+T细胞在抗肿瘤过继性免疫治疗中作用的分析'> CD4+T细胞在抗肿瘤过继性免疫治疗中作用的分析

[摘要] 目的 观察并分析CIK细胞中CD4+T细胞的Th1/Th2亚群分布情况。方法 采用体外试验大规模扩增CIK细胞，采用磁珠法对其中的CD4+T细胞进行纯化处理。然后采用荧光定量RT-PCR、ELISA以及胞内染色法对培养前后Th1/Th2类细胞因子的基因表达变化和分泌量、Th1/Th2细胞亚群定的比例进行检测。结果 富集CD4+T细胞的纯度高达96%，在CIK细胞中，Th2亚群较PBMC显著降低，而Th0和Th1亚群的比例显著升高（P

[关键词] CD4+T细胞；抗肿瘤过继性免疫治疗；临床作用分析

[中图分类号] R730.3 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2015）05（c）-0173-02

[Abstract] Objective Observation and analysis of CIK cells of Th1/Th2 CD4+T cell subsets distribution. Methods Large-scale expansion by in vitro test of CIK cells， by using the method of magnetic beads purification processing CD4+T cells. Then using fluorescence quantitative rt-pcr and ELISA and intracellular staining method to cultivate the Th1/Th2 cytokines gene expression before and after the change and production， the proportion of Th1/Th2 cells subsets for testing. Results Concentration is as high as 96%， the purity of CD4+T cells in CIK cells， the Th2 subsets， no significant change in the PBMC and Th0 and a significant increase in the proportion of Th1 subsets（P

[Key words] CD4+T cells；Anti-tumor adoptive immunotherapy； Clinical effect analysis

CIK细胞是一种群异质细胞，具有较高的杀瘤活性且增值速度非常快，几乎不会影响人体的正常造血，正因为凭借着这些特征，在临床治疗血液系统疾病时，CIK细胞显著优于其他过继性免疫治疗方式，并且在临床治疗部分感染性疾病的过程中表现出了强大的优势[1]。为观察并分析CIK细胞中CD4+T细胞的Th1/Th2亚群分布情况，该研究选取2013年7月―2014年7月在该院进行治疗的20例恶性实体瘤患者为研究对象进行分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

随机选取2013年7月―2014年7月在该院进行治疗的20例恶性实体瘤患者为研究对象，其中男性患者12例，女性患者8例，年龄分布为40～75岁，平均年龄为（57.5±0.5）岁。所有患者的肿瘤类型为：甲状腺癌患者2例、直肠癌患者3例、乳腺癌患者4例、肾癌患者5例、肺癌患者6例。术后9例，晚期转移11例。

1.2 方法

采用CS3000plus血细胞分离机富集所有患者的自体外周血于单个核细胞之后，用Ficoll淋巴细胞分离液把PBMC分离出来，应用浓度为5%的AB血清的1 640培养液调整细胞的浓度为1～3×106/mL。培养的第一天，加入1 000 u/mL的人重组IFN-γ、100 u/mL的人重组IL-1α以及100 ng/mL的抗人CD3单抗；在培养的第一天，加入300 u/mL的人重组IL-2，连续培养11 d左右之后进行细胞的收集。

1.3 统计方法

采用SPSS 19.0统计学软件对该研究数据进行分析处理，计量数据用（x±s）进行表示，组间比较采用t值进行检验，P

2 结果

2.1 CIK细胞中CD4+T细胞的纯化以及Th1/Th2亚群的分布

经过纯化，富集CD4+T细胞的亚群纯度达到96%，存活率为95%。对比CIK和PBMC的CD4+T细胞中的Th1/Th2亚群分布情况：Th0和Th1亚群的比例显著升高，数据差异有统计学意义（P

2.2 CIK和PBMC细胞中CD4+T细胞培养上清中多种细胞因子的含量变化

在CD4+TCIK细胞中，TGF-β和IL-10等Th2类细胞因子的分泌量明显降低（P

3 讨论

Schmidt-Wolf GD等研究人员发现，细胞亚群同样存在于小鼠体内，其功能各不相同，还能够各自分泌出不同的细胞因子，该细胞亚群被称之为辅T细胞（Th）[3]。之后，Fiorentino DF等研究人员进一步证实在人体内同样存在和小鼠体内相似的Th细胞亚群[4]。也是因为该细胞亚群具有不同的功能，因而使得它们在部分疾病的病情发展变化当中具有不同的表现，该研究人员构思期望利用对细胞分化调控来打破细胞亚群的平衡状态，通过这种方式实现预防某些疾病和治疗某些疾病的目的[5-6]。

该研究结果显示，20例恶性实体瘤患者经过11 d左右的多因子体外诱导之后，在CIK细胞中，Th2亚群中的TGF-β和IL-10含量分别为（302.0±61.9）和（530.4±407.0），较PBMC显著降低，而Th0和Th1亚群的比例较PBMC显著升高（P

综上所述，在CIK细胞中，CD4+T细胞具有显著的Th1优势，与更大的数量相结合，从而显著提高实体瘤患者体内各种免疫效应细胞的功能，有助于促进抗肿瘤免疫反应的发展。

[参考文献]

[1] 曾瑞红，房桂珍.CD4+T细胞在肿瘤免疫治疗中的作用[J].细胞生物学杂志，2011，33（1）：89-90.

[2] 于津浦，任秀宝.不同输注途径对CIK细胞治疗后的体内分布的影响[J].中国免疫学杂志，2012，56（3）：77-79.

[3] Schmidt-Wolf GD，Negrin RS，Schmidt-Wolf IGH.Activated Tcells and cytokine- induced CD3+、CD56+ killer cells[J].AnnHematol，2011，74（2）：51-56.

[4] Fiorentino DF，Bond MW，Mosmann TR，et al.Two types ofmouse T helper cell[J].J Exp Med，2012，170（6）：2081-2095.

[5] 张维红.CD40/CD40L交联在CD4+T细胞诱导肿瘤细胞凋亡中的机制研究[J].中国免疫学杂志，2013，41（10）：66-68.

[6] 罗荣城.CIK细胞过继性免疫治疗对TACE术后肝癌患者免疫功能的影响[J].广东医学，2012，55（9）：91-93.

[7] 张瑞萍，金增强.表达嵌合T细胞受体的T淋巴细胞介导的肿瘤过继性免疫治疗作用研究[J].肿瘤，2011，41（10）：55-57.

[8] 任秀宝.树突状细胞对CIK细胞中CD4+CD25+T细胞数量及免疫调节作用的影响[J].中华医学杂志，2012，66（44）：83-85.

（收稿日期：2015-02-21）