中医不同治法对心肌缺血再灌注损伤大鼠炎症相关细胞因子的影响

【摘要】1.1 实验动物 雄性SD大鼠60只，体质量（315±20）g，北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证号：SCXK（京）2012-0001。 1.2 主要试剂与药物 总胆固醇（CHO）、三酰甘油（TG）...

摘要：目的 观察中医不同治法对高脂血症心肌缺血再灌注损伤（MI/RI）大鼠炎症相关细胞因子含量的影响，探讨其对MI/RI的拮抗作用。方法 60只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、祛痰宽胸组、活血化瘀组及痰瘀同治组。除假手术组外，其余大鼠予高脂饲料喂养，采用可逆性冠脉左前降支结扎缺血30 min再灌注2 h复制MI/RI模型，检测再灌注后各组大鼠血清总胆固醇（CHO）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）以及细胞间黏附分子（ICAM）-1、肿瘤坏死因-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-10含量。结果 与模型组比较，各治疗组血清CHO、TG、HDL-C、LDL-C含量降低（P

中图分类号：R242.2；R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）01-0040-03

关键词：心肌缺血再灌注损伤；祛痰宽胸；活血化瘀；痰瘀同治；炎症反应；大鼠

结构破坏，引起细胞死亡，导致梗死范围扩大，造成心功能的进一步损害。随着动脉搭桥术、溶栓术等疗法的应用和推广， MI/RI已成为当今急性心肌缺血再灌注治疗时代不能实现心肌“有效再灌注”的一个主要原因和障碍。MI/RI病因复杂，与多种因素有关，其中炎症反应与再灌注损伤关系密切[1-2]。近年研究表明，中药能通过抑制炎症细胞的趋化与浸润，调节细胞因子的合成与分泌，减轻炎症损伤，发挥心肌保护作用[3]。本研究采用高脂大鼠制备MI/RI模型，从炎症反应角度探讨祛痰宽胸、活血化瘀、痰瘀同治等不同中医治法对MI/RI的拮抗作用，以期为临床治疗缺血性心脏病提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物

雄性SD大鼠60只，体质量（315±20）g，北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证号：SCXK（京）2012-0001。

1.2 主要试剂与药物

总胆固醇（CHO）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）及高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）试剂盒均购自北京中生北控生物科技有限公司，批号分别为120621、120931、120502、120521；细胞间黏附分子（ICAM）-1、肿瘤坏死因-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-10 ELISA试剂盒，英国Abcam公司产品，购自北京中原领先科技有限公司，批号分别为GR101667-1、k120727、GR95720-1。

祛痰宽胸法、活血化瘀法及痰瘀同治法代表方剂分别选用瓜蒌薤白半夏汤（瓜蒌24 g，薤白9 g，清半夏12 g，白酒24 L）、血府逐瘀汤（当归9 g，生地黄9 g，桃仁12 g，红花9 g，枳壳6 g，赤芍6 g，柴胡3 g，桔梗5 g，川芎5 g，牛膝9 g，甘草3 g）及痰瘀同治方（前两方合方）。三方分别浓缩成含原药材量1.3、2.2、2.15 g/mL的水煎液，中药材购自亳州市芳益堂药业有限责任公司。药物剂量换算按体质量70 kg成人每日1剂用量换算出大鼠1日用量（相当于人用剂量的20倍）。

1.3 分组

将60只大鼠随机分5组，每组12只，分别为假手术组、模型组、祛痰宽胸组、活血化瘀组及痰瘀同治组。假手术组动物常规饲养，其余各组给予高脂饲料（74%基础饲料、1%胆固醇、10%蛋黄粉和15%猪油，购自北京科澳协力饲料有限公司）。

1.4 造模与给药

各组分别按1 mL/100 g量给予生理盐水或药物灌胃，每日1次，连续给药8周。末次给药2 h后用于实验。

取材前，腹腔注射1%戊巴比妥钠（5 mL/kg），麻醉后仰卧位固定四肢及头部。记录Ⅱ导心电图。颈部、胸前手术野备皮，切开气管，连接动物呼吸机（呼吸频率70次/min，吸呼比1∶2，潮气量9 mL/kg）。自左侧第3～4肋间剪开皮肤，钝性分离肌肉组织，打开胸腔，剪开心包膜，于左心耳与肺动脉圆锥之间找出冠状动脉左前降支，并以5-0号丝线结扎分支起点外约1～2 mm，（在丝线与心肌间放一根约1 cm长细棉绳），此时缺血心肌壁呈现发绀、膨出，同时记录心电图，以标准肢导联Ⅱ导联ST段弓背上抬、T波高耸，显示心肌缺血形成。30 min后松开结扎，使缺血冠脉再灌注，关闭胸腔，再灌注120 min，心电图示ST段回落1/2以上。结扎前心电图不正常，或未到观察终点而死亡以及造模不成功者剔除。

1.5 标本采集与检测

实验结束后，腹主动脉取血5 mL，3 000 r/min离心10 min，分离血清，全自动生化仪检测CHO、TG、LDL-C及HDL-C，ELISA法按试剂盒说明检测ICAM-1、TNF-α、IL-10。

1.6 统计学方法

采用SPSS11.5软件进行统计分析。计量资料以―x±s表示， 多组间比较采用单因素方差分析，满足方差齐性时的两两比较采用LSD-t法，不满足方差齐性时的两两比较采用Tamhane's T2法，P

2 结果（见表1、表2）

3 讨论

现代医学认为，MI/RI是一个固有免疫机制启动的炎性反应，包括多种前炎性基因（趋化因子、细胞因子和细胞因子受体）表达的上调。研究表明，在缺MI/RI中发生了细胞因子瀑布式的激活[4]。中药可通过多层次、多途径、多靶点综合作用于MI/RI后炎症反应的多个病理环节，有效阻断炎症级联反应的瀑布效应，保护缺血心肌，发挥独特优势[5]。中医理论认为， MI/RI的病位在心，涉及血脉，属于“胸痹”、“心悸”、“真心痛”等范畴，其病机多为本虚标实，本虚乃心之阴阳气血不足，标实由外因引起的气滞、血瘀、痰阻等。本研究即从其基本病机着手，采用相应代表方剂为干预措施，观察了不同治法对MI/RI炎症反应的防治效果。

高脂血症是导致动脉粥样硬化、冠状动脉梗阻或狭窄，引起冠心病及心肌梗死的独立危险因素之一。有研究显示，大鼠心功能损伤程度及炎症因子水平与血脂升高有密切联系[6]。实验结果表明，各治疗组对大鼠血脂异常增高有明显的抑制作用，在此基础上，本研究进一步观察了其对再灌注损伤后炎症反应的影响。

TNF-α是MI/RI早期巨噬细胞和心肌组织所产生的炎症细胞因子，能诱导血管炎症反应，引起内皮功能障碍[7-8]。TNF-α可使炎症局部血管通透性增加，刺激血管内皮细胞和多形核白细胞（PMN）表达内皮白细胞黏附分子（ELAM）和ICAM，促进PMN聚集，导致PMN释放活性氧和蛋白水解酶等物质，引起心肌微血管的阻塞和心肌损伤，加重缺血再灌注损伤程度[9]。ICAM-1是免疫球蛋白超家族的成员，其主要功能是通过与淋巴细胞功能相关抗原-1（LFA-1）和巨噬细胞分化相关抗原-1（Mac-1）结合而介导中性粒细胞与血管内皮细胞的黏附。心肌缺血再灌注时，缺血的细胞产生大量的促炎介质如脂多糖、TNF-α、补体C5a、细胞因子IL-6等；在炎症介质作用下，内皮细胞及白细胞表达活性提高，两种细胞相继被激活，细胞表面有多种黏附分子表达，并能介导炎症和免疫反应[10]。本实验结果显示，MI/RI后大鼠血清TNF-α、ICAM-1含量都明显增多，提示炎症反应增强。活血化瘀组可降低ICAM-1含量，而痰瘀同治组能够同时抑制TNF-α及ICAM-1高表达，与模型组比较，差异有统计学意义，综合能力优于其他治疗组，提示其能通过降低炎症因子水平，防止炎症因子在缺血区血管中黏附、聚集导致内皮损伤，从而减轻炎症反应。

IL-10由各种炎性细胞，特别是巨噬细胞产生，一方面可抑制炎性细胞（如单核细胞、淋巴细胞等）的黏附和浸润，另一方面可抑制单核/巨噬细胞合成、释放前炎性细胞因子，是体内合成的重要抗炎细胞因子[11]。在心血管系统中，IL-10是缺血再灌注早期就已产生的一种抗炎介质，对MI/RI具有保护作用。实验结果表明，各治疗组能不同程度地升高血清IL-10含量，但均不显著。综合整体实验结果来看，可以认为活血化瘀法及痰瘀同治法对MI/RI炎症反应有显著的抑制作用，可能是通过控制血脂、抑制炎症相关细胞因子的释放而实现的。

参考文献：

[1] Vinten-Johansen J. Involvement of neutrophils in the pathogenesis of lethal myocardial reperfusion injury[J]. Cardiovasc Res，2004，6l（3）：481-497.

[2] Dietrich Rothenbacher， Sylvia Müller-Scholze， Christian Herder， et a1. Differential expression of chemokines， risk of stable coronary heart disease， correlation with established cardiovascular risk markers[J]. Arteriosclerosis， Thrombosis， and Vascular Biology，2006，26（1）：194-199.

[3] 黄烨，王宗仁.中药干预心肌缺血/再灌注炎症反应的研究进展[J].心脏杂志，2009，21（4）：592-594.

[4] 包怡敏，刘爱华，张志雄，等.银杏酮酯预处理对心肌缺血再灌注大鼠心肌组织炎症相关细胞因子含量的影响[J].中西医结合学报，2010，8（4）：373-377.

[5] 唐丹丽，张华敏，刘治中，等.中医不同治法对大鼠心肌缺血再灌注损伤心肌NF-κB表达及血清炎症因子释放的影响[J].中国中医基础医学杂志，2009，15（10）：736-737.

[6] 焦宏，马建伟，陈彦静，等.桂枝汤对高脂血症心肌缺血大鼠炎性细胞因子的影响[J].中国中药杂志，2012，37（11）：1634-1637.

[7] 余浩，王祥.冠状动脉无复流与炎症反应的关系[J].心血管病学进展， 2010，31（1）：112-115.

[8] 李朝杰，龙明智.心肌缺血-再灌注损伤的相关分子机制及防治[J].国际心血管病杂志，2011，38（5）：273-276.

[9] 殷惠军，王显刚，史大卓.蒺藜总皂苷对心肌缺血再灌注损伤炎症因子TNF-α、IL-1β释放的影响[J].医学杂志，2006，31（10）：986-987.

[10] Jordan JE， Zhao ZQ， Vinten JJ， et a1. Cardon monoxide has anti-inflammatory effects involving the mitogen-activated protein kinase pathway[J]. Cardiovasc Res，2006，43（4）：860-878.

[11] 陈琪，李胜涛，陈志伟.内关穴位注射香丹注射液对大鼠心肌缺血中炎性因子IL-10、IL-18的影响[J].辽宁中医药大学学报，2010，12（10）：200-202.

（收稿日期：2012-11-19，编辑：华强）