高效液相色谱法测定仔花感冒胶囊中对乙酰氨基酚的含量

【摘要】 目的 建立仔花感冒胶囊中对乙酰氨基酚含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法,以kromasil-c18柱为固定相,甲醇-水(35∶65)为流动相,检测波长为249 nm。结果 对乙酰氨基酚在0.165～0.99 μg(r＝0.999 9)范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率为98.41%,rsd＝0.64%(n＝6)。结论 含量测定方法准确可靠,重复性好,可用于控制仔花感冒胶囊的质量。

【关键词】 仔花感冒胶囊；对乙酰氨基酚；高效液相色谱法

abstract：objective to establish a method for the determination of paracetamol in zihua ganmao capsule. method samples were separated on a kromasil-c18 column with the mobile phase of methanol- water (35∶65), and the detection wavelength was set at 249 nm. result the calibration curves were linear in the range of 0.165～0.99 μg (r＝0.999 9) for paracetamol. the average recovery was 98.41% and rsd＝ 0.64% (n＝6). conclusion the method is accurate and repeatable, and can be used for the quality control of zihua ganmao capsule.

key words：zihua ganmao capsule；paracetamol；hplc

仔花感冒胶囊由狗仔花、柴胡、藁本、防风、黄芩以及马来酸氯苯那敏、对乙酰氨基酚等制成,具有清热解毒、祛风止痛的功效,用于风热感冒所见发烧头痛、肢体不适。对乙酰氨基酚为其中的主要西药成分之一,原质量标准中用紫外分光光度法[1]测定对乙酰氨基酚的含量,重现性差、阴性干扰严重、误差较大。为了更好地控制该药的质量,笔者采用高效液相色谱法测定对乙酰氨基酚的含量,方法简便、结果准确、重复性好,可以较好地控制该产品的质量。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪：日本岛津lc-10ad泵,spd-10av紫外检测器,c-r7ae数据处理机；超声波清洗器[必能信超声(上海)有限公司]。对乙酰氨基酚(中国药品生物制品检定所提供,批号10018-200408,供含量测定用)；仔花感冒胶囊(广西玉林制药有限责任公司提供,批号635002、635003、635004、735001、735002)。甲醇为色谱纯,其他为分析纯、水为去离子水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：kromasil-c18(4.6 mm×250 mm,5 μm)；流动相：甲醇-水(35∶65),流速：0.5 ml/min,柱温：30 ℃,检测波长：249 nm,进样量10 μl。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取在105 ℃干燥至恒重的对乙酰氨基酚适量,加甲醇制成每1 ml含50 μg的溶液,即得。

2.3 供试品溶液的制备

取本品20粒的内容物,精密称定,研细,混匀,取约0.3 g,精密称定。加甲醇35 ml,超声处理(功率500 w,频率50 khz) 20 min,放冷,滤过,滤液置50 ml量瓶中,用少量甲醇分次洗涤容器和残渣,洗液滤入同一量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀。精密量取1 ml置50 ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得供试品溶液。

2.4 线性关系考察

精密称取在105 ℃干燥至恒重的对乙酰氨基酚适量,加甲醇制成每1 ml含0.165 mg的溶液作为对照品溶液。精密吸取对照品溶液1、2、3、4、5、6 ml,分别置10 ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,各精密吸取10 μl,分别注入液相色谱仪,依本法测定。以测得峰面积为纵坐标,对照品进样量(μg)为横坐标,绘制标准曲线,求得线性回归方程：y＝3 450 864x－9 698,r＝0.999 9(n＝6),表明对乙酰氨基酚进样量在0.165～0.99 μg范围内呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验

取同一份供试品溶液,依本法,按上述色谱条件测定,精密吸取10 μl,注入液相色谱仪,重复进样6次,对乙酰氨基酚峰面积的rsd＝0.55%,结果表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验

吸取供试品溶液10 μl,于0、1、4、8、12、24 h,分别注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定,结果对乙酰氨基酚峰面积rsd＝1.6%,说明供试品溶液在24 h内稳定。

2.7 重复性试验

取同一批号(批号635003)的仔花感冒胶囊样品5份,按供试品溶液制备项下操作,制备5份供试品溶液,按上述色谱条件测定,分别吸取10 μl注入液相色谱仪,测得对乙酰氨基酚的平均含量为0.306 8 g/g(n＝5,rsd＝1.50%)。

2.8 加样回收率试验

精密称取已知含量的仔花感冒胶囊(对乙酰氨基酚含量为0.321 5 g/g)6份,分别准确加入对乙酰氨基酚对照品溶液(98.5 mg/ml)各1 ml,按供试品溶液制备项下操作,制备6份供试品溶液,按上述色谱条件测定,分别吸取10 μl注入液相色谱仪。结果见表1。表1 加样回收率试验结果（略）

2.9 样品测定

精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μl,注入液相色谱仪,测定,记录峰面积,根据对照品峰面积,计算出样品溶液中对乙酰氨基酚的含量(见表2)。表2 样品测定结果(略)

2.10 专属性考察

对乙酰氨基酚对照品和仔花感冒胶囊在相同保留时间处有吸收峰,而阴性样品在此处无吸收峰。色谱图见图1。

3 讨论

由于仔花感冒胶囊样品中对乙酰氨基酚含量较大,为了尽量减少误差,提高方法的准确性,通过紫外扫描,对乙酰氨基酚在249 nm有处最大吸收,故选择249 nm为检测波长。

根据文献报道,曾用过流动相、检测波长：①甲醇-水(15∶85),冰醋酸调ph至4.5,波长243 nm[2]；②以甲醇-0.025 mol kh2po4(15∶85)用磷酸调节至ph 3.0,检测波长为295 nm[3],结果以本试验所用的流动相较佳,对乙酰氨基酚保留时间约为7.6 min,整个分析时间10 min。

在提取条件的选定过程中,我们曾采用过索氏提取法、热回流法、超声提取法,结果三者之间提取出的对乙酰氨基酚含量没有显著差异,但由于索氏提取法和热回流法费时间较长,不利于生产过程的控制,超声20 min提取所测定的对乙酰氨基酚含量最高。因此,选择了比较简便、且效率较高的超声提取法。

【参考文献】

[1] 广西壮族自治区卫生厅.广西药品标准[s].1988.217.

[2] 容颖慈,李瑞明,卢秉忠,等.hplc测定感冒灵颗粒中对乙酰氨基酚含量[j].广东药学,2003,13(2)：23－24.

[3] 郭宇鹏.hplc测定精制银翘解毒片中绿原酸和乙酰氨基酚含量[j].中成药,2006,28(7)：976－977.