高效液相色谱法测定氯霉素地塞米松乳膏中氯霉素的含量

摘 要：目的：用HPLC法测定氯霉素地塞米松乳膏中氯霉素的含量，并建立高效液相色谱法测定氯霉素的方法。方法：采用HPLC法，将色谱条件控制在一定范围内，色谱柱为KromasilC18柱为250*4.6mm，5μm；流动相为0.01mol/L的庚烷磺酸钠缓冲液-甲醇（65：35）；检测波长为277nm；流速为1.00mL/min。结果：将氯霉素试剂控制在0.4016-8.032μg，呈现出了较为明显的线性关系，r=0.9999。该实验的加样回收率为98.3%，经过多次试验测得RSD为0.53%。结论：实验证明，用HPLC法测定氯霉素地塞米松乳膏中的氯霉素含量，收到了良好的效果，而且这种方法具有操作简单、结果准确的优点，可以有效的控制氯霉素的含量，使这一药剂发挥出最大的药效。

关键词：HPLC法；氯霉素地塞米松乳膏；氯霉素；含量

氯霉素地塞米松乳膏是由氯霉素与醋酸地塞米松组成的复方外用制剂，临床主要用于治疗急性或亚急性湿疹、皮炎等，有抗菌、抗炎、止痒及抗过敏作用，为提高该医院制剂的质量标准及该产品的质量，建立 HPLC 法测定氯霉素地塞米松乳膏中氯霉素含量测定方法，从而进一步有效控制该药品的质量。

1 仪器与试药

Agilent 1200型高效液相色v仪；Agilent紫外检测器；BT25S赛多利斯电子天平（d=0.01 m）；甲醇为色谱纯；水为纯化水，其它试剂为分析纯。氯霉素对照品（中检所，批号130555-200602，99.4%） ；氯霉素地塞米松乳膏样品（批号120901、120902、120903）山济宁市皮肤病防治院提供。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

本次实验采用的色谱柱为KromasilC18柱，即色谱条件为250*4.6mm，5μm。流动相为0.01mol/L的庚烷磺酸钠缓冲液-甲醇（65：35）。检测波长为277nm，流速是1.00mL/min。在测定氯霉素地塞米松乳膏中的氯霉素含量时，理论上氯霉素应大于3000，氯霉素最高缝与相邻缝的分离度R一般大于1.5。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取氯霉素对照品25mg，醋酸地塞米松对照品25mg置于50mL量瓶中，加甲醇溶解，稀释至刻度，摇匀，制成混合溶液，氯霉素浓度为500μg・mL-1，醋酸地塞米松浓度为50μg・mL-1。

2.3 供试品溶液的制备

精密称取供试品约2.5g置于50mI量瓶中，加甲醇加热溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，置于冰浴中冷却>2h取出后迅速滤过，放至室温，取续滤液作为供试品溶液。

2.4 阴性对照品溶液的制备

实验人员要制备出不含氯霉素的样品，然后将其制备成阴性样品溶液，再在色谱条件下，对样品进行含氯霉素测定，在测定的过程中，可以检验HPLC测定法的准确性，还可以制备出具有重要参考意义的阴性对照品溶液。

2.5 线性关系考察

精密称取氯霉素对照品415.40mg和醋酸地塞米松对照品42.00mg置于50mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配成每1mL含氯霉素8.308mg和醋酸地塞米松0.84mg的溶液，作为储备液。分别精密量取储备液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL，置于50mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别进样10μL，测定峰而积。以含量（X）与峰而积（Y）作线性回归。氯霉素回归方程为Y=16.6825X+58.3130r=0.99996可见氯霉素在166.16-830.80μg・mL-1范围内线性关系良好；醋酸地塞米松回归方程为Y=18.8645X+1.9081，r=0.99995，可见醋酸地塞米松在16.80-84.00μg・mL-1范围内线性关系良好。

2.6 精密度试验

本次实验采取的是精密称量与吸取的方式，在测试的过程中，采用的是用一对照品溶液，而且选择不同的量瓶，分别进行了5次取样试样，对峰面积进行测定后得出：RSD=0.32%。

2.7 稳定性试验

本文对同一批试验品进行了取样试验，并且取样的时间控制在2h一次，共取5次试剂，实验结果得出氯霉素峰值面积RSD为1.5%，经过多次实验可知，样品溶液中氯霉素的稳定性一般为8h，所以，为了保证实验的准确性以及结果的可靠性，实验人员一定要注意时间对实验结果的影响。

2.8 阴性干扰实验

取缺氯霉素和醋酸地塞米松的阴性对照样品，按本法进行测定，结果其色谱图中，在醋酸地塞米松和氯霉素峰位置无色谱峰出现。

2.9 回收率实验

以绝对回收率表示，按处方比例配制各含氯霉素和醋酸地塞米松标示量约为80.0%，100.0%，120.0%的模拟样品各3份，按本法测定高、中、低3个浓度样品，氯霉素的平均回收率为101.02%，RSD为0.99%（n=9）。醋酸地塞米松的平均回收率为101.15%，RSD=1.49%（n=9）。

2.10 加样回收试验

本次实验采用了加样回收法，精密称取已知含量的样品9份，按3个浓度梯度加入一定量的氯霉素对照品，分别按样品测定项下方法测定，计算回收率，结果见表1。

2.11 样品测定

分别精密量取对照品溶液及供试品溶液各10μL注入高效液相色谱仪，氯霉素检测波长为280nm待氯霉素的峰出完，时刻显示6min时，将检测波长转换成240nm作为醋酸地塞米松检测波长，记录色谱图，测定峰面积，以外标法计算样品中氯霉素和醋酸地塞米松的含量。结果见表2。

3 讨论

3.1 检测波长的选择

该制剂中两组分含量相差悬殊，一般多采用240nm作为检测波长。笔者在本实验中采用USP标准（氯霉素的检测波长280nm）检测氯霉素，用240nm检测醋酸地塞米松，在6min时刻变换检测波长，是本法的特点。本法氯霉素保留时间约为3.5min，待氯霉素峰出完后，将检测波长变为240nm检测醋酸地塞米松，醋酸地塞米松的保留时间约为12min。具有能变换检测波长的仪器才能使用本法。

3.2 流动相的优化

笔者进行了大量实验，参考了文献报道的方法做过梯度洗脱法，但重复性试验RSD>2%，而未采纳。用甲醇-水-冰醋酸（45：55：0.1）进行实验，但醋酸地塞米松保留时间太长，需25min；采用甲醇-水（70：30）进行实验，氯霉素保留时间太短，且氯霉素和氯霉素二醇物的峰不分离。2013年版《中华人民共和国药典》对氯霉素二醇物的限量作了规定，在含量测定方法项下对氯霉素和氯霉素二醇物的分离度也作了要求，使用甲醇-水-冰醋酸（60：40：0.1）作为流动相效果满意。

氯霉素地塞米松乳膏的主要成分为氯霉素，其具有抗菌、消炎作用，临床上主要用于脂溢性皮炎、痤疮、毛囊炎、痱子等。采用高效液相色谱法测定氯霉素地塞米松乳膏中氯霉素的含量，需参考《中国药典》的相关规范要求，在采用高效液相色谱法测定该制剂中氯霉素的含量，还要先进行相关物质的系统性试验，制备对照品溶液，同时对该方法的耐用性做了考察，为该制剂的质量控制提供了参考。HPLC法在一定质量浓度范围内线性、重现性、精密度、稳定性和回收率均好，可作为同时测定氯霉素地塞米松乳膏中两主药成分含量的有效方法。

笔者在本实验中建立的方法能简便，快速，准确地同时对氯霉素和醋酸地塞米松进行定量，结果可靠，可用于该制剂的含量控制。

参考文献

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