高效液相色谱分离分析法在葡萄酒萃取白藜芦醇的应用

[摘 要]目的 提取并检测葡萄酒中的白藜芦醇，为研发高白藜芦醇葡萄酒提供更重要的理论依据，同时也能及时对这种中药成分做出适当的评价。方法 利用高效的液相色谱分离分析法在葡萄酒中萃取出白藜芦醇，然后测定其具体的峰值，分析这种萃取的技术体现出的精密度、准确性和重复性。结果 白藜芦醇的浓度应该在2.50-255.00μg/mL的时候和峰面积呈现出最佳的线性关系，其中体现出的精密度、稳定性和重复性的标准偏差都在0.76%以上。结论 高效液相色谱分离分析法在葡萄酒萃取白藜芦醇中的应用效果显著，体现出广阔的发展前景。

[关键词]色谱法；葡萄酒；白藜芦醇

中图分类号：V750 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2017）16-0348-01

中草药在国家已经拥有数千年的历史，属于民族的瑰宝，但是仍需要经过大量的研究推动中药产业的进一步发展。白藜芦醇的化学分子式是C14H12O3，是非黄酮类多酚化合物，其相对分子质量是228.25，这是葡萄酒中的重要组成部分，因此有益于人体的健康。野生刺葡萄中的白藜芦醇含量很高，同时这样的物质还具有良好的抗癌抗菌效能，发挥出优质的药理作用，受到了国内外学者的广泛关注。白藜芦醇的化学结构具备反式和顺式两种构象，在自然界中的白藜芦醇主要是以反式构象为标准，这两种构象能够在一定条件下实现相互的转化，例如反式构象白藜芦醇经过紫外光照射之后可以及时转化为顺式异构体，这种顺式异构体的化学构象如图1所示。高效液相色谱技术就是在液相和气相色谱法发展的基础上，诞生出的具有分离和检测能力的技术，发挥出简便、快速、灵敏的特点，推动了这项技术的应用与发展，逐渐在生物工程、食品监测、医疗制药等多种领域投入使用。

1 材料和方法

1.1 仪器和试剂

1.1.1 仪器

Agilent1100系列的高效液相色谱仪器的色谱柱全部是从美国安捷伦科学技术公司引进，MILLI-Q超纯水纯化系统主要是从美国的Millipore公司引进，CSF-3A超声洗清器是从上海的超声波仪器厂购进。

1.1.2 试剂

白藜芦醇对照品、甲醇、冰醋酸、双蒸水、Triton X-100、氯化钠、硫酸钠、碳酸钠、葡萄酒。

1.2 方法

1.2.1 样品制备

1.2.1.1 白藜芦醇对照品的配制

称取50g的白藜芦醇对照品，然后适当的加入100毫升的甲醇溶液，经过配制成500毫克每毫升的标准储备液，然后运用百分之五十的甲醇溶液和标准的储备液不同比例进行混合，配制为不同浓度的对照品溶液。

1.2.1.2 葡萄酒中白藜芦醇的提取

量取五百毫升的干红葡萄酒，适当的加入五百毫升的乙酸乙酯溶液，经过充分的振动，使其完全的融合，经过静置待其分层，把有机相旋转40摄氏度之后蒸发干，残留物应该加入甲醇溶液定容到100毫升溶解萃取之后避光进行保存，上机测定之前还应该超过0.45微秒滤膜去除相应的杂质，获取供试品溶液。

1.2.2 色谱条件

顺式白藜芦醇检测波长应该保持在305纳米，反式白藜芦醇的检测波长应该保持在320纳米，柱温控制在35摄氏度，流动相是甲醇和百分之一乙酸按照体积比值35：65配制，流速是1.0毫升每分钟，进样量是20微升。

1.2.3 平衡温度的影响

白藜芦醇需要在55摄氏度的平衡温度下才能获取到最好的萃取率，并且也能够获得最好的峰形，如果温度进一步升高，峰形可能会变得不对称，出现越来越宽的趋势，所以在实验中，应该选择55摄氏度作为平衡温度。

1.2.4 系统适应性试验

1.2.4.1 线性关系

通过量取浓度是500mg/ml的标准储备液和百分之五十的甲醇溶液配制出不同浓度对照品，浓度分别是0.2500、0.1250、0.0250、0.0125、0.0025mg/ml。通过明确量取配制好的不同浓度的对照品溶液20微升，测定出峰面积，通过进样浓度X和峰面积Y设置线性回归，由此得出相应的回归方程。

1.2.4.2 精密度试验

量取1.2.1.2中的供试品溶液20微升，在经历了五次的重复进样之后，测定出白藜芦醇的峰面积，计算出相应的标准偏差。

1.2.4.3 稳定性试验

通过量取供试品溶液的20微升，在间隔一小时测定一次之后，总计的进样是24次，在此之后测定出白藜芦醇的峰面积，计算出标准偏差。

1.2.4.4 重复性试验

量取供试品溶液共计五份，测定出白藜芦醇的峰面积，计算出具体的标准偏差。

1.3 数据分析

运用Markerlynx ApplicationManager Version件加以分析，把保留时间范围和偏差设置在1-30分钟、2秒，相对分子的质量范围和偏差分别设置为50-1000及50ppm，把最小强度设置为50。

2 结果

2.1 线性关系

所获得的回归方程是Y=9096.6X+13.806，r=0.9998（n=5）。通过分析相应的结果，可以发现白藜芦醇的浓度保持在2.50-255.00μg/m L时，和峰面积始终呈现出良好的线性关系。

2.2 精密度试验结果

供试品的峰面积相对标准偏差是0.76%。

2.3 稳定性试验结果

供试品的峰面积相对标准偏差是0.95%，表明了在二十四小时内稳定。

2.4 重复性试验结果

供试品峰面积的相对标准差是0.77%，证明了此测试的重复性较好。

3 讨论

中药属于一种相对复杂且未知的物质体系，因此其化合物的种类较多，数目不明确，不同的方剂含量差异较大，体现出复杂性。白藜芦醇广泛的存在于葡萄、百合与豆科植物中，体现出抗病毒的功效，因此被广泛的应用至心脑血管疾病的预防中。正是因为白藜芦醇在食品和医药方面发挥出的良好功效，让相应的研究人员更加关注。为了解决白藜芦醇中药现代化的问题，需要让中药得到国际的认可，因此才能有针对性的开展工作，通过运用合理的新方法解决新问题。高效液相色谱分离分析法在面对中药复杂的构成成分时，可以及时快速的完成分离纯化的工作，做到省时、高效、低耗的落实，并且能够有效的提供最佳液相色谱，二维分离方式明显的减少了离子的抑制效应，从而获取到更多的样品化合物信息，为更好的分析中药提供了较为广阔的平台。

此次研究主要是通过高效液相色谱分离分析法在葡萄酒萃取白藜芦醇的实验，体现出极好的精密度、稳定性和重复性，验证了高效液相色谱分离分析法已经成为了当前中药复杂体系研究中的重要技术，因此可以为复杂体系中药分离分析提供可靠的保障。

综上所述，白藜芦醇的浓度应该在2.50-255.00μg/mL的时候和峰面积呈现出最佳的线性关系，其中体现出的精密度、稳定性和重复性的标准偏差都在0.76%以上。由此判断，高效液相色谱分离分析法在葡萄酒萃取白藜芦醇中的应用效果显著，体现出广阔的发展前景。

参考文献

[1]昝川南，叶梁银.浅析高效液相色谱分析法在各领域的应用及发展前景[J].化学工程与装备，2013，02：158-161.

[2]宋兰英. 浅析高效液相色谱分析法在各领域的应用及发展前景[J]. 科技创新与应用，2015，12：60.

[3]葛驰宇，张君丽.高效液相色谱法与容量分析法测定发酵液中L-赤藓酮糖含量的比较[J].安徽医药，2015，09：1671-1674.

[4]杜安妮，丁政，何健，林牧.高效液相色谱分离分析法在葡萄酒中萃取白藜芦醇的应用[J].现代医药卫生，2017，05：697-698+701.