高效液相色谱法测定鹿胎膏中人参皂苷Rg1的含量

摘 要 目的：测定鹿胎膏中人参皂苷Rg1的含量。方法：采用高效液相色谱法(HPLC)。结果：人参皂苷Rg1检测浓度36.8～184.0mg/L，范围内线性关系良好(r=0.9999)，平均加样回收率99.77%(RSD=1.81%，n=6)。结论：该方法可靠、灵敏、准确、易行。

关键词 高效液相色谱法 鹿胎膏 人参皂苷Rg1

doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2012.01.268

鹿胎膏由红参、熟地黄、阿胶、当归、益母草、鹿胎粉、鹿茸(去毛)、香附(醋制)、小茴香(盐制)、龟甲等24味中药精制而成，具有补气养血，调经散寒的作用，主要用于气血不足、虚弱羸瘦、月经不调、行经腹痛，寒湿带下的治疗。为了了解宁夏市场上鹿胎膏的质量，我们对处方中红参中的有效成分人参皂苷Rg1用HPLC进行含量测定，结果满意。

仪器与试药

LC-10ATvp高效液色谱仪，包括SPD-10AVP紫外检测器、SIL-10Advp自动进样器；Anastar色谱数据系统；人参皂苷Rg1；乙腈、甲醇均为色谱醇，水为超纯水；鹿胎膏。

方法与结果

色谱条件：色谱柱：SHIP-PACK VPODS(150mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈-水(28:72)，流速1.0ml/分，柱温30℃，检测波长210nm。样品中人参皂苷Rg1与其对照峰的保留时间基本一致，且分离良好，见图1。

标准曲线：①对照品储备液的制备：准确称取人参皂苷Rg1对照品9.2mg，置于25ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，即得对照品储备液。②线性范围：分别取上述储备液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml置于10ml容量瓶中，加甲醇溶液配制成浓度分别为36.8、73.6、110.4、147.2、184.0mg/L的系列对照溶液。分别精密吸取20μl注入色谱仪中，测定峰面积，以峰面积积分值A对浓度C做线性回归，得回归方程A=2415.0C-956.4(r=0.9998)。线性范围36.8～184.0mg/L时，在此范围线性关系良好。

供试品溶液制备：取供试品10g(2块)，剪碎，加硅藻土6g，研匀，置索氏提取器中，加甲醇100ml，加热回流提取3小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，移至分液漏斗中，用水饱和正丁醇振摇3次，20ml/次，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次，20ml/次，取正丁醇液蒸干，残渣加水30ml使溶解，滤过，滤液通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，柱高12cm)，以水50ml洗脱，再用40%乙醇30ml洗脱，弃去2次洗脱液，蒸干，残渣加甲醇残渣用甲醇溶解并转移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即为供试液［1］。

阴性样品的制备：取不含人参的阴性样品，按“供试品溶液制备”项下操作制备阴性样品溶液。依法测定，测定结果为阴性样品色谱中，在与人参皂苷Rg1对照品相同的保留时间的位置上，无相应峰出现，表明其他成分对人参皂苷Rg1无干扰。

精密度试验：精密吸取同一浓度对照品溶液(110.4mg/L)重复进样5次，20μl/次，根据对照峰面积积分值，计算RSD 1.08%(n=5)。

稳定性试验：取同一批供试品溶液，从0～5小时间隔进样，20μl/次，根据峰面积积分值，计算RSD 1.05%(n=5)，表明供试品溶液至少在5小时内稳定。

重现性试验：同批供试品连续取样5份，依样品测定项下所述方法测定，计算含量。结果表明，方法重现性良好，RSD 1.36%(n=5)。

加样回收率实验：准确称取一定量的人参皂苷Rg1对照品，加入已知含量的样品中，按“供试品溶液制备”项下方法制备成供试品溶液，并按“色谱条件”项下色谱条件测定，计算回收率，结果见表1。

样品的含量测定：取不同批号的鹿胎膏，依上述色谱条件进行测定，以外标法计算样品中人参皂苷Rg1的含量，结果不同鹿胎膏中人参皂苷Rg1的含量分别为2.978mg/g、3.012mg/g、3.033mg/g。

讨 论

鹿胎膏由红参、熟地黄、阿胶、当归等多种中药组成的复方制剂，所含成分比较复杂，干扰成分较多，因此在使用HPLC法测定人参皂苷Rg1含量前需要进行样品预处理，结果表明经通过D101型大孔吸附树脂柱处理制成的供试液测得的HPLC图，杂质峰较少，基线较平稳，符合含量测定的要求，所以选择了通过D101型大孔吸附树脂柱。

供试品溶液通过D101型大孔吸附树脂柱后，分别以水、40%乙醇洗脱，结果水将大部分的糖、蛋白质、氨基酸等大极性成分洗出，40%乙醇将不同极性的杂质大部分洗出，实验结果表明，上述洗脱液