免疫胶体金技术及其在兽医临床上的应用

[摘 要] 免疫胶体金技术（Immune colloidal gold technique，GICT）是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术，具有使用方便快捷、成本低、应用范围广、标记物稳定、健康无害等优点。免疫胶体金技术发展于二十世纪八十年代，近年来在生物医学的各个领域得到广泛应用，尤其在兽医临床上的应用更有广阔的发展空间。本文将从免疫胶体金技术的基本原理、特点、制备方法等方面出发，综述免疫胶体金技术在兽医临床上的应用现状及发展前景。

[关键词] 免疫胶体金 兽医 临床应用

[中图分类号] S854.43 [文献标识码] A [文章编号] 1003-1650（2016）10-0268-01

免疫胶体金技术是把胶体金作为标记物然后作用于抗原体，使其与蛋白质等各种大分子物质结合，然后根据抗原抗体反应来达到检测目的的一种新型的相对成熟的免疫标记技术。胶体金是由氯金酸（HAuCl4）在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，聚合成为特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态。在弱碱的环境下胶体金是带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。根据胶体金的一些物理特性的反应，比如胶体金颗粒的大小、形状、颜色等，以及与其相结合的大分子物质所表现的免疫性和生物学特性作用，使得胶体金在免疫学及细胞生物学等领域被大规模应用[1]。

1 免疫胶体金技术的基本原理及胶体金颗粒制备方法

胶体金标记，实际上就是胶体金将蛋白质等各种大分子吸附到胶体金颗粒表面的包被过程，这个过程中的主要原理是由于胶体金颗粒表面是呈负电荷，而蛋白质等各种大分子呈正电荷，两种电荷基团由于静电吸附作用而牢固结合。而胶体金颗粒大小不一、颜色各异，其制备可以利用抗坏血酸还原法和柠檬酸还原法等方法从氯金酸中快速提取。在制备过程中使用的玻璃器皿必须清洗干净，要使用优质的氯金酸，否则会影响到胶体金颗粒的稳定性。胶体金颗粒能够强力吸附蛋白质等各种大分子物质，与免疫球蛋白、毒素、抗生素等各种非共价进行有效结合，因此在临床试验及各种医学研究中成为实用的器材，被广泛应用[2]。

而免疫胶体金技术就是利用胶体金颗粒的各种物理特性，及其与蛋白质等各种大分子结合能够改变颜色，在显微镜下容易进行观察研究的特点而研发的。胶体金颗粒在与蛋白质结合时在显微镜下会呈黑褐色；当这些标记物大量聚集时，在肉眼下会呈红色等，因而适用于定性或者半定量的快速免疫检测法，而且标价后的大分子物质活性不会发生改变 [3]。

2 免疫胶体金技术的优点

2.1 使用方便快速，便于基层使用和现场使用，免疫胶体金的所有反应能在十五分钟内结束；

2.2 免疫胶体金技术使用的成本低，不需要购进特殊的仪器设备；

2.3 免疫胶体金技术的应用范围特别广泛，可以满足不同的检测条件；

2.4 免疫胶体金技术可以进行多项检测，增加样品的使用率，降低成本的同时解决了一些样品难以取得的困难；

2.5 胶体金技术中的标记物性质稳定，标记样品的保存时间较长，保存条件要求较低，并且没有信号衰减现象；

2.6 胶体金本身呈红色，易于研究，减少了酶标需要加入发色试剂等致癌性底物，降低了危害。

3 免疫胶体金技术在兽医临床上的应用

当前，我国畜牧正处于逐渐的发展阶段，由于各种不利因素的存在导致畜牧兽医防疫工作存在诸多的问题。首先，我国目前多数地区没有按照国家规定建立符合要求的兽医疫病区，关于防疫工作的教育宣传相对不足，导致大部分散养殖的农户缺乏动物疫情相关的专业知识，没能在养殖过程中采取必要的预防措施防止动物疫情的发生。其次，目前我国动物疫情的防疫体系还不够完善，缺乏必要的设施设备，使得防疫工作无法顺利的开展。再次，基层防疫工作人员素质不够高。动物的防疫工作不像人类的防疫工作一样受各个单位重视。在动物实施防疫工作中，常常出现一针多畜的现象，缺乏必要的消毒工作。另外，由于国家在动物防疫方面缺少必要的资金支持，使得工作人员缺少工作热情等。可见，我国畜牧兽医防疫工作存在极大的问题，应急需采取相关措施改善这种局面。

而免疫胶体金技术具有使用方便快捷、成本低、应用范围广、标记物稳定性强、健康无害等优点，适合在兽医临床中大力推广。在兽医临床上，可以利用胶体金技术制备的试纸对畜禽病毒类疾病进行诊断，有利于对畜禽类疾病进行有效的检测和预防。例如，王长美等用根据临床症状和病变情况、免疫胶体金试验以及病毒分离和鉴定，快速诊断证实鹅群患禽I型副粘病毒病。王爱华等兽医学研究人员采用15nm的胶体金颗粒作为实验的标记物，制备出用于检验鸡减蛋综合征病毒（EDsv）的胶体金试纸条。这种胶体金试条纸可以检验出浓度约为1.35“g/mE的纯化EDSV。同时程安春等利用银加强胶体金探针检测提纯的鸡减蛋综合征病毒（EDSV）抗原的最低检出量为0.1 1719斗g/mL，用这种检测方法检测了人工感染的50只鸡采集的样本，对卵巢、输卵管峡部、咽喉部、软壳蛋的阳性率均为100%，粪便阳性率为92%。王泽霖等采用胶体金标记纯化的羊抗鼠IgG，建立了一种对鸡传染性支气管炎病毒（IBV）进行检测的银加强金标免疫技（Sliver-enhanced colloidal gold assay，SECGA），SECGA检测抗原可用IBV早期检测，具有群特异性，快速，敏感，简便，结果易判定。

4 结语

免疫胶体金技术具有使用方便快捷、成本低、应用范围广、标记物稳定性强、健康无害等优点，在兽医临床疾病诊断和检验检疫中得到了大力推广，尤其是在基层、农村等实验设施较差的地区更应得到普及。随着免疫胶体金新的标记物和制备方法的发展，免疫胶体金技术将会有更广阔的应用前景。

参考文献

[1]蔺俐仲，徐春志，靳朝.免疫胶体金技术及其在兽医临床上的应用[J].动物医学进展，2007，02：106-109.

[2]庄金秋，梅建国，沈志强.胶体金免疫层析技术在兽医临床诊断中的应用进展[J].中国动物检疫，2012，09：70-75.

[3]张凤珍.免疫胶体金技术的基本原理及其在兽医临床中应用的研究进展[J].畜牧兽医科技信息，2009，01：7-9.