讨论HE染色不佳的原因

摘 要 随着现代医学技术的发展，临床病理诊断在临床医学中起着举足轻重的作用，甚至是金指标，he病理切片质量好与坏直接影响病理医生在显微镜下的观察诊断，导致HE病理切片质量欠佳的原因很多，尤其引起细胞核呈灰白模糊不清，组织机构松散，根本无法诊断。

关键词 HE病理 染色不佳 原因

材 料

5%福尔马林、80%酒精Ⅰ、90%酒精Ⅰ、95%酒精Ⅰ～Ⅱ、100%酒精Ⅰ～Ⅱ～Ⅲ、二甲苯Ⅰ～Ⅱ、苏木素、1%盐酸、中性树胶、医用石蜡58～60℃。

原 因

标本固定的时间、浓度、温度、剂量：①时间与浓度：穿刺活检及手术后的标本立即放入5%福尔马林标本袋固定，固定的目的：尽量使组织和细胞保持与在体时相仿的成分和形态，固定组织愈新鲜愈好，固定后的组织很少收缩，有韧性，利于脱水与切片。穿刺活检标本固定时间大于6小时，手术后标本固定时间24～48小时，淋巴结组织最好固定48小时（因被膜较厚及细胞丰富，福尔马林分子穿透慢）固定好的组织有韧性，颜色较暗，HE染色鲜艳亮丽，组织结构清晰。②固定的温度与剂量：在1个标准大气压下，相同的时间、浓度和剂量，温度越高（

标本脱水的时间、浓度、温度、剂量：①浓度与时间：在1个标准大气压及室温下，依次梯度脱水，80%酒精Ⅰ、90%酒精Ⅰ、95%酒精Ⅰ～Ⅱ以上均为1.5小时，100%酒精Ⅰ～Ⅱ～Ⅲ～Ⅳ均为1小时，脱水必须彻底干净，方能入二甲苯Ⅰ～Ⅱ均为15分钟，否则难切片，易掉片。浸蜡Ⅰ～Ⅱ～Ⅲ分别为1～2～7小时。②温度与剂量：在1个标准大气压下，脱水的时间、浓度及剂量相同，温度越高（0～45℃），脱水的效果越好；反之亦然，脱水的剂量越多（标本完全浸没在酒精且超过2～3cm），产生的液体静水压越大，酒精分子穿透组织的速度越快；脱水的效果越好。

切片：①厚度：一般组织3um，淋巴结及扁桃体2um（细胞核丰富对苏木素亲合力强，易着色），脂肪组织5um。②展片温度与烘烤时间：切片完全展开无皱褶且蜡未化约450℃；烘烤温度与时间：80～900℃及15分钟，若高于导致组织细胞收缩，若低于导致脱蜡不彻底。

脱蜡：从烤片箱拿出烤片要迅速放入二甲苯Ⅰ时间5分钟（达到有效脱蜡），二甲苯Ⅰ时间5分钟；再入100%酒精Ⅰ～Ⅱ～Ⅲ均为3分钟，试剂的量高于载玻片4cm。保持试剂的有效浓度，利于充分水洗，我们的实验室1000张切片更换。

染色：①苏木素：新配制的苏木素及南方的夏天（室温25～400℃），染色时间1分钟；反之约3分钟，显微镜下观察。②分化：1%盐酸分化是关键，将细胞核及细胞浆过染的苏木素退去，显微镜下观察背景呈灰白，流动自来水冲10分钟，核及核膜呈蓝色。③伊红：新配制的伊红及南方的夏天（室温25～40℃），染色时间30分钟；反之约50分钟，显微镜下观察，如伊红盖过细胞核，流动自来水冲，可退去部分伊红。

脱水：依次梯度脱水，90%酒精Ⅰ、95%酒精Ⅰ～Ⅱ、100%酒精Ⅰ～Ⅱ～Ⅲ时间均为2分钟，试剂的量高于载玻片4cm，原理同“标本脱水的时间、浓度、温度、剂量：①浓度与时间”；二甲苯Ⅰ～Ⅱ时间均5分钟。

封片及显微镜观察：中性树胶加入少量二甲苯充分混合，如在冬天放入60～62℃温箱加温30分钟；在南方如遇梅雨季节湿度较大，封片前将盖玻片及中性树胶放入60～62℃温箱加温20分钟，以防切片起雾，影响质量，镜下观察挑出不合格切片重做。

结 果

如能做到上述几点，高质量的制片不难，高质量的切片显微镜观察：①无污染物，无皱褶，无气泡，无刀痕。②细胞浆、核染色红蓝对比鲜明，色泽亮丽；同一切片的不同细胞特点不同细胞的特点：如浆细胞的核呈车轮状，浆呈紫蓝色，中性粒细胞浆呈红色，核呈分叶状蓝色。食道鳞癌的癌细胞核分裂象及压缩的染色体清晰可见。③镜下移动切片无需重新调节显微镜的微调。

讨 论

做好切片的前提条件保持“材料”的有效浓度；克服“原因”是关键。在我们的实验室1000切片更换试剂，保证制片的质量。