肿瘤相关基因检测方法及研究进展

【摘 要】肿瘤是危害人类健康最严重的疾病之一，人们与之斗争了许多年，但收效甚微。目前肿瘤治疗中亟待解决得问题就是早期诊断和肿瘤转移，随着分子生物学的飞速发展，肿瘤学研究已进入到基因与分子水平，发现了许多与肿瘤发生、发展、演变相关的基因变化，包括癌基因、抑癌基因、肿瘤转移基因、肿瘤转移抑制基因、肿瘤相关病毒基因等，越来越多的实验结果表明，许多癌细胞的基因组DNA有癌基因或抑癌基因的缺失或点突变等改变，这些改变可作为某些肿瘤早期检测的基因标志[1]。另外还发现与肿瘤转移过程有关的肿瘤转移基因、肿瘤转移抑制基因，也可作为基因检测的标志物。应用分子生物学技术，对这些基因进行检测，是目前肿瘤基因诊断的一个重要方式。本文对肿瘤相关的基因和检测方法进行了综述。

【关键词】肿瘤 基因 检测方法

1肿瘤相关基因

1.1癌基因

癌基因是指在自然条件下，具有潜在的诱导细胞恶性转化的基因。癌基因主要是促进细胞生长和繁殖，并且阻止其发生终末分化倾向。在研究逆转录病毒时发现，将某些逆转录病毒的基因片段潜入细胞基因中，并使这些基因迅速地表达，结果是被嵌入的细胞呈恶性转变，特别是如果这些逆转录病毒进入正常细胞染色体DNA的特定部位，就能很快地改变这些连接部位的基因表达，而使细胞癌变。

1.2抑癌基因

机体中有一类对正常细胞增殖起负调节作用的基因称为抑癌基因，当这类基因丢失、失活或变异时，往往会促使细胞失控而呈恶性生长[2]。

1.3肿瘤转移相关基因和转移抑制相关基因

近年来，在肿瘤转移机制研究中的重要进展，就是发现了一些与肿瘤转移呈正负相关的肿瘤转移相关基因和转移抑制相关基因。在这里，我们把肿瘤转移相关基因定义为一个广义的概念，就是指与肿瘤的转移呈正相关，即其基因的改变和表达能促进或导致肿瘤转移的基因。我们把对肿瘤转移起负调控作用，即抑制肿瘤转移发生、形成的基因定义为肿瘤转移抑制相关基因，其主要作用是抑制肿瘤细胞的转移表型。

2肿瘤相关基因检测

肿瘤相关基因检测是指利用现代分子生物学的方法检测那些和肿瘤相关的基因的突变及表达异常。这些方法有很多，包括Southern印迹杂交、Northern印迹杂交、斑点杂交、印迹杂交、原位杂交，以及各种PCR技术和基于PCR技术的RFLP和SSCP。另外基因诊断中最直接、最准确的方法就是直接测序，由于自动测序技术的发展及商业化，DNA测序技术有望应用于临床。

DNA芯片技术是近年来发展较为迅速的一种新技术，它是在固定相上合成大量标记的探针，然后和待测基因杂交，通过检测杂交信号来对基因进行分析，不仅能够检测出突变和多态性，而且具有高效、快速、敏感和自动化等特点将成为最有潜力的新一代基因诊断技术。Hacia等用基因芯片检测遗传性乳腺癌和卵巢癌基因BRCA1突变体，检测了35例患者样本，发现其中14例有基因突变，检测准确率达到99%。Ficarra研制一种基因芯片用于监测与肿瘤相关的p53基因全长编码序列，一般认为50%以上的肿瘤患者该基因会发生突变。Prix利用芯片研究，发现结肠癌患者粪便中存在K-ras基因的突变[4]。Ollins研制一种基因芯片来获取瘤细胞生长相关基因的表达模式，从而为人类对肿瘤疾病的发病机制及诊断作出重要贡献[3]。目前已制备有集成p53基因正常序列及几百个已知突变的特异探针的基因芯片，将在癌症的诊断、分期、分类中发挥重要的作用。

3 结语

肿瘤基因的检测虽然取得了重大进展，但是由于癌症的发病是多因素的，基因诊断应用于肿瘤的诊断存在一定的局限性。另外，癌基因和抑癌基因的突变多是后天的，基因的改变只限于肿瘤组织的DNA，因此基因检测的标本应应取自肿瘤组织，而不能采用外周血或其他组织细胞，但是如果是发现了肿瘤早期诊断就失去了意义，引人注目的是，Sidransky和Tada已首次从大肠癌患者粪便以及胰腺癌病人胃抽吸液及粪便中成功地检出了K-ras基因突变。Hardingham等建立了检测血液中结、直肠癌细胞ras基因突变的方法，阳性率为33%（9/27），其中7人由于复发、转移而死亡，血液检测结果与生存期显著相关[5]。当然，这种无创伤性基因早期诊断的新途径还有待于进一步研究。此外，癌基因的活化或抑癌基因的失活，都只是发生肿瘤的原因之一，而且同一种基因改变在同种肿瘤病例中的检出率亦有所差别。所以有时仅靠基因检测是不行的，往往需要结合其他手段检测。尽管如此，基因检测对肿瘤的诊断、鉴别诊断、疗效检测、预后判断等具有重要的参考价值，随着对肿瘤发病机制的深入研究，肿瘤的基因检测必将取得重大突破。

参考文献：

[1]刘向阳.肿瘤的基因诊断和基因治疗[J].中国医刊，1999，34（4）：58.

[2]马文丽，郑文岭.分子肿瘤学[M].2003.

[3]刘涛，王春友，张锦辉.胰腺癌患者血浆k-ras基因与肿瘤标志物联合检测及其意义[J]临床消化病杂志，2002（14）2：54.

[4]刘同华.基因芯片技术及其在肿瘤研究中的应用[J].重庆医学，2003，32（9）1266～1267.

[5]乔玉欢，陈瑞川.肿瘤转移检测标志基因研究进展[J].国外医学肿瘤学分册，2000.（1）27：56～57.