慢性牙周炎患者血清与唾液探析

1材料与方法

1．1对象

按纳入标准及排除标准，随机选取木垒地区哈萨克族CP患者192人，CP诊断符合牙周病学（第3版）［3］诊断标准。男性116例，女性76例，年龄29～70岁，平均年龄（50．17±10．12）岁。另随机选取100名健康人作对照组，男性，52例，女性48例，年龄32～65岁，平均年龄（49．12±9．40）岁。纳入标准：1）CP组：临床诊断为CP患者，年龄≥18岁，全口牙数＞15颗，探诊深度（probingdepth，PD）≥3mm，附着丧失（attachmentlost，AL）＞0mm；2）排除全身系统性疾病；3）无妊娠；4）无肝炎、HIV及其他传染病史；5）无吸烟者；6）近3个月内没有接受过牙周治疗者。排除标准：1）全身状况较差，全口存留牙齿少于15颗或者全口牙列缺失者；2）曾经吸烟患但戒烟未超过5年者；3）近6个月内接受抗生素治疗；4）近2个月之内使用过含有抗菌性漱口剂［3，4］。

1．2检测方法

1）口腔检查：选择受检者17、16、11、26、27、31、36、37、46、47共10颗牙齿，若缺失以近中相邻牙位代替，检查每个牙位的近中颊，正中颊，远中颊和近中舌（腭），正中舌（腭），远中舌（腭）6个位点，共不少于40个位点，记录PD、AL等牙周炎临床指标。2）采集受检者非刺激性全唾液5mL。3）采集受检者空腹静脉血液5mL，检测前12h内禁食油腻食物及水等。

1．3检测项目

－20℃唾液及外周血样本室温解冻，采用抗体夹心ELISA法测定CP患者与健康人群的唾液及血液中IL－17、IL－6的总量和浓度。IL－6、17ELISA试剂盒（武汉优尔生科技股份有限公司）。主要步骤：1）抗人IL－6、IL－17抗体包被于酶标板上，标准品与待测样本以1∶3稀释，每孔加入25μL，37℃孵育2h，洗板；2）加检测溶液A100μL，37℃孵育1h，洗板；3）加检测溶液B100μL，37℃孵育30min，洗板；4）加TMB底物90μL，37℃孵育15～25min，甩弃；5）加终止液50μL，用酶标仪在450nm波长下测定A值，通过绘制标准曲线求出样本中的IL－6及IL－17的水平。

1．4统计学处理

用SPSS17．0软件进行统计分析，计量资料比较采用两组独立样本的t检验，相关性采用秩相关检验。检验水准α＝0．05，α＜0．05差异有统计学意义。

2结果

2．1血清及唾液中IL－6、IL－17浓度比较

健康组与CP组比较：1）血清IL－17及唾液IL－6、IL17均为CP组略高于健康组，但无统计学差异；2）血清IL－6含量为健康组高于CP组，且存在统计学差异。CP组中比较细胞因子，无论是血清还是唾液都为IL－17含量高于IL－6；2）相同因子唾液中含量明显高于血清中的。

2．2牙周炎患者炎症因子相关性分析

牙周炎患者中相同因子的不同部位检测所得结果均无相关性；在同一部位检测出的目标因子所得结果为唾液中二者具有相关性，且为中高度相关（r＝0．533，P＝0．000），但血清中结果相反。

2．3牙周炎患者炎症因子与牙周指标相关性分析

2．3．1与PD的相关性分析

唾液IL－6与PD为高度相关（r＝0．697，P＝0．000），唾液IL－17与PD为中度相关（r＝0．567，P＝0．000），血清中二者与PD均无相关性。

2．3．2与AL的相关性分析

唾液IL－6与AL为高度相关（r＝0．740，P＝0．000），唾液IL－17与AL为中度相关（r＝0．540，P＝0．000），血清中二者与AL均无相关性。

3讨论

快速唾液细胞因子检测被看做是一种无创检测方法且可监测牙周疾病活动［5］。在免疫应答中，多样T细胞亚型在疾病发生和发展中起不同作用：Th17细胞对牙周炎免疫平衡有破坏作用，但Th2细胞有保护作用，而Th1细胞影响不显著［4］。有研究表明在健康人龈沟液中未检测出IL－6，而在慢性牙周炎患者龈沟液中检测出较高水平的IL－6；慢性牙周患者在接受非手术治疗后龈沟液，唾液，外周血及炎症组织中炎症因子IL－6与IL－17等的浓度含量明显低于治疗前［2，3］，由此推测，健康人龈沟液、唾液、外周血及炎症组织中炎症因子水平较慢性牙周炎患者浓度含量很低［6］。本实验以新疆木垒地区哈萨克族人群为研究对象，取得非刺激性全唾液及外周血调查分析得知，慢性牙周炎患者血清IL－17，唾液IL－6、IL－17浓度均较健康人高，但差异无统计学意义，不排除该地区普遍存在牙周炎的危险因素，健康人群为潜在的牙周炎患病者且机体正处于免疫应答可能。另一方面，慢性牙周炎患者在接受牙周基础治疗后，炎症因子IL－6的水平较治疗前高［7］是由于机体处于免疫应答状态中由Th2的保护机制促进IL－6的分泌［5］，故可解释本研究中健康人血清中IL－6有悖常理的高于牙周炎患者。在分析牙周炎患者的测量指标后可发现：唾液中的IL－6及IL－17两种因子浓度含量明显高于血清中的浓度含量。那么，这也印证了唾液细胞因子的测定可用于较大范围人群中的普查，将牙周炎患者筛选出来［8］。在牙周炎患者的免疫应答中所分泌的炎症因子的作用也是微妙的：如Th2分泌的IL－6与IL－1β共同作用可调节加强Th17分泌IL－17［9］，但牙周炎患者牙龈上皮细胞和成纤维细胞的研究发现，IL－17的高浓度表现又可显著刺激IL－6分泌［10］。而本实验发现牙周炎患者唾液中IL－6浓度含量与IL－17浓度含量呈正相关性且相关性较高（r＝0．533，P＝0．000），这也说明了它们彼此相互影响。不仅如此，研究指出IL－17浓度含量水平明显增高与牙龈组织破坏和牙槽骨吸收有密切联系。如在患者病变的牙槽骨中，IL－17和骨吸收因子RANKL都表达丰富，且浓度较高，甚至IL－17在指导调节RANKL的同时对牙周骨重塑发挥破坏性作用。另一个因子IL－6则是通过非手术治疗前后比较发现牙周临床指标随着IL－6浓度降低而减轻［11］。这说明炎症因子水平与牙周临床指标也有密切联系，本实验也证明这点：唾液IL－6、IL－17与PD、AL呈较高的正相关关系。综上所述，在新疆的哈萨克族人群中经过唾液和血清IL－6、IL－17及牙周临床指标的共同检测发现，此民族的唾液IL－6、IL－17浓度含量较高，虽二者因子的分泌机制不同，但表现彼此相关，且与患CP病情严重程度呈正相关性，故可能作为萨克族慢性牙周炎患者的诊断标志物。同时也进一步证明了哈萨克族人群在分子水平上与以往的研究对象结果一致，为研究哈萨克族牙周炎患者的唾液中炎症因子IL－6、IL－17的基因多态性打下了基础。

作者：宋倩 单位：乌鲁木齐市口腔医院牙周粘膜科