抗癌膏穴位贴敷对Lewis肺癌模型小鼠癌细胞周期移行的影响

［摘　要］　目的：探索抗癌膏穴位贴敷治疗癌症的作用机制。方法：用C57BL/6近交系小鼠，瘤细胞悬液皮下接种法造模，造模5日后用抗癌膏贴敷接种部位及“肺俞”穴，隔日治疗1次，治疗7次后，用流式细胞技术进行癌细胞周期分析。结果：抗癌膏使G1期细胞比例显著增加(P

［主题词］　穴位贴敷；肺肿瘤/穴位疗法；细胞周期/药物作用；抗肿瘤药(中药)/药理学

Effects of Acupoint Application of Anti-Cancer Plaster on Cancer Cell Cycles

in Lewis Lung Cancer Model Mice

Sun Liuhe, Yang Qingyou (Department of Acupuncture and Massage, Henan

College of TCM, Zhengzhou 450008, China)

［Abstract］　Purpose　To explore the mechanism of acupoint application of

Anti-Cancer Plaster for treatment of cancer. Methods　Lewis lung cancer model

mice were established by subcutaneous vaccination of suspension of tumor cells

in C57BL/6 inbreeding mice. Five day later, Anti-Cancer Plaster was

applied at the vaccinated position and point “Feishu” (BL 13), once every other

day,for 7 sessions of treatment, and then flow cytometry was adopted to analyse

the cancer cell cycles. Results　After treatment, the cancer cell cycle was

blockedwhile shifting from G1 phase to S phase; the proportion of

cells inG1 phase increased significantly (P

of cellsin Sphase decreased significantly (P

proliferationdecreased significantly (P

Plaster plays an action of anti-cancer through depressing proliferation of

cancer cells.

［Key words］　Acupoint Sticking Therapy; Lung Neoplasms/acupoint ther；

Cell Cycle/drug eff, Antineoplastic Drugs (TCD)/pharmacol

中医认为肺癌是一个因虚而得病，由虚而致实，全身属虚，局部属实的疾病。因此，对于肺癌的中医治疗，近年来基本上趋向于扶正和祛邪相结合。笔者依据中医理论，结合自己多年来的临床经验，以扶正祛邪、软坚解毒为原则，精选药物，制成抗癌膏，贴敷肺俞穴及肺部肿瘤对应之体表部位，配合内服中药治疗肺癌，取得了较好的临床疗效。为了深入研究抗癌膏穴药结合治疗肺癌的作用机制，我们用抗癌膏穴位贴敷对Lewis肺癌模型小鼠癌细胞周期的影响进行了实验研究。

1　材料和方法

1.1　瘤株

Lewis肺癌瘤株购于中国医学科学院药物研究所。

1.2　药物

抗癌膏由西洋参、黄芪、鹿角胶、急性子、水蛭、山慈菇、白花蛇舌草、蚤休、冰片、雄黄等10余味中药组成(以上中药由河南中医学院校医院提供)，按传统工艺制成硬膏，每克硬膏含生药0.12 g。

1.3　动物分组与模型制作

C57BL/6小鼠30只(由郑州大学医学院实验动物中心提供)，雌雄各半，体重20±2 g。“肺俞”穴处(定位参阅《实验针灸学》)［1］并模拟大鼠定位方法)、背部非穴位点(两耳连线中点向下2 cm，旁开1 cm处)及右腋下脱毛、称重后，右腋皮下注射Lewis肺癌细胞悬液0.2 ml(含癌细胞数7×105个)造模，造模后再随机分为模型对照组、穴位贴敷组和非穴位贴敷组，每组各10只。

1.4　实验方法

模型对照组：不予治疗；穴位贴敷组：抗癌膏贴敷接种部位及单侧“肺俞”穴(“肺俞”穴左右交替使用)；非穴位贴敷组：用抗癌膏贴敷接种部位及背部非穴位点(两非穴位点左右交替使用)。于造模5日后多数小鼠长出明显瘤块时开始治疗。每次每鼠接种部位贴直径为8 mm，厚度为0.5 mm的圆形膏药一块，重约45 mg；“肺俞”穴及非穴位点贴直径为2 mm，厚度为1.0 mm的圆形膏药一块，重约18 mg，每次贴24小时，隔日治疗1次，共治疗7次。

各组小鼠均于末次治疗24小时后断颈处死，称取小鼠体重，无菌剥离其皮下瘤块，按流式细胞技术的要求制备单细胞悬液［2］，70%乙醇固定， 经RNA酶处理后，用碘化丙啶染色，然后用FACstar-plus流式细胞仪测定每个细胞的荧光强度，每个样品测10 000个细胞。激光光源用300 mW氩离子激光器，波长为488 nm。测定前用鸡血红细胞校正仪器，使其变异系数稳定在3%以内。数据经专用配套的HP-900/340型计算机及CellFIT程序(2.0　1.2 版本)进行细胞周期分析，并按下式计算增殖指数(PI)［3］。

2　结果

造模28天后各组Lewis 肺癌小鼠癌细胞周期各时相分布情况见表1。表1中G0是暂不增值细胞，G1期又称合成期，是分裂期结束到DNA合成开始前的细胞生长发育时期，G G0+G G1期表示处于G G0、G G1期的细胞数之和；S期即合成期，是从DNA合成开始到DNA合成结束的全过程；G G2期即合成后期，M期即分裂期，G G2+M期表示DNA合成结束到细胞分裂完成的阶段。

表1结果显示：(1)穴位贴敷组和非穴位贴敷组与模型对照组相比均有G G0+G G1期细胞比例增加，S期细胞比例减少，细胞增殖指数下降趋势。(2)穴位贴敷组和非穴位贴敷组相比，G G1期细胞比例显著增加(P

3　讨论

大量的临床研究资料表明，肿瘤的现代治疗手段包括手术、放疗、化疗等，在治疗肿瘤的同时都不可避免地损害了机体的正常功能。中医药治疗具有稳定性高、远期生存率长等特点，尤其在治疗晚期肿瘤、协助肿瘤患者的康复上，恰恰是现代医学肿瘤治疗方法所不具备的。要减少放疗、化疗和手术对机体的损害，提高机体对肿瘤的防御能力，巩固和加强肿瘤的治疗效果，延长患者的生命和保证生存质量，中西医结合是最理想的方法。

中医认为肺癌为本虚标实之病，治疗肺癌既要补全身之虚，又要祛局部之实。我们把肺癌之虚归之于机体阴阳气血之不足，认为实为血瘀、痰凝和毒聚，主张以“扶正祛邪、软坚解毒”为主的治疗原则。选西洋参、鹿角胶、黄芪、急性子、水蛭、山慈菇、白花蛇舌草、蚤休、冰片、雄黄等药，按传统工艺制成硬膏，并加用透皮促进剂增加药物的透皮吸收效率。方中西洋参补气养阴，黄芪益气养血，鹿角胶温补肝肾、补益精血，三药合用可调补机体阴阳气血之不足；水蛭配急性子破血逐瘀，软坚消；山慈菇清热解毒软坚散结又能化瘀；白花蛇舌草、蚤休、冰片清热解毒，消肿止痛；雄黄解毒杀虫，燥湿祛痰。诸药合用，使瘀去、痰化、毒解，正气复而癌块渐消。

穴位贴敷法是中医外治法的一种。药物贴敷于体表穴位，一方面可被腧穴所在部位皮肤直接吸收，进入血脉，发挥药效；另一方面也可通过药物对腧穴的刺激，调节经络系统的功能，激发人体本身的免疫调节机制。这样，中药与腧穴特性相结合，既发挥了二者的协同功效，又降低了抗癌药物的峻猛之性和毒副作用，起到协调阴阳气血的偏盛偏衰、补虚泻实、扶正祛邪的作用。肺俞穴是背俞穴，穴近肺部，为肺脏经气转输之处，又是治疗肺脏疾患的重要腧穴。如《针灸大成》说：肺俞主“瘿气，……寒热喘满，虚烦，传尸骨蒸，肺痿咳嗽，肉痛皮痒……”。现代研究表明，针刺、激光照射或艾灸肺俞穴均可改善哮喘患者肺的通气功能［4］。另外，病灶对应之体表部位贴敷，有助于提高病灶局部血药浓度，利于药效发挥。

本实验表明抗癌膏穴位贴敷可阻断癌细胞DNA的合成和复制，使癌细胞周期移行在G1期到S期之间发生阻滞，造成G1期细胞的堆积，起到抑制癌细胞增殖的作用，并且穴位贴敷的抗癌效应优于非穴位贴敷的抗癌效应，说明穴位有特异性作用。本实验结果为临床治疗肺癌提供了实验依据，也为中医药外用治疗恶性肿瘤提供了一条新思路。

4　参考文献

1　林文注，王佩.实验针灸学.第2版.上海：上海科技出版社，1994：286

2　徐淑云，卞如濂，陈修，等.药理实验方法学.第2版.北京：人民卫生出版社，1994：1428

3　宋根平.流式细胞术的原理和应用.北京：北京师范大学出版社，1992：210

4　何扬子.CO2激光对哮喘患者肺通气功能的作用.中国针灸，1995；15(3)：1

(收稿日期：2001-11-05，齐淑兰发稿)