高效液相色谱法测定茵栀黄注射液的含量

关键词 茵栀黄注射液 高效液相色谱法 中药质量控制

茵栀黄注射液是由茵陈提取物、栀子提取物、黄芩苷、金银花提取物组成的复方制剂，具有清热解毒、利湿退黄的作用。在临床广泛应用过程中，该药不良反应的报道不断增加。因此，应加强其化学成分与药效学方面的研究，完善其质量标准，以利于评价产品质量， 促进其开发利用。文献已报道利用HPLC法测定其黄芩苷含量作为质量控制的指标［1］，也有分别测定其他2种含量相对较少的成分――栀子苷和绿原酸，作为其质控标准［2-3］。但茵栀黄注射液是一个复方制剂，由多味药按君臣佐使的原则配伍而成，所含化学成分复杂，检测任何一种活性成分都不能反映整体疗效。为了全面地对其进行质量控制,反映出产品的整体信息，我们对其HPLC指纹图谱进行研究，初步建立了茵栀黄注射液的HPLC指纹图谱,为产品质量进行全面评价提供一定参考，并为今后深入研究，建立更加完善的质控标准进行有益的尝试。

1 材料

Waters 高效液相色谱仪，515泵，996二级管阵列检测器，Millennium 32色谱工作站（美国 Waters 公司）。乙腈、甲醇均为色谱纯，水为二次重蒸馏水，磷酸为分析纯；黄芩苷、栀子苷、绿原酸对照品购自中国药品生物制品检定所；茵栀黄注射液供试品为常熟雷允制药厂生产，共5批（批号0507061―0507065），10ml/支装。

2 方法和结果

2.1 色谱条件：岛津C18反向色谱柱（150mm×6mm，5um ）。流动相：A相为0.4%磷酸水液，B相为乙腈，梯度洗脱，0~20min：12%A；20~25min：12%A30%A；25~45min：30%A；45~50min：30%A12%A。检测波长240nm，柱温为室温。

2.2 溶液制备：对照品溶液制备：分别精密称取黄芩苷、栀子苷、绿原酸标准品20mg、2mg、0.5mg，置25ml容量瓶中，加乙腈12ml，超声助溶，加蒸馏水至刻度，备用。供试品溶液的制备：取同一批号供试品10支，混匀，精密吸取1ml，置25ml容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3 标准曲线：取对照品溶液4，8，12，16，20μl，分别进样，测定峰面积，按照各进样量换算成进样10μl时的浓度，以各峰面积A对相应的浓度C（μg/ml）回归，得回归方程分别如下。黄芩苷：C=8.252×10-5，A-1.056，r=0.9998；栀子苷：C=6.986×10-4，A-0.122，r=0.9996；绿原酸：C=4.271×10-4，A-0.015，r=0.9995。对照品色谱图见图1。

2.4 精密度试验：取同一批号（0507061）样品溶液，连续进样5次，计算各峰面积。结果：RSD

2.5 稳定性试验：取同一批号（0507061）样品溶液，8h内进样5次，计算各峰面积。结果：RSD

2.6 供试品测定：取各批供试品，按上法制备测定液，取10μl进样，依法测定。结果见表1，色谱图见图2。

RSD为1.68%，栀子苷回收率为97.88%，RSD为1.81%，绿原酸回收率为97.12%，RSD为2.10%。

3 讨论

经二极管阵列检测器扫描，黄芩苷在214、276、314nm处有最大吸收；栀子苷在240nm有最大吸收；绿原酸在327nm左右处有最大吸收，比较不同波长下的色谱图，结果显示，在240nm出峰多且主要共有峰吸收强度较大，能提供较好的色谱信息。因此，选择240nm作为测定波长。本实验流动相为弱酸性，且黄芩苷在此条件下易析出，对柱子损伤会比较大，所以实验中要严格控制流动相的PH值，并在实验结束后，及时充分冲洗柱子。

4 参考文献

［1］韩梅海,成爱华,王江梅.RP-HPLC法测定茵栀黄注射液中黄芩苷的含量［J］.中成药,2002,24（4）：313-314.［2］何绍萍.HPLC测定茵栀黄注射液中栀子苷的含量［J］.海峡药学,2006,18（4）：55-56.

［3］郑河平,郑洁平.HPLC法检测茵栀黄制剂中的绿原酸含量［J］.中国药事,2001,15（3）：191-192.

收稿日期 2008-03-26