细胞色素P450表氧化酶2J2基因G312R多态性与脑卒中的关系

［摘 要］ 目的 探讨我国汉族人群细胞色素P450表氧化酶2J2（CYP 2J2）基 因G312R多态性与脑卒中的关系。方法 选择脑卒中病例180例和性别、年 龄相匹配的健康人群190例，采用PCR_RFLP方法进行CYP2J2基因G312R多态性分析。 结果 370例均为野生型，未发现杂合子和突变后纯合子。结论 CYP2J2基因G312R突变不是我国部分人群缺血性脑卒中、脑出血发病的遗传危险因素。

［关键词］ 细胞色素P450表氧化酶2J2；基因多态性；脑卒中

中图分类号：R743.3 文 献标识码：A 文章编号：1009_816X(2008)03_016 6_02

我国每年新发生卒中病例约260万，已成为我国人民致死致残的主要病因之一［1］。 脑卒中是遗传因素与环境因素共同引起的一种疾病。细胞色素P450表氧化酶2J2（CYP2J2） 基因在心血管系统中表达最为丰富，CYP2J2催化花生四烯酸生成环氧化廿碳三烯酸(EETs) ［2］，在心脑血管中有着广泛的生物学效应， 如抗炎；抑制平滑肌细胞增殖与迁移；调节血管张力；促纤溶；抗动脉粥样硬化等作用［3～10］。Lee SS等研究发现CYP2J2基因G312R突变导致CYP2J2活性几乎完全尚失［11～12］。但CYP2J2基因是否与脑卒中有一定的相关性？本文选择180例脑卒中病例和19 0例性别、年龄相匹配的健康人群，研究CYP2J2基因G312R多态性与脑卒中的关系。

1 对象与方法

1.1 对象：所有病例为2000年12月至2003年1月由武汉多家医疗单位(华中科技大学同济医 院， 湖北省新华医院，武钢第二职工医院等)连续收集的脑卒中患者，共180例，平均年龄61.16 ±11.06岁，脑梗死患者112例，脑出血患者68例。病例主要为脑血栓形成、腔隙性脑梗死 及脑出血，均经脑CT和(或)MRI检查证实的急性首次发作的脑卒中患者，不包括出血型 梗死和无症状腔隙性脑梗死。排除标准：①感染；②风湿免疫性疾病；③肿瘤；④血液系 统性疾病；⑤代谢性疾病(糖尿病除外)；⑥严重肝肾功能不全患者；⑦主动脉夹层及各种创 伤所致血管损伤。

对照组系体检健康者及同期医院内住院非脑卒中患者190例，平均年龄为63.16±11.06岁 。排除有肝肾疾病；急性心肌梗死及既往有脑卒中病史患者。病例组与对照组参与者均为汉 族。

各组基本情况见表1。

1.2 方法：(1)基因组DNA提取：按常规方法经蛋白酶K_SDS处理，酚氯仿抽提3次，无水乙 醇沉 淀提取基因组DNA。(2)引物设计与PCR反应上游引物：5'GGCAGGACAGTG CTAATG 3'，下游引 物：5'ATCCCAGGAGGCACTATTC 3'。PCR扩增用基因组DNA 100ng，上下游引物各0.5μl(10pm ol/L),4×dNTP混合物2μl(2.5mM)，Mg2+2μl(25mM)，10×PCR缓冲液2.5μl，Taq 酶 0.3μl(TaKaLa 5U/μl)，扩增体系为25μl。PCR扩增条件：94℃ 5min，94℃ 30s，54℃ 3 0s，72℃ 30s，共35个循环；72℃延伸5分钟(PCR仪：ABI2720)。(3)CYP2J2基因多态性检测 与鉴定：取5μl CYP2J2 PCR扩增阳性产物经5U MspI(Fermentas)酶切，酶切产物经1.5%琼 脂糖凝胶电泳，紫外灯下判断基因型。野生型含MspI酶切位点被完全酶切产生260bp和121bp 两条带，杂合子被部分酶切产生381bp，260bp和121bp三条带，突变纯合子R仅381bp一条带 。

2 结果

370例均为野生型，未发现杂合子和突变后纯合子：见图1。

3 讨论

CYP2J2基因位于1p31.3_p31.2，该基因共编码502个氨基酸。CYP2J2广泛分布于人体的心 脏、肾脏、血管、肝脏、肺等组织器官，其中以心脏的表达水平最高，个体表达差异性很小 。CYP2J2催化花生四烯酸代谢为EETs(EETs;5,6_,8,9_,11,12_和14,15_EET)，EETs有许 多生物学作用并与心脑血管疾病有关。EETs通过激活钙离子敏感的钾通道，使平滑肌细胞处 于超极化状态而扩张血管，从而不少学者提出EETs是内皮源性超极化因子；EETs还能通过CA MP_PKA途径抑制血管平滑肌细胞的迁移［5］；在血管内皮细胞EETs通过抑制转录因 子NF_κB和IκB激酶，抑制TNF_α和IL_1等炎症因子所诱导的血管细胞粘附分子_1、细胞间 粘附分子、E_选择素表达，发挥了抗炎作用［3］；EETs有促组织型纤溶酶原激活物 基因的表达，增加了纤溶蛋白溶解活性，在保持血管内纤溶系统平衡有着重要的作用［ 7］。近期研究发现CYP2J2 G_50T多态性显著增加了冠心病和高血压病的患病发病率 ［13～14］。在我们实验室研究中发现将含人类细胞色素P450表氧化酶2J2(CYP2J2)基 因导入自发性高血压大鼠后，自发性高血压大鼠血压与对照组比较有显著下降，提示细胞色 素P450表氧化酶通过产生EETs参与了动物血压的调节［15］。以上研究结果均表明CY P2J2基因可能对心脑血管系统有着重要的保护作用。

本研究通过聚合酶链反应和限制型片段分析对CYP2J2基因G312R多态性进行分析，结果370例 均为野生型，没有发现基因突变，据此我们认为CYP2J2基因G312R多态性可能与我国汉族人 群脑卒中的发病无关。

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