蛋白多肽类药物的药物动力学研究进展

[摘要]目的综述蛋白多肽类药物的药物动力学测定方法研究进展，为进一步研究提供科学依据，有更深入的了解。方法通过收集文献，对蛋白多肽类药物的测定方法分析，进行综述。结果蛋白多肽类药物的药物动力学研究有生物法、色谱法、质谱法、免疫法，各种方法各具优缺点，可以采用多种方法联用进行分析。结论蛋白多肽类药物的药物动力学研究方法应需进一步完善，研究蛋白多肽类药物的动力学测定方法仍是热点。

[关键词]蛋白多肽类药物　药物动力学　测定方法

[中图分类号]R96 [文献标识码]A [文章编号]1009―6019―[2010]06―31―02

蛋白多肽类药物具有生物活性强、相对成本高、作用靶点专一的特点，近些年来广泛应用于各种疾病诊疗，在治疗疾病地位日趋重要。但是蛋白多肽类药物剂量小、各种内源性蛋白含量高，建立准确、灵敏、专一的测定方法是药动学研究的重点，为此，笔者就近些年蛋白多肽类药物的动力学研究分析、综述如下。

1　生物检定法

蛋白多肽类药物的分子量为数千至几十万，具有二维、三维结构，其复杂的结构决定生物活性的特殊性，一般非注射给药的生物利用度很低，几乎在百分之几。生物检定法能够定性测试某种物质是否具有活性，定量测定适量的药量，因此，用于蛋白多肽类药物分析。如Wei等利用两种新的治疗用重组促红细胞生成蛋白(EPl和EP2)刺激SD大鼠红细胞生成的特性以评价其体内动力学。也可利用体外酶体系进行生物检定法分析，如Han等利用水蛭素对抗凝血酶活性的影响间接分析了N2Ilel2Thr22632去硫重组水蛭素(rH)在家兔的体内动力学，实验结果表明：rH在家兔体内迅速消除，分布局限于细胞间隙，在皮下注射点吸收迅速，主要通过肾排泄。

2　同位素标记示踪法

同位素示踪法是利用放射性核素作为示踪剂对研究对象进行标记的微量分析方法。由于获得的分析结果符合生理条件，更能反映药物代谢、转化的机制。另外，同位素示踪法在离体、整体、无细胞体系的情况下也能进行定性、定量分析。Plech等用同位素125 I标记的-白细胞焦激肽研究其在大鼠脑部和内脏器官中的分布，发现其在肾上腺、下丘脑和大脑海马部位有很高的积聚。标记法有体内掺人法和体外化学连接法。体内掺人法即把含有同位素的氨基酸加入生长细胞或合成体系，但是获得的蛋白多肽分子生物活性较小，且制备复杂而限制了其广泛应用。体外化学连接法如氯胺T、Iodogen和Bolton―Hunter试剂连接到1分子上，因相对简单而被首选。Iodogen法适于标记含有酪氨酸或赖氨酸的蛋白，标记效率高、反应温和，但这种方法得到的标记物存在体内迅速脱碘并使放射性碘被甲状腺所摄取的问题。由于蛋白多肽进入体内会被降解代谢，或与其它蛋白质结合，同位素标记示踪法不能代表药物动力学过程。

3　色谱法和质谱法

高效液相色谱法(HPLC)具有分离速度快、效率高、可对药物进行有效的分离鉴定，广泛应用于药物分析中，可分离极性的、离子化的、不易挥发的的高分子质量和热不稳定的化合物，对于蛋自多肽类药物主要是分离纯化。质谱分析(MS)也能用于蛋白质多肽药物及其代谢物的鉴定。然而生物制品的处理过程和生物样品中分析物的含量太少已很大程度上限制了它的应用和普及。在逐步研究中发现，色谱一质谱联用在蛋白多肽类药物分析中具有明显的优势，尤其是液相色谱一质谱联用技术(LC-MS)的应用，很大程度上对蛋白多肽类药物的药物动力学研究提供科学依据。瞿文等制备了丙氨瑞林微球，由于丙氨瑞林在体内不稳定，按常规测定血药浓度的方法考察体内药动学比较困难，所以通过测定注射微球中残留的药量，计算释放百分数对其进行体内评价。Ferraiolo等在给实验对象大剂量(0.5～1.0mg／kg)静脉注射松弛激素后，用单克隆抗体亲和层析分离得到外源性人松弛激素后再用快速原子轰击质谱进行分析。色谱和质谱技术的日益成熟，LC-MS已逐渐成为新药研究必不可少的手段之一。

4　免疫学分析方法

蛋白多肽类药物具有免疫原性，因此免疫学分析方法是药物动力学研究常用定量分析方法，在体内药物分析得到广泛应用。现在常用的方法有免疫放射定量法(IRMA)、酶联免疫法(ELISA)、放射免疫法(RIA)三种方法。ELISA又称两点免疫系统，广泛用于尤其是临床药代动力学研究。Zhou等用验证过的ELISA法研究了一个人类抗肿瘤坏死因子a单克隆抗体-golimumab在类风湿关节炎患者中的体内动力学并进行了安全性评价。RIA具有简明、易于控制的优点，李云春等用放射免疫分析(RIA)技术研究了乳糖化人生长激素在小鼠体内的药代动力学。免疫学方法的缺点在于它测定的是蛋白多肽的免疫活性而不是生物活性，不能同时测定代谢物，不同来源的抗体与相同蛋白多肽反应可能有较大的差别，还可能受到内源物质的干扰。