教学中常规病理切片制备的几点体会

[摘要]在临床诊断中经常要用到病理检查，经常需要制备病理切片，有的时候为了急于诊断出报告，所需病理切片的要求不高。而在教学工作中用到的病理切片的制备要比临床工作中用到的要求高的多。所以对组织的取材、固定、脱水、染色等每一个步骤要求都很高，这样才能制备出好的教学切片，为达到良好的实验教学效果奠定基础。

[关键词]病理切片；染色；制备体会

[中图分类号]G642.4　[文献标识码]A　(文章编号]1009-6019-(2010)05-92-02

病理组织制片技术包括组织的取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片及染色等，每一项处理适当与否，都直接影响到切片质量。而教学切片质量的好坏，又直接影响到实验教学效果。常规石蜡切片是制作HE切片的重要环节，现将切片制备体会介绍如下。

1组织的取材、固定和洗涤

取材时组织块的大小厚薄应适当，过大过厚的组织，固定液不易渗透，引起固定不良；过小过薄的组织，在固定和脱水的过程中易变硬或产生弯曲扭转，同样影响切片质量。在教学工作中用到的病理切片的制备要比临床工作中用到的要求高的多。这样才能保证学生对病理知识的掌握和学习。切片的制备对组织的取材、固定、脱水、染色等每一个步骤要求都很高，所以取材的大小视病变而定，一般不超过15ram×15ram，厚度比常规要厚约2-5mm，并且尽可能的取多块组织保存备用。取材时要认真、细致、准确的注意病变的部位、分布、性质特点及病灶与周围组织的关系，取下的组织中要有病变，有周围正常组织，最好有交界状态的结构。这样就能从一张切片观察到正常与异常的对比，并能从静止的切片观察到疾病动态的变化和发展。因此要肉眼观察后确定取材组织，然后根据病变特点取材。取材厚度0.3～0.5cm，从而使同一蜡块能够制作出较多的教学切片，以便于学生的观察。组织固定时固定液常用10％的中尔马林，浓度过高过低都会影响组织的固定。固定液的用量应为被固定标本体积的10～20倍，时间不少于48h。同时注意组织块与容器不要贴壁。固定后的组织材料需除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀，否则会影响以后的染色效果。洗涤的方法多数是流水冲洗，或者是用酒精。

2脱水及透明

脱水是将组织中的水份去除的过程。纯酒精不能与石蜡相溶，还需用能与酒精和石蜡相溶的媒浸液，替换出组织内的酒精。材料块在这类媒浸液中浸渍，出现透明状态，此液即为透明剂，透明剂有二甲苯、苯、氯仿、正丁醇等，各种透明剂均是石蜡的溶剂。而最常用的方法是利用乙醇氢键作用，使乙醇分子与组织的水分子逐步缔合，从而完成组织的脱水。其过程是使组织由低浓度到高浓度乙醇中逐一浸泡，最终达到组织脱水的目的。组织在低浓度酒精时间约3―12h／瓶，而在高浓度无水酒精和二甲苯中时间一定要严格掌握，多为1～3h和0.5～lh，否则会使组织块变硬变脆，影响下一步骤的进行。

3浸蜡和包埋

浸蜡的目的是置换出透明剂，常用熔点56～60％的石蜡。在浸蜡前应将切片石蜡加热熔化，使石蜡内挥发性物质蒸发，待凝固后放入比蜡熔点高5℃～6℃的恒温箱备用，使用时选取上层清洁纯净部分，时间一般为2～3h。用于包埋的石蜡其温度要比浸蜡的石蜡高2℃～3℃，若包埋、浸蜡的温度过高或时间过长都会引起组织过硬过脆，相反组织松软无法制片。包埋的规范性确定了组织切面完整性的基础。

4切片贴片及染色

4.1切片

先粗切至组织面完整暴露，用毛刷把蜡屑刷掉，保持工作台面洁净以防污染。当组织块接近刀面时，速度放缓。同时向组织面吹气，防止静电。需要注意的是切片刀要锋利，避开缺口，切片刀放置的角度大小要合适，切片机各部位的零件螺丝要旋紧。切片时用力要均匀一致，不宜过重过猛，以免造成切片厚薄不均。

4.2贴片及烤片

配制20％～40％的酒精溶液。只需将切好的石蜡膜沾上低浓度酒精，然后将石蜡膜漂浮于42℃左右的温水上，这样切片马上自然展平，避免了传统方法用镊子撑折造成的人为裂隙，制成的片子效果极好。然后放在烤片机上烘烤。

4.3染色

使细胞组织内不同结构呈现不同颜色以便于观察。我们教学中常用的是HE染色法。

5封固及保存

用中性塑胶封固后应放在干燥通风处保存。

6结语

我们所用的切片制备方法看似简单，但每个操作步骤都缺一不可，只有认真、规范的操作，才能制作出高质量的病理切片。一张教学切片的好坏，直接影响到实验教学质量，反映了病理技术人员的技术水平，只有刻苦钻研业务技术，不断探索，对技术精益求精，才能为病理教学提供优质的教学切片。