冠心病稳定型心绞痛患者MPO及MMP-9表达变化

【前言】冠心病稳定型心绞痛患者MPO及MMP-9表达变化由文秘帮小编整理而成，但愿对你的学习工作带来帮助。Abstract:Objective To explore the expression of myeloperoxidase （MPO） and matrix metalloproteinase-9 （MMP-9） in patients （pts） with stable angina pectoris （SAP）.MethodsBy liquid-chip analysis system,the expression of MPO and MMP-9 in 206 pt...

摘要：目的 探讨冠心病稳定型心绞痛患者血清髓过氧化物酶（mpo）和基质金属蛋白酶-9（mmp-9）表达变化。方法 采用液相芯片分析系统同步检测206例经冠状动脉造影证实的稳定型心绞痛患者及28名健康对照者血清MPO和MMP-9表达程度，并分析其与冠脉病变程度的相关性。结果 稳定型心绞痛患者血清MPO、MMP-9表达程度较健康对照者升高（P

关键词：稳定型心绞痛；髓过氧化物酶；基质金属蛋白酶-9

中图分类号：R541.4 R289.5 文献标识码：B 文章编号：1672-1349（2011）06-0653-04Expression of Myeloperoxidase and Matrix Metalloproteinase-9 in Stable Angina Pectoris

Song Qingqiao,Li Yi,Hu Yuanhui,et al

Guang’anmen Hospital,China Academy of Chinese Medical Sciences （Beijing 100053）

Abstract:Objective To explore the expression of myeloperoxidase （MPO） and matrix metalloproteinase-9 （MMP-9） in patients （pts） with stable angina pectoris （SAP）.MethodsBy liquid-chip analysis system,the expression of MPO and MMP-9 in 206 pts with SAP and 28 subjects were detected and compared.ResultsThe expression of MPO and MMP-9 in pts with SAP was obviously higher than that in health subjects（P

Key words:stable angina pectorismyeloperoxidasematrix metalloproteinase-9

1） 为国家十一五科技支撑项目（No.2006BAI21B04）

不稳定型心绞痛（unstable angina pain，UAP）或急性冠脉综合征（acute coronary syndrome，ACS）多表现炎性反应标记物升高。而稳定型心绞痛相关研究较少。本研究拟比较稳定型绞痛患者血清髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）、基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）表达变化，探讨稳定型心绞痛患者慢性炎性反应水平。

1 资料与方法

1.1 病例来源 病例组为2008年7月―2009年12月，中国中医科学院广安门医院、中国人民二五二医院、白求恩国际和平医院心血管内科住院患者。对照组选用既往否认任何病史、在常规体检中未见任何异常者。

1.2 标准

1.2.1 冠心病及稳定型心绞痛诊断标准 参考1979年国际心脏病学会及世界卫生组织临床命名标准化联合专题组的报告【sup】［1］【/sup】确定劳累性心绞痛诊断标准。冠心病稳定型心绞痛诊断标准参照中华医学会心血管病学分会、中华心血管病杂志编辑委员会2007年《稳定型心绞痛诊断与治疗指南》【sup】［2］【/sup】 中相关定义。

1.2.2 病例纳入标准 符合冠心病稳定型心绞痛的诊断标准；冠状动脉造影提示冠状动脉及其主要分支（左主干、前降支、较大对角支、右冠脉）狭窄≥50%。

1.2.3 病例排除标准 18岁以下患者；妊娠或哺乳期妇女；急性冠脉综合征（包括急性心肌梗死、不稳定型心绞痛）；未能有效控制的高血压（BP>160/100 mmHg）；严重的心力衰竭（NYHAⅣ级），严重心律失常（重度房室传导阻滞、室性心动过速、影响血流动力学的室上性心动过速、频发早搏特别是室性早搏）患者；合并有严重肝、肾、内分泌系统疾患患者；合并有血液系统、肿瘤疾患患者；合并有焦虑、抑郁及精神障碍患者。

1.3 方法

1.3.1 一般资料采集 入院当时由临床调查人员对患者进行病史采集、体格检查，测量身高、体重、腹围。入院第2日清晨常规采集血常规、高敏C反应蛋白、肌钙蛋白I（cTnI）、B型利钠肽（BNP）等检验指标，采集ECG、超声心动信息。

1.3.2 选择性冠状动脉造影 冠状动脉造影由专人采用Judkins法采取不同投照患者冠状动脉以充分显示病变。测量患者病变最狭窄处与参考血管比例，狭窄程度（参考血管直径-最狭窄处直径）/参考血管直径×100%。

冠状动脉病变程度参照Gensini评分【sup】［3］【/sup】，即无任何异常发现为0分，狭窄≤25%为1分，≤50%为2分，≤75%为4分，≤90%为8分，≤99%为16分，100%狭窄为32分。同时对不同节段冠状动脉进行评分，左主干病变得分×5；左前降支近段×2.5，中段×1.5，远段×1对角支的第一对角支×1，第二对角支×0.5左回旋支近段×2.5，远段及后降支均×1，后侧支×0.5；右冠状动脉病变近、中、远和后降支均×1，后侧支×0.5。每例患者冠状动脉病变程度的最终积分为各分支积分之和。由2名副主任医师以上职称医师根据冠脉造影结果进行评分。

1.3.3 MPO、MMP-9检测

1.3.3.1 标本采集 患者入院后，经临床主治医师判断，符合入选条件，于次日清晨，空腹静卧状态下，采集外周静脉血2 mL，静置，分离出血清后，提取100 μL置入试管，标记后保存于-80 ℃保存、待用。

1.3.3.2 主要仪器 Luminex200液相芯片分析系统（美国，Millipore公司）；WP6122050真空泵（美国，Millipore公司）；XW80-A型，旋涡混合器（中国，江苏海门市其林贝尔仪器制造公司）；SY7200DH水浴超声仪（中国，上海声源超声仪设备有限公司）。

1.3.3.3 主要试剂 MILLIPLEXTMMAP KIT Human Cardiovascular Disease（CVD）Panel1 96well plate AssayCat,No：HCVD1-67AK，试剂批号：16677874。Beads液、QC溶液、wash buffer液、standard液根据说明书配置。

1.3.3.4 实验步骤 从-80 ℃冰箱中取出病例样品，渐次解冻至室温，离心，以1∶50比例稀释，与梯度稀释的标品一起分别加入96孔板相应的位置，加入25 μL beads震荡10 s，将96孔板用锡纸包好以避光，放置于4 ℃冰箱摇床中以500 RPM孵育17 h后取出室温下以500RPM摇摆30 min， 200 μL Wash Buffer清洗2次，加入25 μL Dection Antibodies 500 RPM摇摆1 h，加入25 μL Streptavidin-phycoerythrin 加入96孔板中的每个孔， 500 RPM摇摆30 min，200 μL Wash Buffer清洗2次，加100 μL鞘液至每个孔，以500 RPM摇摆5 min，参照试剂说明书设定相应参数，将96孔板放在Luminex200液相芯片分析系统同步检测MMP-9及MPO表达。

1.4 统计学处理 计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用K-S方法检验其是否服从正态分布，对于不服从正态分布的数据进行取对数转换后再次检验其是否服从正态分布。符合正态分布的计量资料之间比较，两组采用t检验，组间比较采用LSD方法。相关性分析采用Person相关检验。以上数据统计采用SPSS 11.5 计算。

2 结 果

2.1 一般资料 本次研究共入选206例，其中男135例，女71例；年龄20岁～85岁（60.67岁±9.84岁）；病程（45.94±56.92）月。心绞痛程度分级（CCS）1级 28例，2级66例，3级97例，4级15例；合并高血压141例，合并糖尿病42例，合并高脂血症53例，有吸烟史者101例。冠状动脉造影显示1支病变55例，2支病变80例，3支病变71例，冠脉积分（Gensini积分）4分～120分（29.32分±22.71分）；病变血管涉及左主干23例，左前降支161例，右冠状动脉106例，左回旋支101例，共涉及391处病变。

数据预处理：两指标分布均不服从正态分布，经转换后均符合正态分布（见表1）。

表1 冠心病心绞痛患者血清MPO及MMP-9表达

2.2 MPO、MMP-9表达（见表2）

表2 两组MPO、MMP-9表达水平（x±s）mg/L

2.3 冠心病稳定型心绞痛患者MPO、MMP-9与冠状动脉病变程度相关性 MPO与MMP-9之间有显著相关性（P

MPO及MMP-9相关性

3 讨 论

MPO是一种血色素蛋白（hemoprotein），由2个55 Kda的亚单位和2个15 Kda的亚单位组成的分子量为140 Kda的四聚体糖基化蛋白，占所有细胞蛋白质总量的4%，在循环中的MPO，95%是由中性多形核白细胞（polymorphonuclear neutrophils，PMNs）中嗜天青颗粒所分泌。MPO通过氯化过氧化氢、催化产生次氯酸等反应性物质和多种自由基，维持细胞氧化还原自稳状态。当机体处于炎症、氧化应激状态时，不能有效清除自由基核氧化剂，引起多种病理过程和组织损伤【sup】［4,5］【/sup】。

冠状动脉粥样硬化作为一种慢性炎症过程，以动脉血管壁中脂质、炎症细胞核坏死物聚集为主要特征。粥样斑块的形成机制、并发症及其早期检测指标一直是体内外实验和临床研究的热点。MPO通过结合整合素CD11b/CD18介导中性粒细胞活化，是后者活化的自分泌和旁分泌细胞因子，发挥正反馈的调节作用，是中性粒细胞活化的标志物【sup】［6］【/sup】。ACS患者冠脉管壁炎性反应较显著，故MPO表达升高明显，因此，研究者认为其可以作为急性冠脉综合征或者胸痛的预测指标【sup】［7,8］【/sup】。临床研究表明，冠心病ACS患者MPO表达显著高于健康者、冠脉造影阴性以及稳定型心绞痛患者【sup】【/sup】［9,10］。刘志远等【sup】［11］【/sup】进行亚组分析表明，急性心肌梗死、不稳定型心绞痛患者血清MPO浓度显著高于稳定型心绞痛患者及对照组（冠脉造影正常）。欧阳茂等【sup】［12］【/sup】研究表明,ACS患者MPO浓度显著高于稳定型心绞痛患者和对照组，高浓度MPO患者半年心脏事件发生率升高。有关MPO基因多态性研究表明其与冠状动脉疾病关系密切【sup】［13］【/sup】。

MMP-9属于明胶酶，在MMPs中复杂程度较高，主要参与降解Ⅳ～Ⅺ型胶原和明胶、纤维连接蛋白、弹性蛋白等。因此，MMP-9对于血管再生、炎性反应、动脉硬化斑块的形成及其发展进程中起重要作用。多数关于MMP-9与冠心病关系的研究表明【sup】【/sup】［14-17］，MMP-9在ACS中升高，稳定性冠心病（SCHD）和正常对照组则不升高。然而临床研究中亦有不同的研究结果。一项关于SCHD患者的冠脉造影研究【sup】［18］【/sup】发现，相比于对照人群，冠心病患者血浆MMP-9（P0.0099）、 TIMP-2（P0.0019）和 sCD40L（P

本研究表明，MPO、MMP-9在冠心病稳定型心绞痛患者血清表达显著升高，提示SAP患者其冠脉硬化斑块在一定程度上不稳定。稳定型心绞痛与不稳定型心绞痛是人为的界定，其间并非截然分开的。动脉硬化斑块由稳定向不稳定发展是一个渐进的过程。在这个过程中，其冠脉病变斑块的形态、患者症状可能没有显著改变，因此，冠脉病变程度Gensini积分与MPO、MMP-9表达无明显相关性。但此时作为炎性反应标记物的MPO、MMP-9已经逐渐升高。其心绞痛的稳定状态是暂时的，可能在逐步发展为不稳定心绞痛的过程中。对稳定型心绞痛患者根据炎性反应标记物的程度进行亚组分析乃至长期随访，观察患者冠脉事件发生的异同，有助于分析其危险程度，早期识别可能发展至不稳定型心绞痛的高危患者，从而预防严重心血管事件的发生，具有一定预后价值。同时，本研究还显示MPO与MMP-9在冠心病稳定型心绞痛患者血清表达升高具有极强的相关性。前期研究显示， MPO可以抑制基质金属蛋白酶抑制剂-1，激活基质金属蛋白酶原【sup】［19］【/sup】，从而降解细胞外基质、导致斑块不稳定。当然，其内在机制尚需进一步深入研究，以明确其相互作用的机制，以便探索其对于稳定型心绞痛患者危险分层的价值以及潜在的治疗靶点。

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作者简介：宋庆桥（1970―），男，副主任医师，医学博士，现工作于中国中医科学院广安门医院（邮编：100053）；李宜，为中国中医科学院研究生院 2008级研究生；胡元会（通讯作者）、冯玲、石洁、吴华芹，工作于中国中医科学院广安门医院（邮编：100053）；曹雪滨，工作于中国人民第二五二医院；李俊峡，工作于白求恩国际和平医院。

（收稿日期：2011-02-28）