高效液相色谱法测定食品中脱氢乙酸的PH值探讨

摘要：有关食品中脱氢乙酸的测定，最新国标[1]中有气相色谱法、液相色谱法，其中气相色谱法中样品处理非常繁琐，处理步骤较多，很容易造成待测组分损失，导致测定结果偏低，回收率也偏低。液相色谱测定步骤较简单，可操作性较强，但溶液和脱氢乙酸标准溶液PH值不稳定是保留时间变化很大，本文就实际工作出现保留时间出现偏移问题从标液和样液中的PH值出发，找出最合适的PH值，使保留时间相对较稳定。

关键词：高效液相色谱法 脱氢乙酸 PH值

引言：脱氢乙酸（去水醋酸，简称DHAA或DHA）是一种常用的防腐剂，是吡喃的衍生物。脱氢乙酸对水的溶解度小，其盐类脱氢乙酸钠对水的溶解度较大，因此后者也常用来作为防腐剂。脱氢醋酸”用来抑制霉菌和酵母菌的生长。但是，“脱氢醋酸”难溶于水，一般食品行业都用它的盐类来做防腐剂。食品添加剂新国标(GB2760-2011[2])中，“脱氢乙酸及其钠盐”已经列入新国标之中，属于国家允许的食品添加剂，准许添加在熟肉、腌制品等食品内。

一、材料与方法

1.1 主要仪器

日本岛津公司LC-10A,SPD-10A高效液相色谱仪，PH-3C酸度计，全自动电子天平，超声波发生器，离心机。

1.2 试剂

脱氢乙酸（>98%），10%甲酸溶液，0.02mol/L乙酸铵溶液，20g/L氢氧化钠溶液，120g/L硫酸锌溶液，正己烷，脱氢乙酸标准储备液和标准工作溶液（按GB/T23377-2009[3])中4.10和4.11配置）。

1.3、色谱条件：色谱柱：C18柱，250 mm×4.6 mm，5 μm（大连中汇达科学仪器有限公司），流动相;甲醇+0.02mol/l乙酸铵溶液（5+95，体积比），柱温30℃，进样量10μL,检测波长293nm。

1.4 样品处理，本实验选取糕点样品。处理方法完全按GB/T23377-2009中6.1.3章节处理。

2、结果

2.1 标准工作溶液PH调节前后PH值对比：

脱氢乙酸浓度（mg/l） 1 10 50 100 200

标准工作溶液系列PH值 8.05 12.01 12.54 12.90 13.03

调节后PH值 8.05 8.17 7.95 7.09 7.26

由此可见：（1）随着脱氢乙酸的浓度增加，PH值也随之增加。

（2）为验证PH对保留时间的影响，调节PH值范围7-9，C18柱，250 mm×4.6 mm，5 μm（大连中汇达科学仪器有限公司）PH值的范围2-9.5。

2.2 标准工作溶液PH值调节前后保留时间的变化情况

脱氢乙酸浓度（mg/l） 1 10 50 100 200

调节前保留时间（min） 12.130 9.844 8.684 8.025 7.655

调节后保留时间（min） 12.139 12.170 12.280 12.403 12.279

由此可见：（1）随着标准工作溶液溶度增加，PH值增加，保留时间提前。

（2）PH值调节到7-8左右，保留时间还是比较稳定。

（3）随着浓度增加，峰型有所变化和扩展。导致保留时间不能完全吻合。

（4）标准中规定PH值调节到7-8是非常有必要的，也是一个关键控制点。

（5）国标中用氢氧化钠溶液溶解，为提高脱氢乙酸的溶解度，但保留时间偏差较大，造成定性困难。

2.3 回收率和实验线性。

调节PH值后的回归曲线和相关系数，得到了较好的相关系数。

回收率及平行样实验：平行实验，两次独立测定结果绝对差值未超过算术平均值的5%，回收率在90~100%。

三讨论

保留时间不重现可能由多种因素引起，通常还会影响到峰面积的重现性，排除仪器的稳定性外，作用最大的就是流动相的种类和性质了。在本实验中，流动相是固定的，出现保留值的改变可以从局部区域和时间段的流动相改变来解释。

参考文献：

[1]中华人民共和国国家标准，食品中脱氢乙酸的测定（GB/T 5009.121-2003），北京：中国标准出版社，2004

[2]中华人民共和国国家标准，食品添加剂使用卫生标准（GB 2760-2011），北京：中国标准出版社，2011

[3] 中华人民共和国国家标准，食品中脱氢乙酸的测定 高效液相色谱法（GB/T23377-2009），北京：中国标准出版社，2009