慢性酒精摄入脑损伤小鼠模型的建立

【摘要】　目的　直接饮用含酒精水建立慢性酒精摄入脑损伤小鼠模型。方法　取BALB/c小鼠12只，通过直接喂食小鼠10%酒精水制备慢性酒精摄入脑损伤小鼠模型，喂养8周后，morris水迷宫和HE染色分别检测模型组小鼠行为学和脑组织改变。结果　模型组小鼠除嗜睡、行走不稳外，体重比对照组显著减轻（P

【关键词】　慢性酒精中毒；模型；动物

慢性酒精摄入会造成的神经元凋亡，各种认知功能也由此而受到影响（尤其是记忆力、分析能力和注意力）。会出现心理问题、焦虑、抑郁，尤其母体吸收酒精，可引起胎儿酒精综合征，导致神经元发育过程中变性或凋亡，从而影响胎儿［1］。建立良好稳定的酒精中毒的动物模型对于研究慢性酒精中毒的发病机制，指导慢性酒精中毒的防治有实际应用价值。尤其是长期以来多数慢性酒精摄入模型多是采用了灌胃的方法，并且很少在小鼠中建模，局限了研究慢性酒精摄入对脏器，尤其是大脑的病理改变中的作用.本研究探索通过直接饮用含酒精水建立慢性酒精摄入脑损伤小鼠模型，模仿自然摄入，避免了灌胃可能造成小鼠脏器损伤，尤其是脑组织的应激改变，影响对小鼠脑损伤机制的研究。

1　材料和方法

1.1　实验动物　选用健康6周龄BALB/c雄性小鼠12只，体重（23±2g），购自于徐州医学院实验动物中心。

1.2　药物与试剂　无水医用酒精（西陇化工股份有限公司，分析纯，酒精度100%）；鼠饲料（购自于徐州医学院实验动物中心）；HE染色试剂盒（碧云天生物研究所）；olympus倒置显微镜X70（日本olympus公司）；MGC-BP智能型光照培养箱（上海一恒科技有限公司）；冰冻切片机（德国莱卡CM1900）；BK10000光学显微镜（重庆奥特光学仪器有限责任公司）。

1.3　实验方法

1.3.1　实验分组　将12只6周龄正常BALB/c鼠，随机分二组：不饮酒对照组和慢性酒精摄入组，分笼饲养。模型组小鼠给予酒精混合饮水喂食（乙醇浓度为10%）；对照组给予常规不含酒精饮水，两组小鼠均为标准饲料饲养。喂食过程观察记录模型组小鼠的性情变化，每5天检测小鼠体重一次。

1.3.2　建立模型2个月后小鼠行为学检测后，称重，短颈处死模型组和对照组小鼠，取小鼠大脑甲醛固定，脱水，-80°C切片，进行HE染色（染色步骤见碧云天HE染色试剂盒），显微镜下观察。

1.4　统计学分析　采用SPSS软件进行统计学处理，组间比较采用t检验，以P

2　实验结果

2.1　一般观察　对照组小鼠皮毛光滑润泽，行动灵活，进食及大便正常；模型组小鼠随着饲养，活动量减少、精神萎靡、嗜睡，毛皮松软、稀疏、蓬乱缺乏光泽，进食量减少，体重出现负增长，两组小鼠的体重有统计学差异（P均

2.2　Morris水迷宫　实验通过记录小鼠每次自入水时间直至其找到并爬上平台所需的时间，判断小鼠自身的学习记忆能力，以此作为小鼠脑损伤的一个指标。水迷宫训练5天时间里，模型组小鼠潜伏期时间比正常组小鼠需要时间长，无论是入水找到平台时间还是经过平台的时间都与正常组小鼠相比有显著性差异（P

2.3　组织学观察　冰冻切片HE染色分别观察模型组和正常组小鼠脑组织，发现模型组脑组织有明显的结构空泡、胞质增大、排列疏松、结构不清晰，隐约可见变性坏死的死亡细胞轮廓，提示慢性酒精摄入对小鼠脑照成了一定的实质性损伤。

3　讨论

酒精具有脂溶性，极易透过血脑屏障，与脑中丰富的卵磷脂直接结合，使神经细胞变性、神经纤维脱髓鞘、大脑皮质神经元活动受到抑制，产生持久的神经毒性作用［1］。慢性酒精中毒对人体的损害是一个长期的过程，可造成精神、神经系统和多器官的损害，尤其是对大脑皮层的损害，影响认知功能，可产生精神病性症状［2-3］。研究认为长期酒精摄入导致线粒体功能紊乱、氧化乙醛代谢能力下降、脑组织和脑静脉中乳酸浓度升高，引起脑组织的损伤。研究表明通过母体吸收酒精，引起胎儿酒精综合征，导致胎儿神经元发育过程中变性或凋亡。本实验通过长期低剂量喂食酒精构建慢性酒精摄入脑损伤小鼠模型，模拟现实中慢性乙醇中毒患者长期饮酒的过程。本实验结果表明，直接饮用含酒精水后的小鼠大脑组织神经细胞的数目减少、体积缩小、变形；细胞核轻度固缩，深染，结构消失；部分细胞坏死，细胞溶解、消失，隐约可见轮廓模糊的坏死细胞；小鼠的学习记忆能力大幅衰减，这些症状与与临床上长期饮酒患者出现学习力、记忆力、定向力和智力等功能降低相符合。通过直接在饮用水中加入酒精进行慢性酒精摄入脑损伤小鼠模型造模方法，简单易行，但要保证每只动物饮酒量的一致和酒精有效浓度。这种造模方式更符合自然状态下的慢性酒精中毒脑损伤特征，适合于慢性酒精中毒动物模型的制备，有利于慢性酒精摄入异常机制的深入研究。

参考文献

［1］　李翠莲，石秋艳，等.慢性酒精中毒脑损害［J］.实用心脑肺血管病杂志，2010，18（2）：197-198.

［2］　Low　enfels　AB，Maisonneuve　P.Alcohol　consumption　and　the　risk　of　stroke　［J］.N　Engl　J　Med，2000，342（15）：1137-1138.

［3］　丁锵，刘韧，李凡，等.酒精中毒性精神障碍临床特征分析［J］.河南科技大学学报（医学版），2005，23（1）：59-60.