基层医院病理科常规制片技术的规范和质量控制

关键词 病理制片 技术 质量 控制

doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2012.07.247

HE制片是病理医生用作病理诊断的基本和重要的依据之一，病理技术员的责任就是为病理医生提供高质量的HE制片。了保证制片质量，减少差错，防范责任事故，避免医疗纠纷，有必要加强对病理技术进行科学规范管理和制片质量的控制。

规范管理技术人员，提高技术人员素质

加强技术人员的培训工作，不断引进和学习新技术，掌握过硬的基本功。

医院和科室要重视病理技术工作，为技术人员提供进修学习和提高的条件和机会。

技术员和医生、技术员与技术员之间应互相团结，密切配合，发挥团队精神的作用。

配备心要的仪器设备保障正常运行

科室应配备工作所必须的仪器设备。先进、高质量的仪器设备是保证和提高制片质量的重要条件。

技术人员对仪器设备要正确使用，定期维修保养，保证仪器设备在最佳的状态下工作。

确保使用试剂、材料质量，严把每一个环节。

规范管理标本和资料档案

标本和送检单的检查验收：病理标本送达后，应立即检查标本和送检单的名字是否相符，检查有无标本清点标本块数，必要时要补充标本的固定液，然后将送检单编号登记。

资料档案的规范管理：诊断报告发出后，附有诊断报告记录的送检单、玻片和组织蜡块马上存档并专人保管。建立严格的资料借出制度，确保档案资料不丢失。

制片技术操作规范

组织固定：固定是把病理活体或尸体解剖切取下来的组织泡浸在适宜的化学试剂(一种或多种试剂配成的溶液)里，而这种化学试剂能使组织或细胞内的蛋白质凝聚、沉淀或变性，使组织细胞内的一些物质成为不溶性，同时使组织细胞原有的形态结构尽可能保持。因此，组织应及时固定，固定不当或固定不及时，都会影响组织的脱水、切片和各种染色。

固定的目的：①破坏细胞内的溶酶体酶；②杀死外来细菌；③尽可能保持生活体的原状；④凝聚、沉定细胞内原有产物，使不被溶解或消失；⑤使组织保持一定的硬度和弹性，抵抗以后的脱水、透明、浸蜡等过程不发生较大的扭曲或变形，使各级溶液在组织间隙内自由交换取得良好的制片效果；⑥对组织的分析性染色起媒染作用。⑦有利于区别各种细胞的折光率。

固定液的使用和配制：固定组织所使用由化学试剂配成的溶液称为固定液。固定液有单纯固定液和混合固定液。常用的固定液10%的甲醛水溶液，因甲醛易氧化成甲酸而偏酸性，因此可配成中尔马林液。巨大组织要切开固定，小块组织的固定时间约4小时左右，然后在取材时修切成大小约15mm×15mm，厚不超过2～3mm的组织块进行脱水(固定液配制方法从略)。

组织脱水：组织脱水就是利用某些溶媒置换组织内水分的过程，脱水的目的：组织经过水溶性固定液固定和水洗后，其间隙内含有较多水分，因水与二甲苯、石蜡是不能混合的，即使组织间隙内含有极少的水也会阻碍二甲苯和石蜡的渗透，所以未经脱水或脱水不彻底的组织不能直接进入二甲苯透明和石蜡中浸蜡。只有使组织内部水分彻底脱除，才能进行透明、浸蜡、包埋，组织蜡块才能长久保存。常用的脱水液为乙醇，用乙醇脱水要由低浓度至高浓度逐步置换组织内的水份(一般70%～100%的浓度)，最后组织内部水分被高浓度乙醇所取代。组织在乙醇脱水时，低浓度乙醇(95%以下)的时间可适当延长，高浓度乙醇(100%)脱水时间不能过长。否则组织变硬变脆。

组织透明：组织脱水后要经过一个浸蜡前的中间溶剂透明过程，才能进行浸蜡。透明的目的：组织经脱水后、浸蜡前必须经过某些既能与脱水剂相混合又能溶解石蜡的中间溶剂处理。组织在中间溶剂时，组织间隙内存留的脱水剂完全为中间溶剂所取代时，组织就呈现透明状态，此时即可进行浸蜡。透明液多采用二甲苯，组织经无水乙醇脱水后转入二甲苯透明，组织的大小、厚薄不同，透明时间也不同，一般30～60分钟。

组织浸蜡：用于浸蜡的石蜡最好是熔点稍低(56℃～58℃)，低温浸蜡对保存组织细胞内的抗原免疫活性，避免组织收缩和变硬变脆有帮助。根据脱水机配有的蜡缸数量，浸蜡采用2～4级，以尽量清除二甲苯。不同大小和厚薄的组织浸蜡时间有所不同，一般1～3小时。浸蜡温度过高，浸蜡时间过长均可导致组织收缩，变硬变脆，难以切出理想切片。

组织包埋：组织经浸蜡后即可进行包埋。包埋时，包埋石蜡的温度要比组织高(3～5℃)，否则包埋冷凝后组织与包埋石蜡分离，特别是在冷天包埋时，动作更要迅速，否则容易导致组织与石蜡融合不好，影响切片。包埋时把组织最大最平切面或所需的病灶切面向下，对皮肤、肠管和囊壁等层次清楚的组织其切面应包含有各层组织。组织包埋完后，蜡块要与取材时记录的组织形状和数量核对，发现问题，及时解决。

组织切片：组织切片厚薄要适宜，薄的切片细胞不会重叠，易于观察。切片的厚度应3～4U，对一些组织如淋巴结、鼻咽和扁桃体，切片的厚度应2～3U。要切出薄而平整的切片需要正确使用切片机，保证切片刀锋利和调至合适的角度。组织蜡块过硬，切片刀或蜡块没固定好均达不到切片要求。

贴片烤片：切出的蜡片可先放在约10%～15%乙醇内，然后置恒温水中，这样因水的表面张力比乙醇大，蜡片便容易在温水中展平，根据包埋石蜡的熔点不同，水温约39～42℃。贴片时要注意贴在载玻片中间稍偏右的位置上。对一些组织如皮肤、胃肠等贴片时要注意表皮或黏膜面在下，真皮或肌层在上，方便在镜下观察。贴好片后放入60～65℃的烤箱内或恒温热板上烤烘15～30分钟，使蜡片牢固地黏附在玻片上。烤烘切片的温度一般比包埋石蜡的熔点高5℃左右。

切片脱蜡：切片在染色前必须脱蜡干净，脱蜡不干净会影响组织细胞的着染，即使着染，组织和细胞也会模糊不清。脱蜡一般用两级或三级脱蜡剂如二甲苯，时间10～20分钟。如果脱蜡剂使用多次或室温较低，均需延长脱蜡时间。

切片染色：苏木精染液配制，配好苏木精染液是HE染色的关键。苏木精配制有多种配方，关键在于氧化。如加氧化汞作氧化剂时，要防止氧化过度，同时注意形成的氧化膜污染切片。加碘酸钠作氧化剂时，就无需煮沸。要配制自然成熟的苏木精则不需加氧化剂，但要较长时间才能氧化成熟。不同苏木精染液的染色时间5～20分钟，自然氧化成熟的苏木素精染色时间可以更长(染液配制方法从略)。

切片脱水透明：切片经HE染色后，要彻底脱水透明才能用中性树胶封盖。如果脱水不彻底，封片后呈白色雾状，镜下观察模糊不清，且容易褪色。切片经1～2级无水乙醇脱水，然后再入二甲苯透明，也可使用石碳酸二甲苯进行脱水透明。

封片：切片染色后封片常用中性树胶，酸性的树胶可使胞核褪色，如树胶放置时间过长，因氧化而变酸。中性树胶可用二甲苯稀释。树胶过浓，封片时容易导致气泡；过稀，封片时易使胶外溢，影响美观，也会出现由于二甲苯挥发后缺胶的现象。

讨 论

现代病理事业的发展对病理技术员提出了更新更高的要求，这需要广大病理技术员不断进取、勇于创新，破解发展的难点，转变发展的思路，寻找发展方法，保证病理科在设施、设备、人员、技术、流程、质量、管理等医疗服务质量的标准相对一致性。提高病理技术的整体水平，打造一个技术先进、设备优良、流程合理、功能齐备、质量可靠、标准一致、制度规范、发展均衡的病理技术平台。建立公平、准确、安全、快捷的医疗模式，满足随着社会的发展和进步，人民群众对医疗服务日益增长的需求。造就一支数量充足、结构合理、技艺精湛、爱岗敬业、作风过硬的高技能的病理技术队伍，不断探索现代病理技术发展的新的问题、揭示新的规律、提出新的概念、建立新的理论，迎接新的挑战。

参考文献

1 中华医学会.临床技术操作规范-病理学分册.北京:人民军医出版社,2004.

2 王伯,李玉松,黄高升,张远强,主编.病理学技术.北京:人民卫生出版社,2000.