高效液相色谱法测定复方茶碱麻黄碱片中可可碱含量

【摘要】 目的 建立复方茶碱麻黄碱片中可可碱的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法,以Kromasil C18 (4.6 mm×250 mm,5 μm)为色谱柱;流动相为0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液-甲醇-三乙胺(77∶23∶0.2);检测波长为215 nm;柱温为45 ℃;流速为0.8 mL/min。结果 可可碱在0.309 4~0.722 μg(r=0.999 96)浓度范围内呈良好的线性关系,平均回收率为100.49%,RSD=1.1%。结论 本法可准确、灵敏、快速地测定复方茶碱麻黄碱片中可可碱的含量。

【关键词】 复方茶碱麻黄碱片;高效液相色谱法;可可碱;含量测定

Abstract:Objective To establish a HPLC method for determination of theobromine in Compound Theophylline and Ephedrine Tablet. Method HPLC method was adopted on Kromasil C18 column (250 mm×4.6 mm, 5 μm), and temperature was set at 45 ℃. The mobile phase consisted of 0.05 mol/L KH2PO4- Methanol- Triethanolamine (77∶23∶0.2), with flow rate of 0.8 mL/min. The UV detection wavelength was set at 215 nm. Results The calibration curves of theobromine was linear in the range of 0.3 094~0.722 μg (r=0.999 96), ant the average recovery was 100.49% (n=9) with RSD=1.1%. Conclusion This method is simple, rapid, sensitive and accurate, and can be used for determination of theobromine in Compound Theophylline and Ephedrine Tablet.

Key words:Compound Theophylline and Ephedrine Tablet;HPLC;theobromine;content determination

复方茶碱麻黄碱片(曾用名:复方茶碱片)是一种平喘镇咳的复方制剂,检验标准收载于《国家药品标准》(地方标准上升国家标准)第十四册[1]。该标准中没有各成分的含量测定,尤其没有对安全范围比较小的可可碱的质量控制方法。为了提高药品质量控制水平,本试验建立了用高效液相色谱法对其中的可可碱进行含量测定的方法。

1 仪器与试药

LC-2010AHT高效液相色谱仪(日本岛津制作所);AE240型电子天平(瑞士梅特勒);KQ-400KDB型高功率数控超声波清洗器(功率400W,昆山市超声仪器有限公司)。

可可碱对照品(吉林省食品药品检验所提供,含量为99.9%);复方茶碱麻黄碱片(为市售,批号20051105、20051107、20050601)。磷酸二氢钾、三乙胺为分析纯;甲醇为色谱纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Kromasil C18(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相:0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液-甲醇-三乙胺(77∶23∶0.2);检测波长:215 nm;柱温:45 ℃;流速:0.8 mL/min;进样量:20 μL;理论板数按可可碱计算应不低于2 000。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取可可碱 (99.9%)25.79 mg,置50 mL量瓶中,加流动相超声溶解并稀释至刻度,得可可碱对照品溶液,浓度为515.8 μg/mL。

2.3 供试品溶液的制备

取本品10片,精密称定,研细,精密称取约相当于可可碱12.5 mg,置100 mL量瓶中,加流动相约70 mL,超声处理使溶解并稀释至刻度,摇匀,滤过,弃去初滤液,精取续滤液5 mL,置25 mL量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,即得。

2.4 空白溶液的制备

取按处方比例混合的不含可可碱的自制空白制剂,再按“2.3”项下的制备方法制成空白对照样品溶液。

2.5 线性关系考察

精密量取“2.2”项下的可可碱对照品溶液3、4、5、6、7 mL分别置100 mL量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,配成浓度分别为5.474、20.632、25.790、30.948、36.106 μg/mL的可可碱对照品溶液。按上述色谱条件测定,分别量取20 μL,注入高效液相色谱仪中,记录色谱图。以对照溶液的浓度为横坐标,色谱峰面积为纵坐标,求得回归方程:Y=112 719X+51 638, r=0.999 96。结果表明,可可碱在0.309 4~0.722 μg范围内呈良好的线性关系。

2.6 精密度试验

精密量取“2.2”项下的可可碱对照品溶液适量,加流动相制成每1 mL含可可碱25 μg的溶液,重复进样6次,分别记录峰面积,其峰面积的RSD=0.1%。

2.7 稳定性试验

精密量取同一供试品溶液20 μL,按0、4、8、12、24 h间隔进样,测得可可碱色谱峰面积的RSD=0.07%。结果表明,供试品溶液在室温条件下,24 h内稳定。

2.8 重复性试验

取同一供试品,按“2.3”项下的方法平行制备5份供试品溶液并测定,含量为标示量的均值分别为100.1%、99.8%、99.3%、100.0%、101.0%,RSD分别为0.4%、0.6%、1.0%、0.5%、0.8%。

2.9 加样回收率试验精密称取已知可可碱含量的供试品0.229 2 g,置于100 mL量瓶中,加流动相超声溶解并稀释至刻度,滤过,分别精取续滤液3.5 mL置25 mL量瓶中,共取9份,平均分成3组,分别向每组精密加入“2.2”项下的可可碱对照品溶液适量,使样品溶液中每1 mL含可可碱20、25、30 μg,按“2.1”项下的色谱条件测定。记录峰面积,按外标法计算出可可碱的平均回收率为100.49%(n=9),RSD=1.1%。见表1。表1 加样回收率试验结果(略)

2.10 专属性试验

分别精密量取供试品溶液、对照品溶液和空白样品溶液各20 μL,分别注入高效液相色谱仪,测定。结果在空白样品色谱图中,在与可可碱对照溶液峰相同的保留时间处无吸收峰。见图1。

2.11 样品测定

精取对照品溶液(25 μg/mL)和供试品溶液各20 μL,注入高效液相色谱仪中,记录色谱图,测定并计算3批样品的含量,结果见表2。表2 含量测定结果(略)

3 讨论

对于供试品的溶剂、流动相、检测波长及柱温的选择,参考复方妥英麻黄茶碱片标准项下规定的条件[2],并对流动相比例、柱温、流速分别进行了优选。如果流动相的比例为77.5∶22.5∶0.2,分离效果不好;如果流动相的比例为76∶24∶0.2,则基线下沉。最后采取0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液-甲醇-三乙胺(77∶23∶0.2)流动相系统、柱温45 ℃、流速为0.8 mL/min时,与其他组分分离效果最好。流动相作为溶剂,需在超声条件下进行溶解。本试验结果表明,本法建立的复方茶碱麻黄碱片中可可碱的含量测定方法,可用于复方茶碱麻黄碱片的质量控制方法。

【参考文献】

[1] 国家食品药品监督管理局.国家药品标准(化学药品地方标准上升国家标准)[S].第十四册.2003.100.

[2] 国家食品药品监督管理局.国家药品标准(化学药品地方标准上升国家标准)[S].第十一册.2002.263.