白藜芦醇对小鼠免疫和抗氧化功能的影响

摘要：目的：观察白藜芦醇对小鼠免疫和抗氧化功能的影响。方法：采用小鼠游泳训练的方法复制疲劳模型。30只健康昆明种小鼠随机分成3组，对照组、运动组、运动+白藜芦醇组，每组10只。游泳训练6周，6周后进行力竭游泳。测定小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力，胸腺和脾脏指数，小鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量。结果：白藜芦醇组与运动组比较，运动小鼠力竭时间明显延长，腹腔巨噬细胞的吞噬能力明显增高（P

关键词：白藜芦醇；小鼠；免疫；抗氧化

中图分类号：G804.7文献标识码：A文章编号：1007-3612(2008)09-1230-03

The Effect ofResveratrol on Immune and antioxidative functions of Mice

ZHUO Jie-xian1，ZHANG Lin2，YU Xie-hao3

(1.Department of PE and Health Education; Liuzhou Teachers College; Liuzhou Guangxi ,China 545004;

2.Institute of Physical Education,South China Normal University, Guangzhou, Guangdong，510631；

3.Huaihua Coollege;Huai huaHu nang,China 418008)

Abstract:Objective : The effects of resveratrol on immune and antioxidative functions of micewere observed. Methods: Thirty healthy male Kunming mice were selected and randomly divided into 3 groups with 10 micein each group: control group,exercise group;exercise + resveratrol group. The swimming training is 6 weeds,carry on strength to exhaust and swim 6 weeks later. Measure PhysicalPerformance ,the ability to engulf chicken's erythrocyte of little mouse's abdominal cavity's macrophages, calculate the thymus and spleen index,the activity of SOD and the content of MDA. Results:The group of exercise + resveratrol obviously lengthen theduration of exhaustive swimming, increase the ability of engulfing of abdominal cavity's macrophages compared with exercise group,The impact on spleen index, thymic index is obvious improve. The activity of SOD was increased ,but the content of MDA was decreased. Conclusion: Resveratrol could improve the immune and antioxidative functions of mice.

Key words: Resveratrol； mice；mmune；antioxidative function

白藜芦醇（Resvertrol,Res）化学名称芪三酚，结构为3，5，4’三羟基二苯乙烯(3，5，4’-trihydroxystibene)，分子式C14H12O3，为多酚类物质，是葡萄属植物产生的一种植物抗毒素,是天然的抗氧化物和自由基廓清剂。目前至少发现已经在70多种的植物中发现了白藜芦醇。随着对白藜芦醇研究的深入，人们发现它具有多种药理活性，包括抗氧化活性，保肝、抗炎、抗肿瘤、调节血脂、抗病原微生物等多种有益于人体的生物学作用［2-4］。在运动医学领域有着广阔的应用前景［5,6］，为了观察白藜芦醇对运动免疫的调节作用，本实验采用小鼠游泳训练的方法复制疲劳模型，探讨白藜芦醇对运动小鼠免疫功能和抗氧化功能的影响，为科学的体育训练提供实验依据。

1材料与方法

1.1实验动物与药品

1.1.1实验动物采用健康雄性30只5周龄小鼠，体重（24±5 g），由中山大学动物实验中心提供。饲养条件：所有动物均以国家标准动物饲养常规饲养，分组饲养每只每天进食约5 g，自然昼夜律变化光照，室温（28±1）℃。相对湿度40%～60%，定时通风换气，每天对动物饲养室进行半小时紫外线照射。

1.1.2药品白藜芦醇购自Sigma公司，纯度达98%。

1.2实验仪器721分光光度计（上海第三仪器厂）、SK-1快速混匀器（上海医科大学仪器厂），7DC-500B低速冷冻多管离心机（上海安亭科学科学仪器厂）、MP120-1电子天平（上海医科大学仪器厂），SASP实验动物游泳池，生物显微镜。

1.3方法

1.3.1动物分组与游泳训练方案动物分组：把30只小白鼠称重编号，再按体重随机分成3组，每组10只。对照组、运动组、运动+白藜芦醇组。运动组灌胃生理盐水，白藜芦醇组灌胃白藜芦醇提取物10 mg/kg体重。白藜芦醇均用0.2%羟甲基纤维钠配制。在每次游泳前2 h灌胃，灌胃量按小鼠体重决定。

游泳训练方案：运动组和白藜芦醇组小鼠在实验动物游泳池中进行游泳训练，水流动速度3.5转/min，水深40～50 cm，每天游泳训练2次，水温32±2℃，游泳时间从20 min开始，每隔一天递增5 min，直至第6周每次游泳时间增为90 min。游泳训练共6周，每周训练5 d，每天游泳2次，时间为早上9：00和下午16：00开始。 第6周的最后1 d,3组大鼠均进行体重及最大游泳时间的测定，以大鼠沉到水底6 s内不再游出水而为止。

1.4指标测定

1.4.1腹腔巨噬细胞吞噬功能的测定鸡红细胞制备：从鸡翅膀下抽取静脉血4 mL，肝素抗凝，2 000 r/min离心8 min去血浆。再用0.90%Nacl溶液洗涤，再次离心，弃去上清液，留下红细胞，重复洗涤3次。

Hanks液的制备：甲液：1） Nacl：40 g，MgSO4.7H2O：0.5 g，Mgcl2.6H2O: 0.5 g双蒸水定容至225 mL。

2） Cacl2 0.7 g 双蒸水定容到25 mL。

3） 将（1）（2）混合加氯仿0.5 mL。

乙液：NaHPO4．12H2O 0.76 g，KH2PO40.3 g，酚红0.1 g，葡萄糖0.5 g双蒸水定容至250 mL加录仿0.5 mL。

应用液：贮存液甲液：乙液：双蒸水=1：1：18，85℃～90℃无菌20 min 4℃保存1个月，使用前用3.5%的NaHCO3缓冲，PH至7. 2 。

小鼠腹腔注射5%可溶性淀粉1.5 mL/只，3 d后，于取材前3 h腹腔注射5%鸡红细胞悬液1.5 mL/只，取材时腹腔再注射Hanks液1.5 mL/只，然后轻柔腹部数次，5 min后取腹腔内液于试管内，置于37℃水浴箱内孵育30 min。然后从每个试管里取1滴于载玻片上，推平成膜状，晾干，wrights染色6 min，再用自来水漂洗，晾干后生物显微镜（×1000）观察。每一张玻片观察100个巨噬细胞，计算吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数和被吞噬的鸡红细胞个数，以吞噬百分率表示。吞噬百分率：吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/100个巨噬细胞×100%。

1.4.2胸腺指数和脾脏指数小鼠处死前称体重，处死后取其脾脏和胸腺并分别称重，计算脾脏指数和胸腺指数［7］。

脾脏指数=脾脏重量/体重（mg/g） 胸腺指数=胸腺重量/体重（mg/g）

1.4.3超氧化物歧化酶(SOD）丙二醛(MDA}的测定严格按照南京建成生物工程研究所提供的试剂盒说明操作。

1.5统计学处理实验结果用SPSS 11.5进行统计分析，计量以S表示，采用秩和t检验进行显著性分析。

2结果

2.1各组小鼠脾脏指数、胸腺指数、腹腔巨噬细胞吞噬率检测结果（表1）脾脏指数白藜芦醇组与运动组比较显著增加（P

2.2超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛( MDA)、力竭游泳时间检测结果（表2）白藜芦醇组血清超氧化物歧化酶(SOD)活性与运动组比较显著增加（P

3讨论

Nieman曾提出，日常进行30 min左右的中等强度运动有利于健康，而超过90 min的大负荷训练将使免疫功能出现不利的变化，关于运动对免疫系统及其功能的影响大致可归纳两个方面，中等强度适量的运动能激活免疫系统，并提高免疫功能，而剧烈过量的运动则抑制免疫功能。Pedersen把这一免疫功能的抑制期称“open window”期，在这一特殊时期各种致病因子很容易进入机体内，引起机体感染［8,9］。预防免疫机能下降是运动性疲劳研究中需着重解决的问题之一。本实验使小鼠进行疲劳性训练，观察疲劳小鼠免疫功能的变化及白藜芦醇的作用。

3.1白藜芦醇对运动小鼠免疫器官的影响胸腺和脾脏属于机体兔疫器官，在T细胞发育、成熟和T. B细胞发挥免疫监控过程中发挥重要作用。研究表明过量运动会损伤机体免疫器官，导致脾脏和胸腺重量降低，并发生结构的变化，使器官的免疫反应降低。研究表明，白藜芦醇具有很明显的增强小鼠体液和细胞免疫功能的作用，抑制炎症发生［10］，可通过IL-6，NK细胞，CD4/CD8，CD4(+)，CD25(+)从而发挥免疫调节和抗肿瘤作用［11,12］。本研究亦显示，白藜芦醇组与对照组比较，其胸腺指数和脾脏指数无显著性差异（P＞0.05），白藜芦醇组与运动组对比，运动组胸腺指数、脾脏指数均小于白藜芦醇组，具有显著性差异（P

3．2白藜芦醇对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率的影响巨噬细胞是由外周血单核细胞占血细胞总数的1%～3%，在血液中仅存留几个小时至10个小时，然后穿过血管细胞移动至全身组织器官发育而成。巨噬细胞可吞噬、杀伤和消化微生物等抗原生物质，是机体非特异性免疫的重要组成部分，同时在特异免疫应答的各个阶段也起重要作用。

本实验通过测定白藜芦醇对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率的影响，结果表明，白藜芦醇对巨噬细胞功能具有免疫调节作用。白藜芦醇能够提高免疫受抑小鼠的细胞、体液免疫应答水平，调节细胞因子分泌，从多方面有效地增强免疫功能［13,14］。由表1可知，白藜芦醇组与运动组比较，腹腔巨噬细胞的吞噬能力明显增高，差异显著（P

3.3白藜芦醇对抗氧化能力和运动耐力的影响研究证明，长时间运动后体内氧自由基产生增多，抗氧化能力减弱是导致运动性疲劳和影响恢复的原因之一。SOD是体内清除自由基的关键酶，检测SOD活性高低，可间接反映机体清除自由基能力，MDA是自由基攻击生物体的降解产物，MDA生成的多少可间接反映组织的损伤程度。Cenesiz S,et al［16］研究发现，白藜芦醇可明显升高胆道阻塞大鼠抗氧化酶SOD, CAT和 GSH-PX活性。Wang GY,et al［17］发现，白藜芦醇可缓解阿霉素引起的心肌损伤，剂量依赖性地明显升高SOD活性，下调MDA和NO 含量。本实验结果表明：白黎芦醇可提高运动小鼠血清SOD含量，降低MDA水平，因此能加快自由基的清除，具有较强的抗氧化能力，说明白黎芦醇能够抵抗由自由基及其代谢产物引起的脂质过氧化而导致的过氧化损伤。在观察小鼠力竭性游泳运动能力的实验中发现，白藜芦醇组的力竭性游泳时间明显长于运动组和对照组，说明白藜芦醇能有效提高小鼠力竭性运动能力，并随着时间的延长，抗疲劳作用会更明显。

4总结

1) 白藜芦醇有助于提高运动小鼠的脾脏指数、胸腺指数，提高腹腔巨噬细胞的吞噬能力。因此，白藜芦醇对运动小鼠的免疫调节功能具有良好的影响。2) 白黎芦醇可提高运动小鼠血清SOD含量，降低MDA水平，因此能加快自由基的清除，具有较强的抗氧化能力。3) 白藜芦醇能明显延长小鼠力竭性游泳时间，因而具有明显的抗疲劳作用。

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