高效液相色谱法测定硫酸氢氯吡格雷的含量

[摘要] 目的：建立硫酸氢氯吡格雷的含量测定方法。方法：采用HPLC法，色谱柱Sino Chrom ODS-BP（4.6 mm×200 mm，5 μm），流动相：1%三乙胺（pH=4.0）-乙腈（25∶75），检测波长：225 nm，流速：1.0 ml/min。结果：硫酸氢氯吡格雷进样量在0.48～0.72 μg范围内呈良好的线性关系(r=0.999 9)。结论：本法简便、准确，重复性好，可用于该产品的质量控制。

[关键词] 高效液相色谱法；硫酸氢氯吡格雷；含量测定

[中图分类号] R927.2[文献标识码] A[文章编号]1673-7210（2011）03（c）-060-02

Content determination of Clopidogrel hydrogen sulfate by HPLC

LU Jie1, MENG Xiangjun2, WANG Fengqiu1

1.Liaoning College of Health Vocational Technology, Shenyang 110101, China; 2.Medical Center of Shenyang Medical College, Shenyang 110034, China

[Abstract] Objective: To establish a method for determination the content of Clopidogrel hydrogen sulfate． Methods: Sino Chrom ODS-BP column (4.6 mm×200 mm，5 μm) was used， mobile phase was 1％ triethylamine (pH=4.0)-acetontrile (25:75)，detection wavelength was 225 nm． Results: Clopidogrel hydrogen sulfate sample size located 0.48-0.72 μg， and favourable linear correlation (r=0．999 9) was showed． The flow rate was 1.0 ml/min. Conclusion: The method is convenient and accurate. Meanwhile, it also has good reproducibility, may be used to quality control of Clopidogrel hydrogen sulfate．

[Key words] HPLC; Clopidogrel hydrogen sulfate; Content determination

硫酸氢氯吡格雷（Clopidogrel）是一种血小板聚集抑制剂，临床上用于预防和治疗因血小板高聚集状态引起的心、脑及其他动脉的循环障碍疾病[1-3]。硫酸氢氯吡格雷的质量标准收载于国家药品转正标准47册，其标准号WS1-(X-471)-2003Z，本标准中硫酸氢氯吡格雷含量测定采用高效液相色谱法，使用内标法测定，经试验其柱效与分离度均达不到要求，笔者参照《美国药典》和国外相关文献[2-6]，对色谱条件进行优化。试验结果表明，笔者采用的色谱条件，具有分离度好、柱效高等优点，适合本品含量测定的要求。现报道如下：

1 仪器与试药

1.1 仪器

UV200 Ⅱ高效液相色谱仪（大连依利特科学仪器有限公司）；SunRun Express 色谱数据工作站（EC2000）；电子天平（AUY-120岛津-上海公司）；SinoChrom ODS-BP色谱柱（4.6 mm×200 mm，5 μm，大连依利特科学仪器有限公司）。

1.2 试药

乙腈（色谱纯，天津市四友精细化学品有限公司）；甲醇（色谱纯，天津市四友精细化学品有限公司）；三乙胺（分析纯）；硫酸氢氯吡格雷对照品（沈阳医学院药物中心）；硫酸氢氯吡格雷样品（批号：20090401、20090402、20090403，沈阳医学院药物中心）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：SinoChrom ODS-BP (4.6 mm×200 mm，5 μm)；流动相：1％三乙胺(pH=4.0)-乙腈（25∶75）；检测波长：225 nm；流速：1.0 ml/min，进样量：20 μl；理论板数按硫酸氢氯吡格雷峰计算应不低于5 000。

2.2 检测波长的选择

精密称取硫酸氢氯吡格雷对照品适量，加甲醇制成每毫升中含30 μg的溶液，摇匀，照紫外分光光度法（《中国药典》2010年版二部附录ⅣA），在190～400 nm处扫描，溶液在218 nm波长处有最大吸收。考虑溶剂干扰等因素，参考文献[2]，确定测定的检测波长为225 nm。

2.3 系统适用性试验

取硫酸氢氯吡格雷对照品（由硫酸氢氯吡格雷原料精制而得，沈阳医学院药物中心）约32.7 mg（相当于氯吡格雷25.0 mg），精密称定，置25 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

取对照品溶液20 μl注入高效液相色谱仪，记录色谱图。理论板数：N=87 286，按硫酸氢氯吡格雷峰计算应不低于5 000。硫酸氢氯吡格雷与其他杂质峰的分离度R=8.22＞1.5。图谱见图1。

2.4 线性关系试验

取硫酸氢氯吡格雷对照品32.7 mg，精密称定，置25 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，再分别精密量取上述溶液0.8、0.9、1.0、1.1、1.2 ml置25 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，分别精密量取20 μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，以检测量为横坐标，峰面积为纵坐标进行回归，得回归方程Y=1 542.2X+2.216（r=0.999 9）。结果表明，硫酸氢氯吡格雷检测量在0.48～0.72 μg范围内线性关系良好。结果见图2。

2.5 稳定性试验

精密称取硫酸氢氯吡格雷原料32.7 mg，置25 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。精密量取1.5 ml，置50 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度摇匀。室温放置，分别于0、1、2、3、4 h检测，计算其含量。RSD为0.44％，表明样品溶液在4 h内稳定。

2.6 精密度试验

2.6.1重复性试验

精密称取硫酸氢氯吡格雷原料32.7 mg，置25 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取1.5 ml置50 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度摇匀。连续检测6次，计算其含量。RSD为0.42％，其重复性良好。

2.6.2 重现性试验

精密称取硫酸氢氯吡格雷原料32.7 mg，连续称定6份，置25 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取1.5 ml置50 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度摇匀。计算其含量。RSD为0.36％，其重现性良好。

2.7 定量限试验

精密称取硫酸氢氯吡格雷对照品32.7 mg，置25 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。精密量取适量制成以氯吡格雷计浓度为0.15 μg/ml的溶液。精密量取20 μl注入液相色谱仪中，记录色谱图。按10倍信噪比S/N计，定量限约为3 ng。

2.8 灵敏度试验

精密称取定量限试验项下溶液1 ml，稀释至5 ml，混匀（0.03 μg/ml）。精密量取20 μl注入液相色谱仪中，记录色谱图，按3倍信噪比S/N计，最低检测限为0.6 ng。

2.9 样品含量测定

取硫酸氢氯吡格雷原料（沈阳医学院药物中心，批号：200900401、20090402、20090403），精密称取适量（约相当于氯吡格雷25 mg），置25 ml量瓶中，加甲醇适量使硫酸氢氯吡格雷溶解并稀释至刻度，摇匀，再分别精密量取1.5 ml，置50 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液20 μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取硫酸氢氯吡格雷对照品适量（约相当于氯吡格雷25 mg），同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。结果见表1。样品与标准品含量测定图谱见图2、3。

3 讨论

参考相关文献，对流动相进行优化选择，考察乙腈与三乙胺不同配比对硫酸氢氯吡格雷出峰时间的影响，发现增加乙腈比例有利于缩短保留时间，当三乙胺-乙腈为25∶75时，保留时间在8 min左右，能满足含量测定的要求。同时也考察了流动相pH对拖尾因子的影响，发现减小pH有利于消除拖尾，可能是因为酸性条件抑制组分的解离，增加中性分子存在的几率，增加组分在固定相中的溶解度，从而减少拖尾。当pH=4时，拖尾因子在0.95～1.00范围内，符合检测要求。本法测定硫酸氢氯吡格雷含量专属性强，结果准确、灵敏、快速，为硫酸氢氯吡格雷的质量控制提供了较好的方法。

[参考文献]

[1]袁静.氯毗格雷的药理学、临床疗效和耐受性[J].中国临床药学杂志,1999,8(4):69-70.

[2]Mitakos, Panderi, Validated LC method for the determination of clopidogrel in pharmaceutical preparations [J]. Journal of Pharmaceutical and Biochemical Analysis,2002,28(3):431-438.

[3]孙立平,张林潮.氯吡格雷在冠心病中的应用[J].医学综述,2006,12(19):1190-1192.

[4]国家药典委员会.新药转正标准:硫酸氢氯吡格雷[S].WS1-(X-471)-2003Z.

[5]美国药典委员会.美国药典[M].30版.北京:中国知识出版社,2005.

[6]Gandhimathi M, Ravi TK. High Performance liquid Chromatographic determination of aspirin and clopidgrel in tablets [J]. Indian J pharm Sci,2007,69:123-125.

（收稿日期：2010-12-17）

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