地衣多糖对免疫抑制小鼠免疫功能的影响

山东省东营市人民医院 山东省立医院集团东营医院药剂科，山东东营 257091

[摘要] 目的 探讨地衣多糖对免疫抑制小鼠机体免疫功能的影响。 方法 以环磷酰胺（CY）作为免疫抑制剂，建立免疫抑制小鼠模型，进行免疫脏器指数、碳粒廓清速率、血清溶血素（IgM）、迟发型超敏反应（DTH）的检测，探讨地衣多糖对免疫抑制小鼠免疫功能的影响。 结果 地衣多糖能够明显提高免疫抑制小鼠的脾脏指数、胸腺指数，增强免疫抑制小鼠单核巨噬细胞的吞噬功能及迟发型超敏反应，促进溶血素的生成。 结论 地衣多糖可对抗CY引起的免疫抑制，显著提高免疫抑制小鼠的免疫功能。

[关键词] 地衣；多糖；环磷酰胺；免疫功能

[中图分类号] R28 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2012）06（a）-0015-03

地衣是一类独特的植物，它不同于单纯的真菌，也不是单纯的藻类，而是一种真菌和藻类的共生结合体。在组成地衣的藻类中，大部分为子囊菌亚门的真菌，少部分为担子菌亚门的真菌[1]。并非任意的真菌和地衣都能形成地衣，在生物的漫长演化过程中，只有那些与一定的藻类共生而存活下来的地衣型真菌才能与相应的地衣型藻类共生成为地衣，其中，真菌部分是地衣的主导部分[2]。地衣具有多种药用价值，如抗炎、抗结核、抗溃疡、强心等作用[3]，近年来，对地衣多糖的研究越来越多，大多数的地衣多糖被证实具有良好的抗癌活性，而多糖类化合物多具有免疫调节作用，并且具有不良反应小，安全性高的优点[4]。本文考察了地衣多糖对免疫抑制小鼠免疫功能的影响，从而为地衣多糖的深入研究和开发提供基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药品及试剂 地衣梅衣属石花（学名：Parmelia tinctorium）；环磷酰胺（上海华联制药有限公司，批号：20101105）；印度墨汁（上海江莱生物科技有限公司）；绵羊红细胞（山东中医药大学动物中心提供）。

1.1.2 实验动物及仪器 昆明种小鼠（雌雄各半，体重18~22 g），批准号：SCXK（鲁20110012），由山东中医药大学实验动物中心提供。紫外可见分光光度计（美国惠普公司）；电子分析天平（上海精密科学仪器厂）；旋转蒸发仪（上海爱朗仪器有限公司）。

1.2 检测指标及方法

1.2.1 地衣多糖的制备[5] 称取石花全草粉碎物适量，石油醚回流提取1 h后过滤，挥干溶媒，用80%乙醇回流提取2次（1 h/次），过滤后所得滤渣用蒸馏水浸泡数小时，回流提取2次（1 h/次），滤液浓缩液用三氯乙酸除蛋白后再次过滤，滤液用95%乙醇调含醇量致80%，4℃静置过夜，所得滤渣依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，60℃烘干，即得地衣多糖。

1.2.2 实验动物分组及给药 小鼠随机分为五组（每组10只）：正常组、模型组、地衣多糖组200 mg/kg剂量组、地衣多糖100 mg/kg剂量组、地衣多糖50 mg/kg组。连续灌胃给药10 d（对照组和模型组给予等体积生理盐水），于第9天腹腔注射给予环磷酰胺（50 mg/kg），连续2 d。

1.2.3 小鼠免疫器官重量的测定[6] 给药第10天给予环磷酰胺24 h后，将小鼠处死并称重，摘取脾和胸腺，用生理盐水漂洗后置于滤纸上吸干水分，称重，计算脾脏指数和胸腺指数，公式如下：脾指数=脾重量（mg）/体重（g）；胸腺指数=胸腺重量（mg）/体重（g）。

1.2.4 单核巨噬细胞吞噬功能（碳粒廓清速率）的检测 末次给药1 h后，按照文献[7]中的方法，实验小鼠采用尾静脉注射的方式给予印度墨汁，于注射后2 min（t1）和20 min（t2）取血20 μL，并将其溶于2.0 mL 0.1% Na2CO3溶液中，静置20 min后测定吸光度值（A）（650 nm）。采血后将小鼠处死，摘除肝脏和脾脏，称重，计算廓清指数K值和校正廓清指数α值，公式如下：K=（logA1-logA2）/（t2-t1）；α=K1/3×体重/（肝重+脾重）。

1.2.5 血清溶血素的监测[8] 给药第10天给予环磷酰胺24 h后，取小鼠眼球血，放置1 h后离心得血清，按照文献[8]的方法计算半数溶血值（HC50），公式如下：样品HC50=（样品的吸光度值/SRBC半数溶血时的吸光度值）×稀释倍数

1.2.6 迟发型超敏反应（DTH）检测[9] 给药第10天给予环磷酰胺后，腹腔注射2% SRBC 0.2 mL致敏，致敏后第4天于小鼠右侧足垫皮下注射20% SRBC悬液50 μL，对侧注射等体积生理盐水。分别于3、24 h后用游标卡尺测量小鼠左右足垫厚度，厚度之差为肿胀程度。

1.3 统计学方法

采用SPSS 11.5统计软件包进行统计学处理，计量资料数据以均数±标准差（x±s）表示，组间多样本均数间比较采用单因素方差分析（one-way ANOVA）；组内给药前后比较采用配对t检验。以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 地衣多糖对免疫抑制小鼠免疫器官重量影响

由表1可以看出，模型组小鼠胸腺和脾脏指数与对照组比较显著降低（P ＜ 0.01），而地衣多糖能够明显提高免疫抑制小鼠的胸腺指数和脾脏指数，与模型组相比差异具有统计学意义（P ＜ 0.05，0.01）。

2.2 地衣多糖对免疫抑制小鼠碳粒廓清速率的影响

由表2可知，模型组小鼠廓清指数、校正廓清指数与正常对照组相比显著降低（P ＜ 0.01），而地衣多糖能够明显提高CY所致免疫抑制小鼠的廓清指数和校正廓清指数（P ＜ 0.05，0.01）。说明地衣多糖具有提高CY所致免疫抑制小鼠免疫功能的作用。

2.3 地衣多糖对免疫抑制小鼠血清溶血素的影响

由表2的半数溶血值可知，CY使得小鼠抗体产生能力显著降低，表明其体液免疫受到显著抑制（P ＜ 0.01）。而给予地衣多糖后，使得半数溶血值显著提高（P ＜ 0.01），表明其能够对抗CY所致的小鼠溶血素降低，促进小鼠溶血素的形成。

2.4 地衣多糖对免疫抑制小鼠迟发型超敏反应(DTH)的影响

由表3可知，注射CY后，小鼠迟发型超敏反应的能力显著降低（与正常组比，P ＜ 0.01），而摄入地衣多糖能显著增强SRBC攻击后3 h和24 h小鼠出现的肿胀反应，说明地衣多糖可以增强CY所致免疫抑制小鼠体液免疫和细胞免疫的反应能力。

3 讨论

胸腺和脾脏是机体重要的免疫器官，药物对免疫脏器指数的影响是免疫功能评价中的重要指标之一，本研究显示，地衣多糖对免疫器官具有免疫促进作用，对抗CY引起的免疫抑制小鼠的免疫器官萎缩。单核巨噬细胞在机体免疫防御中发挥着重要的作用，它在免疫反应中负责抗原处理与提呈及特异性免疫应答的启动，此外，单核巨噬细胞还能够非特异性地吞噬及杀伤多种病原微生物，在调节免疫功能和免疫应答的各环节中起着重要的作用[10]。本研究中，地衣多糖可以明显激活、增强CY诱导的免疫抑制小鼠单核巨噬细胞的吞噬功能，说明其可以增强CY所致免疫抑制小鼠的非特异性免疫功能。作为初次免疫应答产生的IgM抗体，溶血素的水映着机体的体液免疫功能[11]。地衣多糖能够明显提高免疫抑制小鼠的血清溶血素水平，表明其对CY所致的体液免疫功能受损小鼠有保护作用。有研究证实[12]，在SRBC诱导的迟发型超敏反应模型中，造模3、24 h出现的肿胀反应分别代表了机体体液免疫和细胞免疫的水平。在本研究中，地衣多糖能够显著增强SRBC攻击后3、24 h小鼠出现的肿胀反应，表明其能够提高CY所致免疫抑制小鼠的体液免疫和细胞免疫水平。

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（收稿日期：2012-02-06 本文编辑：郝明明）