高效液相色谱法测定卡铂粉针和水针剂的含量

摘要：利用高效液相色谱法可准确测量与分析出卡铂粉针和水针剂的含量，现在测量之前建立有效的高效液相色谱测量法，利用测量法中各种有效果的测量手段来对粉针以及水针剂中的卡铂含量加以测定与分析去，得出相关结论供同行参考。

关键词：高效液相色谱法；卡铂粉针；水针剂；含量；测量

卡铂，铂类第二代化合物，当前在临床医学抗癌领域中有着广泛的应用。市面上所售卖的卡铂品种主要为冻干粉针剂，用药方式为静脉注射。相比于顺铂，卡铂的药动学中的血清蛋白结合率更低，使用者的尿排泄量更少，可超滤非结合时型波半衰期的时间相对较长，血液浓度的降低速度比较缓慢。卡铂的药物表现形式中，冻干粉针剂的制作方式相对比较复杂，为了简化制作工艺，方便医学使用，相关研究人员在原有的铂类药物基础上研发出一种新的卡铂药物形式，即水针剂。针对水针剂中卡铂化合物的含量，现采用高效液相色谱法来对其继续进行测量，具体测量方法如下。

1、卡铂功能以及用量用法

卡铂制成卡铂注射液之后，可单用也可与其它抗癌药物联合使用。使用时需要注意以下一些问题：

1.1血液毒性

骨髓抑制是卡铂剂量限制性毒性。注射后14～24天白细胞和血小板降至最低，一般在35～41天可恢复正常水平。对白细胞低于4000/mm3及血小板低于8万/mm3都应慎用或减量应用。一般体质差、 65岁的病人和加强化疗的复治病人，产生的骨髓抑制更严重，持续时间更长。卡铂与其它骨髓中毒性药物合用或配合放疗，骨髓抑制会加重。但只要应用合理适当，骨髓抑制是可逆的，不会产生积累影响。

1.2胃肠毒性

用卡铂治疗后约15%的病人出现恶心，65%出现呕吐，其中有三分之一病人呕吐严重，恶心和呕吐通常在治疗后24小时消失。止吐剂能有效地预防治疗卡铂引起的恶心、呕吐。腹痛、腹泻、便秘和食欲不振也有报道。

1.3肾毒性

一般卡铂的肾毒性无剂量依赖性。约15%的病人BUN或血浆肌酸酐水平提高；25%的病人肌酸酐廓清率下降到60m1/min以下；肾功能损伤者，发生率和严重程度均提高。当肾功能衰竭时，无论水化是否能阻止肾毒性，应先降低卡铂用量或停药。

1.4过敏反应

据报道，约2%的病人给药后几分钟即出现皮疹，无其它明显原因引起的发烧、瘙痒、荨麻疹、红斑和极少有的支气管痉挛、低血压等过敏反应。同其它铂类化合物引起的过敏反应相类似。

1.5耳毒性

无临床症状的高频率的听觉丧失首先发生，只有1%发展为有症状的耳毒性，包括大多数导致耳鸣的病人。

2、测量仪器的准备与试药

利用高效液相色谱法来测量卡铂含量，测量需要准备的仪器主要有：型号为Shimadzu LC- 6A的高效液相色谱仪一台；型号为SPD- 6A的UV检测器一台；型号为C- R3A的积分仪一台。实际测量时，要将卡铂粉针剂与卡铂水针剂一起进行过滤脱气处理。处理完成后再进行试药操作。测量前还需要准备一份卡铂对照品，所选用的卡铂粉针剂规格为100mg/瓶，卡铂水针剂规格为150mg：15ml。

3、测量方法与测量结果研究

3.1色谱条件

该试验在具体实施时所采用的色谱柱为Spherisorb C18的不锈钢柱，以水为流动相；试验时将不锈钢色谱柱的温度控制为300℃；检测波长为229nm，试验检测时严格做好色谱图记录，并测定出峰面积。针剂中卡铂的含量用外标法来进行计算。

3.2配制溶液

试验需要配制两种溶液，一种为卡铂对照品溶液，一种是卡铂供试品溶液。其中，前者的配制方法为：先精密称取重量为260mg，且保持干燥状态的卡铂对照品，置入容量为25ml的容量瓶中，然后加上适当的水，将其稀释到一定刻度；紧接着是，用工具吸取稀释之后的溶液，容量约0.1-3.2ml，将其置入到10ml的量瓶中，再次加入清水，稀释到一定刻度，最后获得卡铂对照品溶液。

后者卡铂供试品溶液的配制方法则为：将量取适量的卡铂粉针剂或卡铂水针剂，同样将其盛装在容量为10ml的量瓶中，加水稀释至一定刻度，这时所获得的稀释溶液便可作为卡铂供试品溶液。

值得一提的是，卡铂含量测量试验中，不管是卡铂对照品溶液还是供试品溶液，试验时都需要密封保存，以保障试验中测量的准确性。

3.3稳定性试验

采用高效液相色谱法测量卡铂水针剂与卡铂粉针剂中的卡铂含量时，需要进行严格试验测量的除了试剂中的卡铂含量以外，还包括稳定性、精密度、重现性等等性质试验。测量样品试剂的稳定性时，具体的实施步骤为：量取10微升浓度相同的卡铂供试品溶液，将室温控制在一定范围，并在恒定的室温条件下，分别在0、1、2、4d不同时间里对溶液进行测定，测定结果为：在0、1、2、4d四次测量中，试剂峰面积基本没有发生变化，且根据试验测量现象计算分析出粉针剂中RSD为0.7%，水针剂为0.9%。样品试剂的稳定性良好。

3.4精密度试验

试验时，先精密量取一定量的卡铂对照品溶液，量取重复进行，次数不低于5次，多次试验后发现所量取的对照品溶液，峰面积比例的变化不会超过0.7%。

3.5重现性试验

试验中对同一批（数量为5份）卡铂供试品溶液进行试验，得出试验结果，发现卡铂粉针剂和卡铂水针剂中所含有的卡铂的平均值为标示量的99.2%和101.2%，而其中的RSD含量则分别为0.5%和0.8%。试验证明，粉针剂和水针剂溶液的重现性良好。

3.6回收率试验

精密量取粉针利和水针利供试品浴液，分别加至含已知量对照品溶液的25 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，取10 laL进样，计算回收率和相对标准偏差。结果，平均回收率分别为粉针剂98. 1%，水针剂101. 3% ；R SD分别为粉针剂0. 8%，水针剂1. 1% （ tt= 5）。

3.7样品的测定

取供试品溶液和对照品溶液，分别精密量取上述溶液10ml，注入仪器，记录色谱图，测量对照品和供试品待测成分的峰而积，按外标峰而积法计算含量。测定3批样品，结果见表1。

4、结束语

本文条件下卡铂的出峰时间（为6. 52士0.09）min，理论塔板数人于13250。由于卡铂粉针剂的卞要辅料为甘露醇，水针剂则无其他添加剂，因而空自溶剂对色谱过程并无明显干扰。此外，实验过程中也未发现潜在杂质环丁二羧酸，顺铂或其他物质的干扰。文献报道卡铂水溶液有光解反应。

本实验注意了避光条件，试验期内（室温4 d）稳定。本方法在一定浓度范围内线性关系良好，回收率高，无辅料及其他杂质干扰，可作为卡铂粉针和水针剂的含量测定方法。方法简便、快速，适合药品生产和保存过程中的质量控制。■

参考文献

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