高效液相色谱法测定乳增宁胶囊中淫羊藿苷的含量

【摘要】 目的 建立乳增宁胶囊中淫羊藿苷含量的测定方法。方法 采用高效液相色谱法,色谱柱为hypersil ods c18 (4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为甲醇-水(70∶30),检测波长275 nm,流速为1.0 ml/min。结果 淫羊藿苷在0.105～0.840 μg范围内,进样量与峰面积呈良好的线性关系(r＝0.999 8),平均回收率为100.5%,rsd＝1.14%(n＝6)。结论 该方法简便快捷,重复性好,可作为乳增宁胶囊中淫羊藿苷含量的测定方法。

【关键词】 淫羊藿苷；乳增宁胶囊；高效液相色谱法；含量测定

abstract：objective to develop a method for determining the content of icariin in ruzengning capsules. methods a hplc method was set up to with hypersil ods c18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm) column, and methanol-water (70?30) as mobile phase, the uv detection wavelength was 275 nm and the flow rate was 1.0 ml/min. result the calibration curve was showed good linearity (r＝0.999 8) within the range of 0.105～0.840 μg and the average recovery was 99.5%, rsd was 1.27% (n＝6). conclusion the method is simple and rapid, and with good reproducibility for the determination of icariin in ruzengning capsules.

key words：icariin；ruzengning capsules；hplc；content determination

乳增宁胶囊由艾叶、淫羊藿、柴胡、川楝子、天门冬、土贝母6味药材经加工制备而成,具有疏肝解郁、调理冲任的功效,临床上用于肝郁气滞型及冲任失调型的乳腺增生等的治疗[1]。本试验参考文献[2-3]的方法,以高效液相色谱(hplc)法测定乳增宁胶囊中淫羊藿苷的含量,拟建立简便快捷、专属性和重复性均较好的含量测定方法。

1 仪器与试药

日本岛津lc-10atvp型高效液相色谱仪；spd-20avp型紫外检测器；kq-100db型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。淫羊藿苷对照品(中国药品生物制品检定所提供,批号110737-200312)；乳增宁胶囊(市售,批号分别为070901、080301、080302、080303)。甲醇为色谱纯；其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：hypersil ods c18(4.6 mm×250 mm,5 μm)；流动相：甲醇-水(70?30)；检测波长：275 nm；流速：1.0 ml/min；柱温：(30.0±1)℃；保留时间：约为10 min；进样量：20 μl；理论塔板数按淫羊藿苷计应不低于2 000。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取淫羊藿苷对照品适量,置棕色量瓶中,加甲醇制成每1 ml含25 μg的溶液,即得。

2.3 供试品溶液的制备

取本品装量差异项下的本品内容物,研细,混匀,精密称定约0.5 g,置50 ml棕色量瓶中,加入70%乙醇约40 ml,超声处理20 min(功率100 w,频率40 khz),取出,放冷,加70%乙醇稀释至刻度,摇匀,静置,用0.45 μm微孔滤膜过滤,取续滤液,即得。

2.4 空白试验

取处方项下除淫羊藿以外的其余药材,按供试品溶液的制备方法制备阴性溶液,按上述色谱条件分析。在与对照品的相应位置上,无明显其他峰出现。见图1。

2.5 线性范围考察

配制52.5 μg/ml的淫羊藿苷对照品溶液。分别精密吸取1.0、2.0、4.0、6.0、8.0 ml转移至10 ml棕色量瓶中,用甲醇定容。分别精密吸取上述溶液各20 μl进样。以淫羊藿苷对照品量为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程为：y＝1.288×106x－3 479.602,r＝0.999 8。结果表明,淫羊藿苷对照品在0.105～0.840 μg范围与峰面积呈良好的线性关系。

2.6 精密度试验

取同一对照品溶液重复进样6次,测定,淫羊藿苷平均峰面积为722 896,rsd＝0.41%(n＝6),结果表明精密度良好。

2.7 重复性试验

取同一批供试品(批号070901)进行6次平行的供试品溶液制备与测定,结果淫羊藿苷平均含量为1.126 6 mg/粒,rsd＝0.82%(n＝6)。

2.8 稳定性试验

取同一批供试品(批号080301)适量,按上述方法制成供试品溶液,放置0、1、3、6、10、20 h,分别进行测定,结果平均峰面积为547 734,rsd＝2.83%,表明供试品溶液在20 h内稳定。

2.9 加样回收率试验

精密称取已知含量的同一批样品粉末6份,各约0.1 g,分别加入淫羊藿苷对照品溶液(0.216 mg/ml)1.0、2.0、4.0 ml,按供试品溶液制备方法制备供试液。照上述色谱条件进行测定,计算回收率,结果见表1。表1 淫羊藿苷回收率试验结果（略）

2.10 样品含量测定

取3批样品,按供试品溶液制备方法制备供试液,依上述色谱条件测定样品中淫羊藿苷的含量,测定结果见表2。表2 3批样品淫羊藿苷含量测定结果(略)

3 讨论

本试验曾考察了多种流动相：甲醇-水(15∶85)、乙腈- 0.4%磷酸(13∶87)、3%甲酸-甲醇(79∶21)和甲醇-0.5%醋酸(70∶30)等,结果发现甲醇-0.5%醋酸(70∶30)能够达到分离效果,且出峰时间适中,峰型较好。本试验对超声提取时间进行了比较,加入50%甲醇分别超声提取10、20、30、40 min,结果显示,淫羊藿苷在20～30 min提取完全,为了便于操作、提高检验效率,将超声时间确定为20 min。此方法简便快捷,重复性和稳定性均较好,操作简便,可用于乳增宁胶囊的质量控制。

【参考文献】

[1] ws3-140(x-130)-2000(z),中华人民共和国卫生部药品标准[s].

[2] 高红梅,鞠凤霞,白 冰,等.hplc测定回春胶囊中淫羊藿苷含量[j].中成药,2007,29(5)：附14－附15.

[3] 张 虹,郑 捷,叶显撑,等.高效液相色谱法测定升白合剂中淫羊藿苷的含量[j].中国医院药学杂志,2007,27(7)：872－874.