高效液相色谱法测定复方甲硝唑擦剂中成分含量分析

【摘要】 目的：主要是采用高效液相色谱法测定复方甲硝唑擦剂中甲硝唑和氯霉素的含量。方法：填充剂为：十八烷基硅烷健合硅胶；流动相以醋酸、甲醇、水为主；波长为289nm；并且评价其回收率、RSD以及稳定性等。结果：甲硝唑在（39.74～397.40)μg／mL范围内，和氯霉素在(49.82～498.20)μg／mL范围内的时候起线性关系较为良好；甲硝唑和氯霉素的品均回收率为97.52%和97.23%，RSD为0.80%和0.91%。结论：该方法适合于测定复方甲硝唑制剂的质量控制。

【关键词】 甲硝唑；氯霉素；含量测定；高效液相色谱法

我院自制的复方甲硝唑擦剂是一种外用的药物制剂，该药的主要成分包括1%的氯霉素、0.5%的硫酸锌以及2%的甲硝唑。该药主要是治疗脂溢性皮炎、痤疮等，其治疗的效果是比较理想的，并且不良反应较小。该药物的制作质量对治疗的效果、患者的健康等有着重要的影响，然而该药物的质量标准主要是对药物中的硫酸锌含量进行测定，在以往的测定法中主要是采用容量法以及紫外吸收光谱法，该方法操作起来比较繁琐，其影响的因素也是比较多的，严重的影响了该药物的质量的有效控制。本文主要是采用高效液相色谱法对该药中的甲硝唑、氯霉素含量等进行测定，从而有效的控制其制剂的质量。

1 仪器和试药

笔者对该药的测定主要是采取Agilent1 100的高校液相色谱仪。试药：其对照品主要包括甲硝唑、氯霉素对照品；某院自制的复方甲硝唑擦剂（生产批号为：20050304,20050305,20050306）。

2 测定的方法和结果

本组的测定主要是采用高效液相色谱法对复方甲硝唑中的甲硝唑、氯霉素的含量等进行测定。

2.1 色谱的条件以及系统实用性实验 在试验中所采用的填充剂为：十八烷基硅烷健合硅胶；流动相以醋酸、甲醇、水为主；其流速控制在1.0mL／min，色谱柱的温度要控制在20℃，其进样量控制在10μL。在实验的过程中：氯霉素的理论板数不能低于2500，甲硝唑的理论板数不能低于2000。除此之外，氯霉素峰和甲硝唑峰之间的分离度是不能低于2.0，其监测的波长为289nm。在这样的实验条件下，每组的色谱峰分离完全，没有任何的干扰。

2.2 制备对照品溶液 首先要称取精量的氯霉素、甲硝唑对照品，将其放置在100ml的容量瓶内，在瓶内加入甲醇，制作成浓度为150μg／mL甲硝唑备用溶液。

2.3 制备供试品溶液 称取1ml的复方甲硝唑擦剂溶液，将其放置在100ml的容量瓶内，并在瓶内加入甲醇，均匀的摇动，放置在一旁作为供试品溶液。

2.4 线性关系的考察 称取适量的甲硝唑、氯霉素溶液，再使用甲醇将其配置成为含有氯霉素2.491mg／ml以及含有甲硝锉1.984mg／ml的储备溶液。接着分别将1.0mL、2.0mL、3.0mL、5.0mL、7.0mL和10.0mL的储备液放置在50ml的量瓶内，并在其中加入甲醇进行稀释、摇匀；进样10ul，最后测定其峰面积。作线性回归对其进行分析，含量定为X，峰面积定为Y，最终所得到的甲硝唑回归方程为：Y=10.62927X+12.51812，r=0.99986，根据此结果可以得出：当甲硝唑在（39.74～397.40)μg／mL范围内的时候起线性关系较为良好；其氯霉素的回归方程为Y=17.07687X+12.13274,r=0.99990，根据该结果得出：当氯霉素在(49.82～498.20)μg／mL范围内的时候起线性关系较为良好。

2.5 稳定性的测定 对同一样品分别在0h、0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h、3h、3.5h内定期测定，同时还要将该药剂中甲硝唑、氯霉素的含量计算出来，其计算出来的结果为：甲硝唑RSD=1.5%,氯霉素RSD=1.59%；根据所计算出的结果得出：供试品在4h之内是稳定的。

2.6 测定其精密度

连续测定器同一份供试品溶液9次，同时还要计算出氯霉素和甲硝唑在其中的含量，最终得出甲硝唑RSD=1.48%,氯霉素RSD=1.46%。

2.7 阴性干扰的实验

取出未含有甲硝唑、氯霉素的对照样品，根据本方法对其含量进行测定，得出：甲硝唑和氯霉素的峰位置并未出现任何的色谱峰。

2.8 测定回收率

首先要称取空白擦剂7.46mg，将其分别装入氯霉素、甲硝唑的对照品约标示量的70%、90%、110%，在其中加入流动相，稀释之后定容，每一个浓度的溶液需要制备三份平行样，再根据含量的测定方法来测定其甲硝唑和氯霉素的含量。测定其样品高、中、低浓度，得出：甲硝唑的平均回收率为：97.52%、RSD为0.80%；氯霉素的平均回收率为：97.23%、RSD为0.91%。

2.9 样品的测定

分别称取10μL的对照品溶液和供试品溶液，将其注入高效液相色谱仪器内，同时记录好色谱图。接着测定好峰面积，最后根据外标法来计算样品中甲硝唑和氯霉素的含量：甲硝唑的在药剂中的含量为：1.89%、1.90%、2.11%；氯霉素在该药剂中的含量为：0.85%、0.98%、1.01%。

3 讨论

以往对甲硝唑、氯霉素含量的测定主要是采用容量法和紫外吸收光谱法，由于在操作的过程中比较繁琐、复杂，造成严重的相互干扰现象，并且还不能同时对制剂中的两种组分进行有效的测定[1]。因此，现在对甲硝唑和氯霉素含量的测定主要是采用高效液相色谱法，不仅能同时测定出制剂中这两种组分的含量，其回收率、精密度、稳定性等都是比较理想的；除此之外，该方法操作起来比较简单、快速，测定的结果也是较为准确的，因此，该方法是可以用于复方甲硝唑制剂质量的有效控制。

参考文献

[1]罗世英,吴怡,吴铁.反相高效液相色谱法同时测定痤疮净搽剂中氯霉素和甲硝唑含量[J].中国药业,2008,(19)