高效液相色谱法测定阿莫西林颗粒中的高分子杂质

（黑龙江省济仁药业有限公司）摘 要：目的：采用高效液相色谱法去测定阿莫西林颗粒中高分子杂质的方法。方法：在测定的过程中采用的是高效液相色谱的方法。色谱柱是当前比较常见的凝胶柱，流动相A是浓度为0.1mol/L，PH值为7.0的磷酸盐缓冲液。流动相B为水，流动相的流速为0.6-0.9ml/min，在测定中检测的波长为254nm。结果：阿莫西林颗粒中的杂质含量在0.1%以内。结论：高效液相色谱法在测定阿莫西林中杂质含量使具有灵活性高，准确性强和操作简便等多项优势，这种方法也值得大力的推广和应用。

关键词：高效液相色谱法；阿莫西林颗粒；高分子杂质、

阿莫西林颗粒也被叫做羟氨苄青霉素颗粒，是一种半合成光谱青霉素，阿莫西林颗粒有着抗菌谱广、耐酸性强。口服吸收好、疗效确切等特点，基于这一特点，在医学中被广泛的应用，已经被广泛的应用到临床中。相对于其他的青霉素类的抗生素来说，阿莫西林颗粒的国民反应较大，国民反应在临床研究中是极为重要的，已经有许多的学者进行了阿莫西林的过敏反应分析，发现引起阿莫西林国民反应的主要因素就是阿莫西林颗粒中含有较多的高分子杂质，要想降低阿莫西林颗粒的过敏性，就要减少颗粒中高分子杂质的含量。本文就是对高效液相色谱法对阿莫西林颗粒中的高分子杂质进行分析，为相关的研究提供借鉴。

1 仪器与试药

仪器：WatersH1LC仪（美国Waters），1525泵，2487UV检测器，色谱工作站（WatersBeeze）。

试药：阿莫西林对照品（中国药品生物制品检定所，含量为86。2010）；水为重蒸馏水；阿莫西林颗粒（商品名为再林，批号为031202、031203、031204，海南先声药业有限公司）；蓝色葡聚糖2000（Pharmacia公司）：其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱使用的是SephadexG-10凝胶柱，这一凝胶柱使用的是不锈钢色谱柱，具体的规格是300mmxl0mm，而且内部填的是SephadexG-10凝胶，本文测定试验中使用的凝胶是俺妈西亚生物技术有限公司提供的。流动相要以pH值为7.0的磷酸盐缓冲液，并且是0.1mol/L的磷酸盐缓冲液，具体的制备是分别取21.85g和6.08g的一二水磷酸氢二钠和二水磷酸二氢钠溶液在水中溶解，这样就会制成磷酸溶液和氢氧化钠，而且其pH值在（7.0±0.1）。而流动相B是重蒸馏水，按照下滑书的具体要求来进行试验测定：流速要在0.6-0.9mL/min之间，检测的波长为254nm，而且进样量是20μ。

2.2 系统适用性试验

使用蓝色葡聚糖2000溶液，这一溶液的规格是1mg/ml，使用这一溶液来进行色谱柱的拖尾因子和理论塔板数，将流动相A当做是流动相，检测的过程中，检测的波长是254nm，流速是0.6-0.9ml/min，拖尾因子是0.86，理论塔板数是1695，，在此基础上，取标准品阿莫西林两份，阿莫西林要适量，将这两份阿莫西林分别的放置在50ml的量瓶中，之后量瓶中加入重蒸馏水，将其进行溶解，在这样的情况下，就可以将其当做是对照品溶液，之后按照相应的方法将。流动相B当做是流动相，将一份连续的重复的进样3次，而且峰面积的偏差也要达到0.38%，在此基础上，对两份都另外进样一针，这时得到的峰面积的相对偏差是0.26%。

2.3 溶液的制备

溶液在制备的过程中，主要包括供试品溶液对对照品溶液。供试品溶液在制备的过程中，需要取本品4袋，将这4袋药品研细，之后进行精密量取，在量取的过程中，要相当于阿莫西林500mg，之后将其放在50ml的容量瓶中，向里面加入流动相A，大约为30ml，进行超声溶解，在全部溶解之后稀释到相应的刻度就要摇匀处理，通过0.45μm的滤膜就能够进行过滤，最终形成供试品溶液。对照品溶液在制备的过程中，需要称取阿莫西林对照品大约20mg，一定要进行精密称定，将其放置在50ml的容量瓶中，使用流动相B来进行溶解，还要对其进行稀释到相应的刻度，这样就形成了对照品溶液。

2.4 测定的方法

吸取供试品溶液20μl，将着2μl的供试品溶液注入到色谱仪中，将流动相A当做流动相，之后在取20μl的对照品溶液，将其注入到色谱仪中，将流动相B来当做流动相来进行测定，在测定的过程中，还要记录色谱图。根据规定，保留时间是小于阿莫西林主峰和大于蓝色葡聚糖2000的杂质全部都是高分子杂质，按照外标法来进行供试品中高分子杂质的含量的计算。

2.5 阿莫西林颗粒的高分子杂质的测定

按照上述阐述的色谱条件来对三个批号的阿莫西林颗粒的高分子含量进行了科学的测定，在测定的过程中，主要是选择阿莫西林作为整个试验的对照品，按照主成分对照法来对物质的具体含量进行测定，测定的结果是供试品溶液中含有的杂质含量全部都小于0.25，具体的就结果如表1所示：

3 讨论

在样品中加入了碳酸钠溶液，其碳酸钠溶液占10%，这样就使得阿莫西林溶液极容易产生聚合，将其自然的放置了3个小时之后，就会发现高分子杂质已经增加了一倍，因此，在样品溶解之后，必须要立即的进行进样处理，除此之外，还要注意的是，在每一次溶解之后，样品仅仅能够进一针，而且加入的碳酸钠溶液也要尽可能的减少，可以将超声的时间增加，便于溶解。在对照品溶液进样的过程中，应该将水当成流动相，进样品溶液的过程中应该将磷酸盐缓冲液当成流动相，这样也就可以充分的保证对照品主峰的保留时间和样品的高分子杂质保留的时间具有高度的一致性。到目前为止，阿莫西林及青霉素类抗生素的高分子杂质尚无标准品。以HPLC分析相关物质，在没有杂质对照品的情况下，《中国药典》采用主成分对照法评价相关物质的含量，故在参照相关文献的基础上，研究采用对照法进行了测定，结果表明本法简便、易行，能有效地检测到阿莫西林颗粒中的杂质含量。随着免疫学和分子生物W技术的迅速发展，目前对阿莫西林过敏机制有了较明确的认识。阿莫西林木身没有抗原性，不直接引发过敏反应，引起过敏反应的是制剂中高分子聚合物杂质。对于口服阿莫西林，原料药中高分子杂质0.1%、制剂中高分子杂质O.2%时，一般不会产生青霉素过敏应。上最优质的阿莫西林原料（西班牙Biochemie公司）和先进的生产工艺，成功地将成品中的杂质控制在0.1%以下，从而确保了该制剂的疗效和安全性。

参考文献

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