免疫消炎活血组方对T1DM小鼠模型的影响

摘要:目的:探讨免疫消炎活血组方对1型糖尿病动物模型的影响。方法:采用多次低剂量注射链脲佐菌素诱导法制备小鼠T1DM模型,用免疫消炎活血组方干预模型,比较治疗组与正常对照组小鼠血糖水平、血清C肽水平、胰岛素自身抗体水平以及T淋巴细胞功能。结果:治疗组与模型对照组小鼠相比血糖水平明显降低、血清C肽值显著增高,胰岛素自身抗体显著降低,T淋巴细胞功能明显降低。结论:免疫消炎活血组方对T1DM小鼠模型具有一定的治疗作用。

关键词:1型糖尿病;C肽;自身抗体

中图分类号:R285.5 文献标识码:A

文章编号:1674-0432(2010)-05-0028-2

1型糖尿病(type 1 diabetes mellitus,T1DM)是T细胞介导的,以胰岛β细胞功能遭到破坏为主要特征的自身免疫性疾病。目前,糖尿病已经成为全球性流行病,同时随着人民生活水平的不断提高,我国糖尿病发病率也在随之急剧上升。尽管1型糖尿病患者只占糖尿病患者总数的5%-10%,但近年来T1DM的发病率与糖尿病患者总体上升趋势相一致,成为继心脑血管疾病和癌症之后影响人类健康和生存的主要疾病之一。

T1DM的病程长,而且根治很困难,临床上的治疗主要是应用胰岛素,来提高T1DM患者机体胰岛素水平,改善患者胰岛素绝对缺乏的症状,治疗效果显著。然而胰岛素治疗不能提高机体自身分泌胰岛素量,即不能恢复遭到破坏的胰岛β细胞的功能,只是外源的补充胰岛素,同时长期应用胰岛素会带来很多的并发症,给患者带来很多的不便,这就对T1DM更好的治疗带来难题。

中药治疗糖尿病有其独有的优势,毒副作用小、作用温和持久、具有综合治疗作用以及可以延缓并发症等,许多单味中药或中药组方通过刺激胰岛β细胞分泌胰岛素显示了其降糖作用。

本文在已有的研究基础上,观察免疫消炎活血组方对小鼠T1DM模型的影响。

一、材料与方法

(一)实验动物

C57BL/6小鼠50只,清洁级,雄性,体重19±2g,购自于生物制品研究所,自由摄食、饮水,室温控制在18-20℃,所有动物在新环境中适应一周后做实验。

(二)实验方法

1.试剂、器材。

链脲佐菌素(STZ)sigma

盐酸苯乙双胍片(降糖灵) 山东仁和堂药业有限公司

链脲佐菌素(STZ) sigma

盐酸苯乙双胍片(降糖灵) 山东仁和堂药业有限公司

MTT北京鼎国生物有限公司

ConA 北京鼎国生物有限公司

水合氯醛北京化学试剂公司

切片机LEICA RM2235

无菌超净工作台 苏净集团安泰公司制造

显微镜 Motic

电热恒温鼓风干燥箱 上海

控温磁力搅拌器 江苏

电子天平 日本

5D-1型血糖仪北京怡成生物电子技术有限公司

2.T1DM小鼠模型的建立。采用多次低剂量STZ诱导法(40mg/kg体重)建立模型,STZ用0.01M的柠檬酸缓冲液新鲜配制成4mg/ml溶液。取C57BL/6小鼠10只作为正常对照组,腹腔注射等剂量的0.01M的柠檬酸缓冲液,其余小鼠禁食不禁水12h后腹腔注射STZ,每天一次,连续5天,当小鼠血糖≥11.1mM/L即为成功T1DM模型,将模型小鼠分为免疫消炎活血方治疗组、降糖灵治疗组、模型对照组,每组10只,用于下一步实验。

3.中药的制备。免疫消炎活血组方按照如下比例,麦冬:天花粉:生地:女贞子:蒲公英:忍冬藤:红花:桃仁:鸡血藤:地龙=2:3:3:3:3:3:1:1:3:1进行配制,加水浸泡12h后,加入相当于药材量3-5倍水煎熬,第一遍文火40min,倒出煎液;第二遍加入同样量水,文火40min,倒出煎液;第三遍加入同样量水,急火15min。合并煎液,用恒温水浴锅浓缩成含生药4.6g/ml,灭菌玻璃瓶盛装密闭,存放于4℃冰箱中,备用。

4.给药方法。将小鼠禁食不禁水12h,测定血糖值后开始灌胃(30g/kg体重),每天1次,连续14天。每周监测血糖变化1次,于末次灌胃后眼球取血处死小鼠。

(三)检测指标

1.血糖变化。免疫消炎活血方、降糖灵治疗后每周各监测血糖一次,共两次。

2.C肽水平。实验结束后,采用放免法测定血清中C肽值。

3.胰岛素自身抗体(IAA)水平。实验结束后采用间接ELISA法检测血清中IAA水平。

4.胰腺组织学观察。实验结束后处死小鼠,取胰腺于4%多聚甲醛中固定,常规石蜡包埋,切片,染色,光镜下观察胰腺病理变化。

(四)统计学方法

全部数据均用SPSS13.0统计软件进行处理。

二、实验结果

(一)血糖监测

表4:各组小鼠T细胞增殖的变化

注:与模型对照组比较*P

(五)胰腺组织学观察

光镜下观察胰腺病理变化,结果显示免疫消炎组与模型对照组有差别,受到损伤的胰岛细胞数量减少,空泡减少,纤维组织增生减少,胰腺中可见少量淋巴细胞、单核细胞为主体的炎细胞浸润。

模型对照组 100× 模型对照组400× 免消组100× 免消组400×

三、结论

由以上结果可得知,免疫消炎活血组方能降低T1DM小鼠血糖水平,刺激机体分泌胰岛素,减少血清中胰岛素自身抗体水平,T淋巴细胞功能明显降低,同时通过光镜下观察,该组方可以减少受到损伤的β数量,可在一定程度上修复受到损伤的胰腺,恢复其分泌胰岛素的功能,即说明免疫消炎活血组方对T1DM小鼠有一定的治疗作用。

参考文献

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作者简介:罗亮(1981-),男,吉林农业大学生命科学学院硕士研究生,研究方向:免疫生物化学。

通讯作者:*张林波(1973-),男,吉林农业大学生命科学学院副教授,医学博士,硕士生导师,研究方向:免疫学。