反相高效液相色谱法测定人参源胶囊中人参皂苷Rh2的含量

摘要： 目的测定人参源胶囊中人参皂苷Rh2的含量。方法采用反相高效液相色谱法，色谱柱：ODS-C18 (5μm，250 mm×4.6 mm), 流动相：乙腈-水（60:40），流速： 1.0 mL/min，检测波长：203 nm，柱温：30℃。结果人参皂苷Rh2在0.08～0.24 mg/mL的浓度范围内，其进样量与峰面积呈良好的线性关系，r =0.999 2,平均回收率为99.75%（n=6）。结论本法简便、快捷、准确，重复性好，可用于人参源胶囊含量的测定和质量控制。

关键词：高效液相色谱法；人参皂苷Rh2；含量测定

中图分类号： R927.2文献标识码：A文章编号：1672-979X(2008)07-0035-03

Quantitative Determination of Ginsenoside Rh2 in Ginseng Capsules by RP-HPLC

FENG Lin1, ZENG Xian-bin1*, HU Xian-hui2

(1.Jiangxi University of TCM, Nanchang 330004, China; 2.Tianjin Tasly Modern TCM Resources Co.,Ltd, Tianjin 300402, China)

Abstract：Objective To determine the content of ginsenoside Rh2 in Ginseng Capsules. Methods A RP-HPLC method was adopted with ODS-C18 column (5 μm，250 mm×4.6 mm), mobile phase of acetonitrile-water（60：40）, flow rate of 1.0 mL/min and column temperature of230℃. The detection wavelength was 203nm. Results There was a good linear relationship for ginsenoside Rh2 in the range of 0.08 mg/mL～0.24 mg/ mL(r = 0.999 2) and the average recovery was 99.75%（n=6）. Conclusion This method is simple, rapid and accurate for the assaying and quality control of Ginseng Capsules with a good reproducibility.

Key words：HPLC; ginsenoside Rh2; assay

人参（Pamax ginseng C.A.Mey.）为五加科多年生草本植物，其诸多的生物活性成分近年来被研究者所关注。红参中含有人参皂苷Rh2，是生晒参和白参所没有的特殊成分。现代药理学医学表明，人参皂苷Rh2具有明显的抗肿瘤作用，对癌细胞有分化诱导和抑制作用[1, 2]。人参源胶囊是以吉林红参提取物为主要原料，含多种人参皂苷成分，尤其以人参皂苷Rh2含量较高。本实验采用反相高效液相色谱法，通过对不同提取方法和不同流动相的研究，最终确立用甲醇提取，以乙腈-水为流动相，测定人参源胶囊中的主要成分人参皂苷Rh2，方法简便，可靠，操作性强。

1仪器与试药

1.1仪器

HPLC系统（Waters2695专用泵）； 2487双通道紫外-可见光检测器； Empower色谱工作站

1.2试药

人参皂苷Rh2对照品（中国药品生物制品检定所）；人参源胶囊（批号：070201，070202，070203，天士力现代中药资源有限公司）；乙腈（Merck色谱纯）；超纯水；其他试剂均为分析纯。

2实验方法

2.1色谱条件[3]

流动相：乙腈-水（60:40），流速：1.0 mL /min；色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶（YMC-Pack ODS-A，5μm , 250 mm×4.6 mm）；柱温：30℃；检测波长：203 nm。

2.1.1检测波长的选择[3]取人参皂苷Rh2 对照品的甲醇溶液，经紫外-可见分光光度计扫描，在203 nm处有最大吸收，故选203 nm为测定波长。

2.1.2系统适应性试验取0.202 mg/ mL人参皂苷Rh2对照品溶液，连续进样5次，其峰面积RSD1.8% ；其主峰的理论板数（N）和对称因子（f）依次为20000和1.01；主峰与邻近峰的分离度均大于2.0。

2.2对照品溶液的制备

精密称取人参皂苷Rh2对照品 5.05 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得，备用。

2.3供试品溶液的制备[4]

取人参源胶囊内容物适量，研匀，精密称取1.0 g置10 mL量瓶中，加甲醇适量，超声提取溶解，用甲醇稀释至刻度，摇匀，过0.45μm的微孔滤膜，备用。

2.4干扰性试验

取不含红参提取物的样品，依法制成阴性样品溶液，按照高效液相色谱法，取10μL注入色谱仪，结果表明，在供试品溶液主峰的保留时间处无吸收峰。阴性样品溶液、人参皂苷Rh2对照品溶液、人参源胶囊供试品溶液的色谱图见图1～图3。

2.5标准曲线的制备

精密吸取对照品溶液4，6，8，10，12μL，依次注入色谱仪，按上述条件测定。以进样量X为横坐标，以峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线，数据如表1，回归方程为Y=202 758X+255 017， r =0.999 2

表 1标准曲线测定结果

2.6稳定性试验

取同一批号的样品，依法制成供试品溶液，分别于0 ，2 ，4 ，6，8 h，取10μL注入色谱仪，结果见表2。

2.7精密度试验

取同一批号的供试品溶液，重复进样6次，峰面积的RSD为1.4%。结果见表3。

2.8重现性试验

精密称取同一批样品6份，按上述方法操作。人参皂苷Rh2的平均含量为0.976 58 mg/g，峰面积的RSD为1.4%。

2.9加样回收率试验

取约0.5 g样品6份，精密称定，各精密加入0.202 mg/mL的对照品溶液3.7 mL，制成供试品溶液，依法测定，结果见表4。

2.10样品测定

精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μL，按上述色谱条件进行测定，按外标法计算，结果见表5。

3讨论

（1）在供试品制备方法实验中，有乙醚脱脂后正丁醇超声提取[4] ；氯仿脱脂后正丁醇提取液上大孔树脂，收集甲醇部分[5] 得到供试液等方法，通过比较，我们选定甲醇直接超声的提取方法，其提取效率等优于其它方法。

（2）HPLC方法学研究中，流动相选择曾试用过甲醇-水、乙腈-水系统的多种比例[6,7]，最后选定以乙腈-水（60:40）为流动相，使制剂中的人参皂苷Rh2成功分离，并且保留时间在20min之内，操作简便，结果准确，重复性好，能够有效地控制产品质量。

参考文献

[1]李世辉，魏影非，封江彬，等. 人参皂苷Rh2对SP2/O骨髓瘤细胞的作用及其机的初步探讨[J]. 中成药，2006，27（7）：365-367

[2]梁伟，孙铁民，金雨，等.西洋参茎叶总皂苷制取人参皂苷Rh2的应用研究[J].中医药学刊，2004，22（5）：957-958.

[3]丁长江，孟勤，尹建元，等.HPLC法测定西洋参茎叶总皂苷降解物中20（S）-人参皂苷Rh2的含量[J].中草药，2002，33（3）：229-230.

[4]凌芳，鄂秀辉，张文生. 高效液相色谱法测定人参提取物中Rh2的含量[J]. 天津理工学院学报，2003，30（1）：86-89.

[5]中华人民共和国药典委员会，中国药典（2005版）一部[S].北京：化学工业出版社.2005：6.

[6]蒋磊，赵寿经，梁彦龙，等. HPLC法测定酶转化生产人参皂苷Rh2的含量[J].中国新药杂志，2004，20（1）：41-44.

[7]邵月婷，李峰，高丽芳，等. 人参皂苷Rh-2诱导PC-3M细胞凋亡及其对新基因GRIM-19表达的影响[J]. 吉林大学学报(医学版)，2006，32（02）：128-130.