应用自体细胞因子诱导杀伤细胞治疗肝硬化对肝功能影响的研究

【摘要】 目的 观察自体细胞因子诱导杀伤细胞(CIK细胞)治疗慢性HBV DNA 阳性肝硬化患者对肝功能的影响。方法 CIK细胞在体外培养前后以及回输体内后检测CD+3、CD+3、

CD+4、CD+3、CD+8、CD+3、CD+56细胞以及mDC 和pDC。治疗肝硬化患者,比较治疗前后病毒学指标及肝脏功能的变化。结果 培养结束以及回输体内后,CD+3细胞、CD+3CD+8细胞、CD+3、CD+56细胞细胞较培养前显著升高,mDC 和pDC 在回输后也明显增高,肝脏功能较治疗前有所好转。所有患者均能耐受治疗。结论 CIK细胞可明显提高免疫效应细胞数量,具有一定的抗病毒效应作用,毒副作用低。没有加重肝脏损伤,而对于肝功能有一定的改善作用。

【关键词】

CIK细胞;乙型肝炎肝硬化;肝功能

【Abstract】 Objective To observe the autologous cytokine-induced killer cells(CIK cells)in the treatment of chronic HBV DNA-positive patients with cirrhosis of the liver function.Methods Before and after CIK cells in vitro and in vivo detection of transfusion CD+3,CD+3CD+4,CD+3CD+8,CD+3,CD+56cells and mDC,and pDC.Treatment of patients with liver cirrhosis compared before and after treatment virological indicators and liver function changes.Results The results of culture end and reinfusion in vivo,CD+3cells,CD+3CD+8cells,CD+3,CD+56cells,cultured cells were significantly elevated compared,mDC and pDC in significantly increased after transfusion,liver function has improved compared with before treatment.All patients can tolerate the treatment.Conclusion CIK cells can significantly increase the number of immune effector cells,with a certain anti-viral effect of the role of low toxicity.There are no aggravating liver damage,liver function and for a certain degree of improvement.

【Key words】

CIK cells; Hepatitis B; Cirrhosis of liver function

在HBV持续复制的肝硬化患者中,肝脏炎性纤维化持续进展并且坏死特别严重。CIK细胞治疗HBV时可诱导激活

作者单位:260010山东省济南市惠仁中医院(吕世长);

山东省兖矿集团东滩医院(桑爱军)

特异性细胞免疫反应。用于治疗慢性乙型肝炎报道有一定疗效[1],本文观察CIK细胞治疗慢性HBV DNA阳性肝硬化对肝功能的影响报告如下。

1 资料与方法

1.1 入选病例 66例住院患者,年龄36~67岁(47.2岁)所

有病例符合2000 年西安学术会议制定的病毒性肝炎防治方案诊断标准[2],诊断为肝硬化,全部病例HBsAg、HBcAg、HBV DNA 阳性持续6个月以上,HBeAg 阳性42例,阴性24例,其中肝功能正常的5例,肝功能异常的61例。ALT 波动于正常至5倍,TBiL ≤51 μmol/L,肝脏功能childpugh 评分为A或B级。

1.2 排除病例 肝性脑病、消化道出血、重度感染或大量腹水等严重并发症,半年内未使用过其他抗病毒药和其他免疫调节剂;其他病毒感染、酒精性、药物性肝病。

1.3 治疗方法与检测项目

1.3.1 CIK细胞的培养 在患者签署知情同意书后,使用采血机(Spectra v 611)采集患者外周血单个核细胞,采集细胞数约(1~4)×109,容积40~70 ml。在符合GMP实验室条件下,用无血清培养基调整细胞浓度至(1~2)×106 ml,置于透气性培养袋中,于不同时间加入一定剂量的rhIFNr,IL2、antiCD3 mAb(美国BD公司)等各种细胞因子,37 ℃,5%CO2 悬浮培养。

1.3.2 CIK细胞悬液的制备及回输:,于培养后的第10天,每次取CIK细胞悬液的1/3体积,离心、洗涤和重悬浮后制备成容积为400~500 ml 的CIK细胞悬液,将诱导培养成的CIK细胞分3次于培养的第10、13、15天回输给患者。

1.3.3 检测项目 治疗前后询问病史,进行系统的体格检查,检测血液生化指标、血液学指标、HBV 标志物以及HBV DNA定量。

1.4 疗效判定 对ALB、TBIL、ALT、AST 及ALP 分别进行疗效判断。

好转:TBIL、ALT、AST、ALP 由异常转为正常和/或数值下降50%,ALB由异常转为正常或升高5 g。

无变化:TBIL、ALT、AST、ALP 治疗前后均正常或数值变化不超过50%,ALB 均为正常或变化不超过5 g。

恶化:TBIL、ALT、AST、ALP 由正常转为异常或数值升高超过50%,ALB 由正常转为异常或下降5 g/L。

1.5 统计学分析 采用stata 7.0 软件,两组数据间的比较采用配对t检验。

2 结果

2.1 培养过程中CIK细胞功能变化特点 培养10 d 后,采用流式细胞仪对CD+3、CD+3、CD+4、CD+3、CD+8、CD+3、CD+56、CD+25细胞进行测定和分析。发现细胞表型发生了变化,主要表现在CD+3T 细胞、CD+3CD+8T细胞以及CD+25T细胞比例增高,尤其以CD+3、CD+56细胞升高为显著。

2.2 治疗前后血液生化和血常规指标变化 CIK细胞治疗前后观察TP、ALB、GLO、TBIL、DBIL、ALT、AST、ALP 以及血常规中WBC 和PLT的变化(表1)。

2.3 治疗前后肝脏功能疗效判断 为了进一步分析CIK细胞治疗后对于肝脏功能的影响,对每例患者进行了疗效判断,治疗后好转的TP、ALB、GLO、TBIL、ALT以及AST 各指标中ALT 好转率最高,有34例好转(51.5%),6例恶化(9.09%)。其余各指标以无变化的患者为多。

2.4 CIK细胞治疗后对于病毒学指标的影响 CIK细胞治疗后,42例HBeAg 阳性的患者有31例阴转,其中8例出现HBeAg,抗-HBe 转换,66例HBV DNA 阳性的患者26例阴转,部分患者拷贝数降低。

2.5 不良反应 免疫活性细胞回输后患者可出现一过性类流感样症状,如发热(体温37.5℃~39.5℃),轻度头痛、乏力、关节酸痛,持续时间均不超过12 h,可自行缓解,所有患者均能很好耐受治疗。

3 讨论

慢性乙型肝炎患者中,肝硬化失代偿的年发生率约3%,5 年累计发生率约16%[3]。失代偿期肝硬化的5 年病死率为70%~86%。经抗病毒治疗后HBeAg 血清转换,HBVDNA 持续转阴和AL T 持续正常者的生存率较高[4]。由于a-干扰素的不良反应和拉米夫定的高耐药病毒突变,对这类患者还没有很有效的、可耐受的抗病毒治疗。[6]。CIK 细胞是经多种细胞因子诱导培养的一群异质性杀伤细胞,可分泌IL-2、IL-6、IFN-γ等多种细胞因子,激活机体免疫系统,提高机体的免疫功能。其抗病毒作用可能是多种细胞因子和抗体协同作用,通过促进T 淋巴细胞高表达IL-2 受体,产生大量IL-2 使T 淋巴细胞活化来实现的。CIK 细胞中的主要效应细胞为CD+3CD+56细胞,其在正常人外周血中极罕见,仅1%~5%。在体外经多种细胞因子刺激培养后,CD+3CD+56细胞迅速增多,可较培养前升高1 000 倍以上。CD+3CD+8细胞也可从培养前的20%上升到60%~80%[7]。本文结果显示CIK细胞不论在体外培养过程中,还是在回输体内后,CD+3CD+8细胞、CD+3CD+56细胞均明显增高。

本文观察了免疫活性细胞治疗对HBV 感染肝病患者肝功能的影响,结果发现治疗后TP、ALB、GLO、TBIL、ALT以及AST均较前明显好转P

参 考 文 献

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