针灸对荷瘤小鼠瘤细胞和红细胞膜脂流动性的影响

［摘　要］　目的：探讨针灸抗肿瘤的机理。方法：针刺、艾灸荷瘤小鼠的“气海”“足三里”穴，检测处理后各组瘤细胞和红细胞膜脂流动性。结果：处理后各治疗组腹水瘤细胞膜脂流动性明显低于模型组(P

［主题词］　肿瘤细胞，培养的/针灸效应；膜流动性/针灸效应

Effects of Acupuncture and Moxibustion on Membrane Lipid Fluidity of Tumor

Cells and Erythrocytes in the Tumor-Bearing Mice

Wang Xuexin1, Wen Jingbo2, Ye Xiangrong3 (1.Chinese PLA 107 Central

Hospital, Yantai 264002, China; 2. Zhaoyuan Municipal Hospital of TCM, Shandong

Province; 3. Shandong University of TCM)

［Abstract］　Purpose　To approach to the mechanism of acupuncture and

moxibustion for anti-tumor. Methods　Acupuncture and moxibustion was given at

“ Qihai” (CV 6) and “Zusanli” (ST 36), and then membrane lipid fluidity

of tumor cells and erythrocytes was detected. Results　After treatment,

membrane lipid fluidity of ascites carcinoma cells in the treatment groups was

significantly lower, and the membrane lipid fluidity of erythrocytes was higher

than that in the model group (P

and moxibustion can decrease biological activity of tumor cells, increase

biological activity of the organism, exploring biological mechanisms of

acupuncture and moxibustion for anti-tumor to a certain degree.

［Key words］　Tumor Cells, Cultured/acup eff； Membrane Fluidity/acup eff

肿瘤的发病机理为正气虚衰、肝脾肾俱亏兼夹气滞血瘀、湿热蕴结，故选取气海、足三里穴，以益气扶正为主兼疏瘀滞的方法，对荷H22肝癌腹水瘤的小鼠进行针灸治疗，观察治疗前后瘤细胞和红细胞膜脂流动性的改变。

1　材料与方法

1.1　实验动物

昆明种雄性小白鼠，体重20±2 g，由山东医科大学动物中心提供，动物饲养在自然光照的动物房里，水、食自由摄取。

1.2　主要仪器及试剂

离心机、RF-540荧光分光光度计(日本岛津)、荧光探剂1，6-二苯基1，3，5己三烯(DPH)(Sigma, USA)(DPH标记液：用四氢呋喃配制成2×10-3mol/L的母液，避光冷藏，实验前用等渗PBS缓冲液稀释成2×10-6mol/L应用液)、PBS缓冲液。

1.3　造模瘤株及模型建立

小白鼠H22肝癌腹水瘤细胞株由山东省医学科学院免疫室提供。从荷H22肝癌腹水瘤种5～7天的小白鼠腹腔内抽取乳白色瘤性腹水，配成瘤活细胞悬液1×107个/ml，于小鼠左下腹腔注射0.2 ml，制成腹水瘤模型。

1.4　分组及处理方法

荷瘤小鼠104只，随机分为模型对照组26只、针刺组22只、艾灸组24只、针灸组23只，并设正常对照组9只。

治疗组小鼠仿人类比取穴“气海”“足三里”。针刺组左手抓握小鼠，右手针刺，每穴行捻转补配合九六补手法(左捻九次为1度，捻转幅度180度)［1，2］1 min,留针3 min;艾灸组左手抓握小鼠，右手持线艾卷(直径 0.7 cm)温和灸，每穴灸3 min；针灸组针刺方法同针刺组，留针期间即灸，起针后续灸，灸疗方法、时间同艾灸组；正常组和模型对照组抓握5 min。以上方法均为每天1次，于接种后第2天开始，治疗9次，于次日检测。

1.5　观察指标及检测方法

将小鼠快速断头，取瘤性腹水和部分样本的全血，抗凝，1500 r/min离心5 min，用生理盐水洗出红细胞和瘤细胞，以PBS 缓冲液配成4×107个红细胞/ml和6×106个瘤细胞/ml的混悬液各2份，分为加DPH标记液的标记管和加PBS缓冲液的空白管，25 ℃温育30 min，去上清液，用PBS缓冲液悬起，用荧光分光光度计以荧光偏振法测膜流动性，流动性以偏振度衡量［2，3］，激发光波长364 nm，发射光波长457 nm。

2　实验结果

2.1　腹水瘤细胞膜脂流动性

模型组膜脂流动性荧光偏振度明显低于各治疗组(P0.05)，见表1。

2.2　红细胞膜脂流动性

模型组小鼠红细胞膜脂流动性荧光偏振度明显高于正常组、针刺组、针灸组、艾灸组，其差异均有非常显著性意义(P

3　讨论

细胞膜脂质流动是细胞膜的主要动力学特性，细胞膜的一切正常功能都有赖于膜结构的完整性和膜脂的相对恒定流动，许多资料表明细胞膜的这一特性与细胞发育、分化、增殖、免疫反应和信息传递等基本功能密切相关。用荧光偏振技术测定细胞膜的流动性，就是把脂质体(生物膜或完整细胞膜)和一些荧光物质温育，这些荧光物质很容易插入脂质双分子层中。目前应用最普遍的DPH，是一种扁平长形分子，在水中几乎不发荧光，而在疏水环境例如脂双层中，荧光可增加1000倍之多，它能插入脂双层中和磷脂分子平行排列。假如烃链不活动，DPH排列整齐，用一种偏振光去激发后，它所发出的荧光也是偏振光；假如烃链活动性很大，则DPH分子从吸收到发射这段时间内，将随着磷脂分子的活动而有不同程度的倾斜或转动，以致发射的荧光偏振度减少。荧光偏振度越小，说明膜脂的流动性越大［4］。

有材料证明，荷瘤机体细胞膜脂流动性较正常者降低［5］。机体细胞膜脂流动性高，则细胞发育、分化、增殖活跃，免疫力强。对红细胞来说，膜脂流动性高，细胞活性强，免疫力强；膜脂流动性低，则机体状态差。对肿瘤细胞来说，膜脂流动性高，则肿瘤细胞发育、分化、增殖活跃，瘤体增生快，易转移、扩散；瘤细胞膜流动性低，则瘤细胞活性低，增殖、浸润、转移力低。本实验荷瘤小鼠经针灸治疗后，红细胞膜脂流动性增高，且以针刺效果较佳，瘤细胞膜脂流动性降低，说明机体可能对肿瘤的免疫抵抗力增强，瘤细胞活性降低，肿瘤得到一定的控制，从而在一定程度上揭示了针灸抗肿瘤的生物学机制。

4　参考文献

1　明・徐凤.针灸大全(金针赋).北京：人民卫生出版社，1958：63

2　法祥光.红细胞膜流动性的测定及其初步应用.中华血液学杂志，1984；(2)：132

3　林克椿，聂松青，蒋惠卿，等.用荧光探剂DPH研究腹水癌细胞膜脂流动性.生物化学与生物物理进展，1981；(6)：32

4　陈奇.中药药理研究方法.北京：人民卫生出版社，1993：974

5　(日)野泽义则著.杨畔农译.生物膜与疾病.北京：人民卫生出版社，1985：139

(收稿日期：2001-10-16，齐淑兰发稿)