实验方式论文：动物致死实验方式透析

作者：苏敬水 刘炳琪

豚鼠和仓鼠的颈椎脱臼致死方法除了参考小白鼠的颈椎脱臼法外，还应注意这两种实验动物有较发达的颈部肌肉，颈部和肩部皮肤松弛，在操作时应抓住动物的头部，再向后猛拉动物的身体，造成豚鼠或仓鼠颈椎脱臼。兔子的颈椎脱臼致死方法，参考小白鼠的颈椎致死方法，一般对于1kg以下的家兔采取颈椎脱臼法致死方式，兔子过大的应采取其他方法。鱼类颈椎脱臼法，用拇指或笔等插入鱼口中，另只手握住鱼，使头向背部移位，使脊髓和脑髓分离，使鱼无痛苦死去。空气栓塞法致死动物的操作，其原理是因为空气不溶于血形成气泡堵塞血管，造成组织缺血缺氧。在动物血液循环中，将空气注射入静脉，因为静脉血管粗，空气不能形成栓塞，空气随着血液循环到达心脏，在心脏的搏动下，空气被打成很多小泡，又随着静脉血一起被泵入进入肺动脉，肺动脉最终形成很多细小的分支，而那些小泡就堵塞在这些分支上，最终造成肺缺血，动物无法呼吸，窒息而死。一般多用于体质量在1kg以上的兔子，从耳静脉注入5～50mL/kg的空气，可导致家兔迅速死亡，兔子表现有2s左右的抽搐、角弓反张和瞳孔扩大等表现。断头致死动物方法操作要领，将断器固定于实验台，左手按住实验动物脊背部，拇指放在右腋下部，用食指和中指夹住左前腿。将实验动物的颈部放到断头器的开口处，慢慢放下刀柄，当刀柄接触到动物时，迅速用力的按下刀柄切断颈部。目前市面上有售的电动断头器比手动的断头器使用更加方便，如YLS－19A大鼠电动断头器是铡刀式断头器的替代产品，它彻底改变了先挤压后切断的传统断头方式(使用剪刀也属这种方式)，克服了铡刀式断头方式自身所不可避免的缺陷。铡刀式断头方式从理论上讲无论刀有多快，下压速度多快，都是先挤压到一定程度然后刀刃才开始切割，这种挤压在前，切割在后的方式会使骨骼、肌肉、血管、神经等组织变位、变形，其切割口也不会特别干净整洁。如果刀具不快更会造成动物内脏淤血或皮连现象。新的电动式断头器是根据最新的段切理论，使用了旋转的八角刀片，以每秒4．2m的线速度和120个冲击切割波对动物的头颈部进行快速切割，在不到0．2s的时间内完成切割过程，使断面的肌肉、骨骼、髓体、血管、神经等清晰整洁。

高浓度二氧化碳等吸入致死动物方法的操作，其原理基于用高浓度二氧化碳创造缺氧环境，使动物窒息。参考医学上二氧化碳对人的危害，当人吸入20%浓度的二氧化碳时，几秒钟即可致死;《世界动物卫生组织为控制动物疫情之人道扑杀特别委员会会议报告》中推荐的扑杀浓度为40%。为了适应具体的工作环境，应根据处死实验动物的多少采用5%～20%的浓度。用木箱或其他密闭替代品用箱，在箱内下部加一个底篦，以防动物应激产生的排泄物污染动物身体。箱体侧壁下方应设有出气口，其对侧上方为进气口，以保证CO2气体循环。装实验动箱的箱体要透明、密闭、内外表面光滑，易清洗，最好为硬塑材质，连接一能通入二氧化碳气体导管，应用二氧化碳瓶或者应用二氧化碳发生器利用石灰石(碳酸钙)与盐酸反应迅速生成二氧化碳，由于二氧化碳比重大，当累积到淹没动物时，导致动物缺氧死亡。此法的优点是材料易得，制作简便，化学反应迅速，生成的二氧化碳、水和氯化钙，三种产物对环境均无污染。在实验中应注意实验人员的保护，人的最高耐受浓度不超过5%，劳动法规定的劳动环境中二氧化碳浓度当低于0．70%。如有通风厨，实验完毕后要打打开换气，利用空气流动的负压，抽走二氧二化碳，或打开门窗，使过高浓度的二氧化碳气体得到稀释。另外还可选择的药物有，比如(乙醚)、昏迷(氟烷)、缺氧(氮气和一氧化碳)和(一氧化氮等药物也可作为吸入致死实验动物的方法，但要注意在选择吸入方法致死动物时，要让一个动物单独放置一个箱体，避免高速气流使动物受到惊吓，对于新生动物、爬行动物、两栖动物、潜水性鸟类动物和潜水性哺乳动物都不能使用吸入方致死实验动物。它们对缺氧有相对强的耐受性。注射药物致死实验动物方法的操作，注射药物致死实验动物的技术方法原理是直接或间接缺氧、生命功能的神经元抑制和大脑活动或生命功能神经元的直接破坏。药物首先抑制大脑神经元随后导致动物死亡。某些药物在实施过程中会使动物处于一种所谓激动躁狂期，可能发出叫声或肌肉收缩。但这不是有目的的，随着意识的丧失马上死亡，原因是心脏停止跳动造成呼吸中枢供氧不足。大脑活动或生命功能神经元的直接破坏。来源于直接冲击破坏大脑或大脑神经元去极化可以使动物马上丧失意识。

为避免动物害怕和痛苦，使用药物注射致死动物前，常常首先要限制和保定动物，这样会增加动物额外的恐吓和不安，因此使用镇静和麻醉的方法辅助进行药物注射。特别对有攻击性的、凶猛的动物实施药物注射以前最好先使用镇静剂然后静脉注射安死药物。当静脉注射安乐死药物有困难时，使用无刺激性药物(非封闭神经肌肉药物)行腹膜内注射，因为要经过1期和2期麻醉才能使实验动物死亡，因此需要将实验动物放在安静的盒或箱中，避免刺激和外伤。深度镇静、麻醉或睡眠状态的动物也可行心内注射。但不要使用肌内注射、胸腔注射、皮下注射、肺内注射、肝内注射、脾内注射、肾内注射、鞘膜内注射等非静脉注射法实施药物注射致死实验动物。其他一些致死动物方法的操作，除了上述5项主要的动物致死方式外，还有电击法，枪击，放血、低温冷冻等方法。如牛羊类马、鹿等大型实验动物一般首先用电将其击晕，然后迅速解剖，这样它们就不会感觉到疼痛。鱼虾类多采用在水池中通电然后迅速冷冻的方法致死实验动物。急性大失血法:用粗针头一次采取大量心脏血液，可使动物致死。豚鼠与猴等皆可采用此法。鼠可采用眼眶动、静脉大量放血致死。狗和猴子等在麻醉状态下，暴露出动物的颈动脉，在两端用止血钳夹住，插入套管，然后放松近心端的钳子，轻轻压迫胸部，尽可能大量放血致死。狗也可采用股动脉放血法处死。硫喷妥钠20～30mg/kg静脉注射，狗则很快入睡，然后暴露股三角区，用利刀在股三角区作一个约10cm的横切口，将股动、静脉全部切断，立即喷出血液，用一块湿纱布不断擦去股动脉切口处的血液和凝块，同时不断用自来水冲洗流血，使股动脉切口保持通畅，动物3～5min内可致死。枪击动物致死实验动物死亡的方式较少见，因为我们国家枪支管理办法的实施，一般实验人员不具配备枪支条件，在进行有些大型动物的实验和较强传染病的观察实验中，如对牛、猴子等进行枪毙，减少动物的痛苦，完全保证实验人员安全很有必要，但此种致死方式手续繁琐，须申请经相关部门批准，具有持枪械权的专门人员操作执行。根据实验内容决定实验动物致死方式和时机有些动物实验主要基于分子和细胞水平研究某些疾病，而对疾病的临床症状并不关心。动物生理、生化指标的改变往往在动物没出现临床症状之前就体现出来，而动物在出现临床症状前，往往是没有什么痛苦和不适的。如果在已达到实验目的的前提下，在动物出现临床症状之前就对动物施行安乐死，则最能体现实验动物的福利原则。如白血病模型，在动物出现临床症状———白细胞计数已经升高很多;在一些毒理实验中，动物的某些血清值在其发病前已明显改变。故应根据动物的生理、生化指标对动物施行适合的安乐死方式，不但可避免或减少给实验动物带来痛苦，而且有助于实验者取得完整的动物标本和理想的实验数据。在动物科学实验过程中，有时会造成动物痛苦与伤害，有些伤害是实验设计时能够预期的、可以控制的，有些实验造成动物的痛苦是无法预测的，在科学发展的当代时期，无法控制对动物造成的伤害，有些实验甚至会对动物造成巨大的痛苦。依据对动物保护的原则和对生命的敬畏，进行科学实验的工作人员应对科学实验的动物选择适当的致死方式，使动物死亡痛苦最小、无痛苦或对动物施行安乐死，即仁慈终点。实验动物致死方式的推广和宣传实验动物的致死方式，除了依照相关的实验管理规定外，还需要加强对实验人员的思想教育，实验动物的管理人员的重视，不能只考虑实验成本，不管动物的感受，采取简单粗暴的方式致死动物。