高效液相色谱法测定桂花中毛蕊花苷的含量

[摘要] 目的：建立HPLC法测定桂花中毛蕊花苷含量的方法。方法：采用ODSC18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以乙腈-0.2%冰醋酸溶液（10∶35）为流动相，流速1 ml/min，检测波长为310 nm。结果：该方法线性关系良好，毛蕊花苷平均回收率为99.83%，RSD为0.40%。结论：该方法快速、简便、准确、重现性好，可用于桂花中毛蕊花苷的质量控制。

[关键词] 桂花；毛蕊花苷；含量测定；高效液相色谱法

[中图分类号] R927.2 [文献标识码]A[文章编号]1674-4721（2011）07（c）-０09－０2

Determination of verbascoside in Osmanthus fragrans by HPLC

Ding Lixin, WANG Xinhe, DU Yongxiang, CHAI Jiali

College of Pharmacy, Jiamusi University, Heilongjiang Province, Jiamusi 154007, China

[Abstract] Objective: To establish a method for determining the verbascoside in Osmanthus fragrans by HPLC. Methods: ODSC18 column (250 mm×4.6 mm, 5 μm) was used. The mobile phase consisted of acetonitrile-0.2% phosphoric acid（1∶3.5）. The flow rate was 1.0 ml/min. The detection wavelength was set at 310 nm. Rseults: The linear relation was good. The average recovery of verbascoside was 99.83% with RSD=0.40%. Conclusion: The method is rapid, simple, accurate and has good reproducibility. It can be used for the quality control of the verbascoside in Osmanthus fragrans.

[Key words] Osmanthus fragrans; Verbascoside; Determinatim; HPLC

桂花（Osmanthus fragrans）亦称岩桂、九里香、木犀，属木犀科（Oleaceae）木犀属（Osmanthus），是我国特有的常绿阔叶灌木或小乔木经济树种，至今已有2 500多年的栽培史。是我国十大传统名花之一。桂花除了具有很高的观赏价值，还是一种兼药用、食用、香料等多种用途的经济作物。其根、花和果实都可药用除病，性温、味辛、无毒，有化痰、散淤、健脾益肾、舒筋活络的功能。在世界上被称为“全营养食品”[1-4]。

苯丙素苷化合物（phenylpropanoid glycosides，PPGs）是一类含取代苯乙基和肉桂酰基的天然糖苷，广泛存在于双子叶植物中。近年的研究表明,该类化合物作为药用植物的主要有效成分具有抗菌消炎、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、保肝护肝和碱基修复作用[5-7]。因而日益受到植物化学家、药物学家及有机化学家的重视。本文首次建立了桂花中苯丙素苷化合物毛蕊花苷的HPLC的测定法,旨为桂花的开发利用和质量控制提供一定的实验依据[8-9]。

1 仪器与试剂

美国Aglient1100高效液相色谱仪，毛蕊花苷对照品（购自中国药品生物制品检定所），桂花（购于本地药店，经佳木斯大学生药学教研室刘娟教授鉴定），乙腈（色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司），甲醇（色谱纯，天津市光复精细化工研究所），冰醋酸（分析纯，天津市凯通化学试剂有限公司），水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 毛蕊花苷提取物的制备

桂花25 g粉碎后，加入80%乙醇（10倍量），浸泡1 h，在温度为30℃的条件下，超声提取3次，每次20 min，合并提取液，过滤，滤液回收乙醇并浓缩成浸膏。将浸膏加水分散后，用石油醚萃取，取水层，再用乙酸乙酯萃取，回收溶剂，合并滤液，浓缩，得浸膏1.828 g。乙酸乙酯部分进行硅胶拌样后进行常压硅胶柱层析（200~300目），用氯仿：甲醇梯度洗脱。洗脱液浓缩，烘干，得毛蕊花苷样品粉末0.452 7 g。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取毛蕊花苷对照品2 mg置10 ml容量瓶中，加甲醇溶液溶解并稀释至刻度，再精密吸取1 ml，置10 ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成0.02 mg/ml的溶液。

2.3 供试品溶液的制备

称取干燥的样品粉末20.13 mg，置10 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得到待测液。

2.4 色谱条件的选择

色谱柱：ODSC18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-冰醋酸溶液（1∶3.5）（0.45 μm微孔滤膜滤过，用前超声脱气）；检测波长：310 nm；柱温：25℃；流速：1.0 ml/min。在此色谱条件下，精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，测得毛蕊花苷对照品溶液和供试品溶液色谱图，见图1、2。

2.5 标准曲线的制备

精密吸取对照品溶液0.25、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 ml，分别置于10 ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成浓度为0.005、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05 mg/ml的对照品溶液。分别取10 μl对照品溶液进样，按上述色谱条件测定色谱峰面积A，以进样量为横坐标，色谱峰面积A为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=7 779.3X－13.151，r=0.999 7，线性范围为：5~50 μg/ml，见表1、图3。

2.6 精密度试验

精密吸取上述对照品贮备液10 μl，重复进样5次，测定毛蕊花苷峰面积值，其RSD为0.48%。测定结果表明本试验精密度符合有关规定。见表２。

2.7 重复性试验

取供试品溶液样品5份，按照上述色谱条件操作, RSD为0.46%。测定结果表明重现性良好。见表３。

2.8 加样回收率试验

向供试品溶液（0.02 mg/ml）10 ml中加入毛蕊花苷对照品0.1 mg，摇匀。取10 μl重复进样5次，测定平均回收率为99.83%，RSD为0.40%，符合含量测定的要求。见表４。

2.9 毛蕊花苷含量测定结果

按照2.3项下方法进行样品溶液制备。分别准确吸取样品溶液10 μl，注入高效液相色谱仪中，按照上述色谱条件进行测定，结果显示桂花生药中毛蕊花苷含量为1.82%。

3 讨论

《中国药典》（2010版）中尚无针对桂花中毛蕊花苷的含量测定方法。本实验建立的分析方法操作简单、快速，样品无需进行柱前处理即可达到基线分离，10 min内即实现了该指标成分的含量测定，可用于桂花中有效成分的质量控制。

[参考文献]

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（收稿日期：2011-04-01）

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