高效液相色谱仪使用过程中的常见问题浅析

摘 要：本文对高效液相色谱仪使用过程中常见的问题进行分析，高效液相色谱仪是对色谱检验是一种重要仪器，也是在高效液相色谱法的基础上所涉及的一款专业仪器，在我国的多数领域都有高效液相色谱仪的应用，那么在其应用的过程中难免会有一些问题出现，这些问题如果不及时解决，不但会影响检测结果的准确性，还会影响到高效液相色谱仪的使用寿命。

关键词：高效液相色谱仪;检测过程;问题分析

一、高效液相色谱仪的使用现状分析

自第一台液相色谱仪面视后，科克兰等人陆续又出版了《液相色谱的现代实践》，这标志着高效液相色谱法（HPLC）的正式建立。在之后陆续的时间里，高效液相色谱成为主流的分离检测手段，在化学及医学等方面应用广泛。同时还极大的带动了其附带产品及技术的发展，如：检测技术、色谱柱、数据处理软件等。一路走来HPLC成为解决生化分析问题最有前途的方法。由于HPLC具有分辨率高、灵敏度高、速度快、等优点，因此被各种领域学科所应用。高效液相色谱仪是根据高效液相色谱法为基础，研制而成的基本仪器，主要是由溶液贮液器、泵、进样器、色谱分离柱、检测器、记录仪和数据处理系统组成。基本的工作原理是开始处理样品时，泵从溶液贮液器中抽出事先配置好的流动相，然后通过自动进样器带着进样针吸取的样品溶液流入到色谱分离柱（现在检验一般用的是C18柱）中，通过色谱柱，然后再进到检测器里去，最后数据处理系统会对整个分析过程进行数据处理，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，然后通过计算，完成分析过程。高效液相色谱仪适用的范围十分广、对色谱分析的速度快、准确率也高，而且也能反复检测，对于一些领域的应用已经得到广泛的认可。在这其中色谱分离柱是最主要的检测设备，因此在检测的过程中一定要保证它不受到污染。

二、高效液相色谱仪使用过程中常见问题分析

（一）柱压问题

柱压过高，导致这种情况的直接原因可能是色谱分离柱或进样器流动不畅通。出现这种情况的根本原因可能是流动相抽滤不干净，存有杂质，从而堆积在色谱柱或过滤器中，这时只要重新配置一遍流动相。解决“堵”的方法就是检查色谱分离柱，确定其流动是否畅通，具体操作是在泵工作的情况下将色谱柱的出口处拧开，看看是否有流动相流出，同时可以调节流速，观察流动相流出的流量，进而判断色谱柱是否堵了。还有一些原因，比如：流动相的流速过大（一般为1.0ml/min）、流动相的成分不符合标准（没有使用HPLC级别的试剂或者没有超声完全）等。这些按照药典调整成正确的设置即可。如果怀疑是在线过滤器堵了可以关闭排液阀，断开出口管路，设定流速为1ml/min，如压力>3kgf/cm2，则可能堵塞，可以考虑将其置于5%稀硝酸，超声波清洗一段时间。最后最好在检测验样品的时候加一个保护柱。有时候也会柱压过低，发生这个原因主要是连接不牢固，导致漏液，拧紧即可。更换流动相时没有进行脱气，导致仪器里面进入空气，一般的解决方法就是卸下超声清洗，然后进行脱气。

（二）基线漂移

在色谱仪启动之前，通常先启动半个小时后再进行操作，这样做是避免基线漂移。出现这种现象的原因很多，其一是色谱柱温差变化大，需要控制柱温，用色谱纯，也可多抽滤几次，除去醇溶性流动相外的其他流动相要勤更换，做到现配现用，以免滋生微生物，堵塞进样通道，造成基线不稳定，影响出峰。第三个原因是流路本身长期进样没有时间保养积淀的杂质。解决方法是用洗脱剂冲洗样品流动的通道，对于反相色谱系统的流动相首选甲醇-水系统，按照梯度洗脱的方法冲洗掉系统和色谱柱中的杂质，以免影响样品的质量。必要时可以用异丙醇。第四个可能性就是由于紫外灯的使用寿命到了，不能再继续工作，解决方法是换紫外灯。最后是样品本身性质的影响，对于流动相的影响较大，解决方法就是用保护柱检测样品，以免出现问题。

三、结论

从上面的内容可以看出，色谱仪的日常维护也是很多的，只有在平时的使用当中仔细应对，及时发现异常并解决，才能不让小问题演变为大问题，如果在日常使用过程中加以注意，那么就会延长其使用寿命，保证检测的准确性，也降低的检测的成本，对于检测的准确度能有效保证。在含量测定的过程中什么问题都有可能出现，我们需要的就是不断的完善自己的操作水平，细心留意从处理样品到进样过程中容易出错的地方，针对这些容易出错的部分逐一排查，然后妥善解决，才能保证在样品检测出的结果真实可靠。高效液相色谱仪做为含量测定的重要仪器，我们在使用和养护过程中要确保不能污染到色谱柱，这样才能保证检测结果的准确。

参考文献：

[1] 陈莲，高洪，肖啸. 高效液相色谱仪使用过程中常见问题及其解决方法[J].饲料工业.2005（07）.

[2] 黄加龙. 高效液相色谱仪使用中常见问题及解决办法[J].饲料工业.2006（08）.

[3] 刘萍，侯西成，郝满良.高效液相色谱仪使用中常见的问题及解决办法[J].饲料博览（技术版）.2007（01）.

[4] 张燕婉，孟宪敏. 高效液相色谱仪使用中常见问题及对策[J].中国医学装备.2006 （04） .

[5] 董素云高效液相色谱仪常见故障原因分析和解决办法[J].化工管理.2014（02）.