冠心病患者血浆含量测定论文

【摘要】目的:测定冠心病患者与健康对照者血浆中MBL含量,分析其变化情况,从固有免疫的角度探讨冠心病的可能致病机制。方法:采集100例冠心病(CHD)患者空腹静脉血,健康对照者60例,采用ELISA法对血浆中MBL含量进行检测。结果:100例冠心病人血浆MBL含量的平均值为3900μg/L,标准差为3209;60例健康对照组血浆MBL含量的平均值为2056μg/L,标准差为1824。冠心病组血浆MBL含量高于健康对照组,经t检验,t=4071,P<001,差别有统计学意义。结论:冠心病组血浆MBL水平高于健康对照组,二者均值比较差别有统计学意义,血浆MBL参与了冠心病的发生、发展过程。

【关键词】冠心病;MBL;ELISA;含量

【ABSTRACT】Objective:ThemainpurposeofthisstudyistomeasuretheMBLlevelinplasmawithcoronaryheartdiseaseandtrytoanalyzethepossiblemechanismofCHDsdevelopmentfromtheviewofinnateimmune.Methods:100bloodsamplesofCHDpatientsand60thatofhealthcontrolswerecollectedandtestedbyELISA.Results:TheplasmalevelofMBLwere3900μg/L,SD3209incases,while2056μg/L,SD1824incontrols.TheplasmalevelofMBLincasesishigherthanthatofcontrols(t=4071,P<001).Conclusion:TheplasmalevelofMBLishigherinCHDpatientsthanthatincontrols.

【KEYWORDS】CHD;MBL;ELISA;Plasmalevel

冠心病(coronaryheartdisease,CHD)是一种严重危害人类健康的疾病,其发病率和死亡率居首位,尤其在发达国家更为严重,而在我国也呈逐年上升趋势[1]。其病因和发病机制尚未完全阐明,近年来,冠心病发病的炎症学说越来越得到重视[2],对一些炎性因子和急性期蛋白的研究也越来越深入。甘露聚糖结合凝集素(mannanbindinglectin,MBL)是一种兼有调理素和直接激活补体功能的免疫分子,参与构成抗感染的第一道防线[3]。国外有些学者报道MBL与动脉粥样硬化发生、发展有关[4~7],但国内尚无报道,因此本研究主要测定冠心病患者血浆中MBL含量,并对其变化进行分析,从天然免疫的角度探讨冠心病的可能致病机制,为其辅助诊断和治疗提供资料。

1材料与方法

11实验材料

主要设备:低温冰柜(thermo,美国);酶标仪(Starfax2100,美国);普通高速离心机(TGL168,上海)

主要试剂:MBLELISA试剂盒(北京现代高达生物技术有限责任公司)

12实验方法

121标本的收集:空腹静脉血标本用EDTAK2抗凝管(2ml)收集。

冠心病(CHD)组:共100例,为河北北方学院附属第一医院20049~200510月住院的冠心病患者,男51例,女49例;年龄45~70岁,平均(6041±9443)岁。病例均经心电图、心肌酶谱和临床症状等综合诊断,符合WHO冠心病诊断标准。

健康对照组:60例,为来院进行健康体检者,男性32例,女28例,年龄43~71岁,平均(6027±7198)岁,病例无冠心病症状、体征,超声心动图及心电图均正常。冠心病组与健康对照组组间年龄无统计学差异。

122标本的处理

取1ml全血放入15ml离心管中,5000转/min离心5min,分离血浆,-86℃保存,供测定血浆MBL含量。

123血浆中MBL含量测定

按MBLELISA试剂盒说明书,基本操作如下:

标本及试剂准备:冠心病、健康对照血浆标本从低温冰柜(-86℃)中取出,溶解并恢复至室温,离心(3500转/min5min)。取上清2μl,用标本稀释液对标本进行200倍稀释(加入398μl标本稀释液[PBS+005%BSA]),混匀。所有实验用试剂均在室温平衡后使用。

操作步骤:

①取100μl稀释标本加入酶标板中,同时做对照,第一孔加100μl稀释液作空白,第二孔向后依次加含MBL不同浓度(0,1,2,5,10,25,50,100ng/ml)的标准液各100μl,标准孔均作复空;

②置37℃水浴1h;

③将板中的液体弃去,每孔加入150μl洗板液进行清洗,室温静置3min,弃去洗板液,反复3遍;

④清洗后,每孔加入100μl酶标记的MBL抗体,37℃1h,使酶标抗体与标本充分结合。

⑤清洗,操作同③;

⑥清洗后,每孔加入底物A、B各50μl,室温避光15min。每孔加入终止液50μl,轻轻混匀20s;

⑦用酶标仪比色测定波长为450nm,参考波长为620nm。在20min内完成。

2结果

用SPSS130软件进行统计分析,冠心病组、健康对照组血浆MBL含量的比较,采用两样本均数比较的t检验。

100例冠心病人血浆MBL含量的平均值为3900μg/L,标准差为3209;60例健康对照组血浆MBL含量的平均值为2056μg/L,标准差为1824。冠心病组血浆MBL含量高于健康对照组,经t检验,t=4071,P<001,差别有统计学意义,见表1。表1冠心病组与对照组MBL含量水平比较

3讨论

人类血清MBL浓度主要受结构基因外显子1密码子点突变的影响和启动子区多态性的调控[8~11]。国外已有一些MBL基因与冠心病的相关性研究[4~6],但对血浆MBL浓度与冠心病的相关性研究很少,只有冰岛的一份前瞻性研究报告[7]:高浓度的血浆MBL者,尤其是糖尿病病人、高血脂、血沉升高人群患心肌梗死的概率较低,提示MBL可能与清除动脉粥样硬化因素有关。雷克雅未克Landspitali大学的瓦尔迪马森(HelgiValdimarsson)和同事分析了当地的研究资料,共纳入了1967年以后的近2万参试者。在对其中987名70岁参试者的横断面研究中,作者发现,MBL水平高(>1000mg/L)与水平低相比,心肌梗塞风险下降36%(P<0001)。为证实此结论,研究者对另一个有1309名中年人的人群进行了前瞻性分析。结果发现MBL水平高和心肌梗塞风险减弱有关联的迹象,但不如前一横断面分析中的那样强烈,对总人群、吸烟者或高血压病人也没达到统计学意义。但这次分析证实,高水平MBL对糖尿病人(P=002)或高胆固醇血症病人(P=0004)与心肌梗塞风险大为减小有关。鉴于上述在糖尿病人中的结论“测量MBL可用于心性风险的辅助评估,也可能帮助评估预防治疗的需要”,本研究发现,100例冠心病人血浆MBL含量的平均值为3900μg/L;60例健康对照组血浆MBL含量的平均值为2056μg/L。经t检验,t=4071,P<001,二者均值比较差别有统计学意义,说明血浆MBL可能参与冠心病的发生、发展,但具体作用及机制还有待进一步研究。

参考文献

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