苗的检测，而正向间接血凝诊断试剂对合成肽疫苗的检测没有一定的规律性。这是因为正向间接血凝诊断试剂的致敏抗原非纯净病毒粒子，而是含大量的细胞蛋白，故而特异性不好；同时，其致敏抗原是全病毒粒子，检测的抗体是全病毒结构的多克隆抗体，通过它们检测结构蛋白中微小的多肽抗体的敏感性显然远远不够。因此，合成肽疫苗的抗体检测必须使用VP1结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验进行检测。

（4）口蹄疫作为世界关注的A类动物传染病，其最主要的防治措施就是进行疫苗免疫，免疫接种后的抗体监测也尤为重要。传统灭活疫苗很难通过首次、二次免疫检测到中和抗体，但可以产生有效的保护力，而免疫群体抗体的有无和高低与保护力之间缺乏相关性，目前还无法对灭活疫苗免疫质量进行有效评价，这是目前猪口蹄疫免疫的一个难点[10]。猪口蹄疫O型合成肽疫苗可用专用的试剂检测出免疫抗体，可以通过抗体检测评价免疫密度和免疫质量，与传统灭活疫苗相比，在免疫血清抗体监测方面显然更有意义。

5 小结

免疫猪口蹄疫O型合成肽疫苗可用VP1-ELISA检测，抗体阳性率达到91.67%；免疫口蹄疫O型高效灭活疫苗用正向间接血凝试验检测，免疫合格率为57.5%。由此可见，猪口蹄疫O型合成肽疫苗接种后的免疫效果要优于传统灭活疫苗。

参考文献

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[2]King A M G， Underwood B 0，Mccahon D， et a1.Biochemi calidentification of viruses causing the 1981 outbreak of foot and mouth in the UK [J].Nature，1981，293：479-480.

[3]张永光，刘湘涛，朱长光等.2006年口蹄疫发生趋势预测分析及其防控对策[J].中国兽医科学，2007，37：619-622.

[4]卢永干.我国口蹄疫灭活疫苗生产工艺的技术进步[J].中国兽医科学，2007，37：948-950.

[5]朱海霞，张强，颜新敏等.猪口蹄疫疫苗免疫接种副反应[J].中国兽医科学，2007，37：1067-1068.

[6]Kitson J D， McCahon D，Belsham g J. Sequence analysis of monoclonal antibody resistant mutants of O foot and mouth disease virus： evidence for the involvement of the three surface expose capaid proteins in four antigen sites [J]. Virology， 1990，179，（1）：26-34.

[7]占松鹤，朱良强，刘华等.猪O型口蹄疫合成肽疫苗及猪O型口蹄疫高效灭活疫苗免疫效果对比试验[J].中国动物检疫，2008，25：22-24.

[8]徐新红，刘佩红，屠益平等.猪口蹄疫O型合成肽疫苗的免疫效果试验[J].规模养猪，2008：40-41.

[9]王政清，邵永昌，厉从志等.猪口蹄疫O型合成肽疫苗的主要特点[J].河南畜牧兽医，2008，29（3）：31-32.

[10]朱凤霞，陈 奎，罗志忠等.猪口蹄疫O型合成肽疫苗的免疫效果调查[J].河南畜牧兽医，2008，29（5）：8-9.

作者简介：

曹任辉 1982年，男，汉族，畜牧兽医专业本科学历，现就职于湖南省资兴市畜牧兽医水产局，为助理畜牧师职称，QQ及邮箱：。