《卫生微生物学》实验教学实践与体会

摘要：本文主要从教学内容、实验准备、实验环节安排、规范学生操作等几个方面总结了《卫生微生物学》实验教学实践中的体会，对进一步提高实验教学质量、培养符合社会需要的卫生微生物检验人才具有重要意义。

关键词：卫生微生物学；实验教学；卫生检验

中图分类号：G642.0 文献标志码：A 文章编号：1674-9324（2015）14-0247-02

《卫生微生物学》是研究微生物与其环境（如大气、水、土壤、食物等）相互作用的规律、对人类健康的影响以及应对方略的科学。该课程作为预防医学及卫生检验专业本科教育教学的基本课程，在我国的形成、发展和日趋完善的过程中，一直是对生物病原学习、研究、应用和疾病预防、控制必不可少的重要理论和实践的重要课程之一[1]。由于《卫生微生物学》是一门实践性和应用性非常强的学科，所以实验课是其重要组成部分。通过实验课可以培养学生严肃认真的科学态度和独立自主的工作能力，为今后从事疾病预防控制、卫生监督与监测、进出口商品检验和检疫、环境安全与保护、生态平衡与防护等方面的工作奠定必要的基础[2]。笔者根据多年的《卫生微生物学》实验教学实践，将体会总结如下。

一、合理安排教学内容，强化实验技能

教学内容主要是参考教材的实习指导，并结合学生知识背景、未来工作需求、实验室条件来确定。几经修改完善，目前包括了培养基的配制及灭菌、环境中微生物的检测、微生物的接种技术、细菌的简单染色及观察、革兰氏染色及观察、水中大肠菌群的测定、水中菌落总数的测定、变质食品中蜡样芽孢杆菌的检测与鉴定、真菌形态观察、滴露消毒效果的检测等。内容涉及了卫生微生物检验的主要相关方面，强化了学生卫生微生物基本实验技能。

二、与实验员密切沟通，做好充分准备

《卫生微生物学》实验涉及诸多器材，如移液管、平皿、接种环、接种针、涂布棒、玻璃棒、酒精灯、酒精棉球、镊子、标签纸、记号笔、显微镜、显微镜配套用品、试管、试管架、烧杯、锥形瓶、棉签等，还有灭菌水、各种染液等，其数量远远超过一般的理化检验实验，所以准备工作极其琐碎、繁杂。在我们的实验准备中，主要由带教老师列出所需用品及数量，然后由实验员负责实际的准备工作。由于实验内容的调整、新实验的加入等原因会导致实验器材或数量的变化，所以带教老师与实验员必须密切沟通以防遗漏或错误发生，影响实验课的顺利进行。

三、重视预实验，保障实验课顺利开展

预实验是在正式实验之前进行的一次实验。通过预实验可以摸出最佳的实验条件、操作方法，为正式实验打下基础。如所用教材上半固体培养基的琼脂用量为0.3g/100ml，但预实验发现0.3g/100ml不能凝固，通过几个不同浓度的比较最后选择了0.8g/100ml。再如，蜡样芽孢杆菌检测的实验需制备50%无菌蛋黄液，在预实验中通过尝试注射器直接刺入蛋壳抽取蛋黄、将整个鸡蛋打在烧杯中再用注射器抽取蛋黄、先打破小块蛋壳放掉大部分蛋清后打在烧杯中再用注射器抽取蛋黄等多种方式，最后证明第三种方法最能保证蛋黄液的数量及纯度。

预实验也是发现实验用品是否存在问题的重要环节，为正式实验排除障碍。如在蜡样芽孢杆菌检测的预实验中发现-20℃放置一年的多粘菌素在10000IU/ml时对杂菌的抑制效果很差，将浓度增至20000IU/ml时效果明显转好，所以推测多年菌素不稳定，放置一年后有效成分被破坏了。再如，有一次预实验发现琼脂浓度高达2g/100ml仍不能使培养基凝固，推测琼脂老化了，通过更换新的琼脂粉解决了问题。

通过预实验还可以检验实验设计的合理性，避免由于设计不周影响实验教学效果。如通过水中菌落总数检测的预实验，发现原定的水样稀释度10-1、10-2所培养出的菌落过多，计数困难且不准确，所以去掉这两个稀释度，增加10-5、10-6两个稀释度，最终采用的是10-3、10-4、10-5、10-6，学生实验培养出的菌落数量合适有效。

四、合理安排实验环节，充分有效利用时间

《卫生微生物学》实验基本都包括老师讲授、培养基配制灭菌、样品制备、接种、培养观察等几个环节。其中培养基配制灭菌环节的安排尤为重要，因为灭菌锅升温、灭菌、降温大约需要1.5小时。如果让学生在老师讲授完才开始配制、灭菌，必然会使实验时间远远超过规定学时，而且学生等待灭菌的时间很难处理。笔者教学实践中是让自发组成的兴趣小组轮流在上课前1.5小时配制培养基并灭菌。上课后老师先讲解实验相关内容，然后播放一些与将要进行的实验相关的视频，如倒平板、平板划线、斜面划线及穿刺、梯度稀释、革兰氏染色、显微镜使用等操作。视频形象直观，便于学生理解接受。然后把时间交给学生做准备工作，如样品前处理、梯度稀释、标记等。一般在准备工作进行时或完成后稍等片刻培养基刚好灭菌完毕，学生可以领取培养基并继续实验。这样安排就可保证实验内容在规定的学时内完成。在接种技术练习的实验中，由于所用培养基为前一次实验课所配制，所以实验时间比较短。所以，我们还同时安排了实验室内微生物的检测。所用培养基与接种技术练习所用培养基一样，也已在前一次实验时完成配制。充分有效利用时间可使学生在有限的时间里学到了更多知识。

五、现场指导、课后总结，规范学生操作

在学生进行实验操作时，教师进行巡视，及时指出操作中存在的问题，或进行现场示范操作。在接近下课时，将所有小组操作中出现的问题总结给学生，使有者改之，无者加勉。在前期的实验中存在最多的问题是无菌意识淡薄，如将移液管拿出后用手触摸吸嘴、操作离酒精灯很远、将平皿盖子彻底打开并扣在桌面上、倒平板时手握锥形瓶口部等，此类问题主要是以提醒为主。还有倒板、涂板、画线、移液管使用等操作不规范，此类问题主要以示范为主。前期还容易出现不标记或标记不当问题，应及时指出。经过前期的指导，在中后期的实验中，学生的无菌意识越来越强，操作也越来越规范。

六、重视实验报告，培养学生正确的科学态度及分析问题、解决问题的能力

实验报告是实验课程的一项重要内容，既可以体现出学生对实验内容的认识，也可以反映出教师教学效果如何。所以，笔者非常重视实验报告，将报告书写是否规范、结果记录是否如实、讨论是否认真作为判定实验报告成绩的重要依据，以此来培养学生正确的科学态度及分析问题、解决问题的能力。如测定水中菌落总数时，有一组出现10-4稀释度培养出的菌落数多于10-3，某同学就针对这点，列出了：（1）10-3样品接种时移液管操作不慎，漏掉一滴到实验台上；（2）向10-3样品中倾注的培养基温度偏高烫死了部分细菌；（3）10-3样品未混匀即从其液面吸取1ml加入9ml灭菌水中，制备出10-4稀释度样品；（4）10-4稀释度样品制备时，移液管管嘴部分的挂液（10-3稀释度）全部流入9ml灭菌水中；（5）向平皿中加入1ml10-4稀释度样品前移液管管嘴碰到了左手污染了细菌等多个可能的原因，其讨论可谓细致、全面、合理，反映出该生对实验进行了仔细观察和认真思考。

七、不断调整、改进，完善实验内容

国家标准是在全国范围内统一的技术要求，是进行卫生检测的重要依据，但一般都有有效年限，过了年限后，国家标准就要被修订或重新制定。那么，相应教学内容也应该及时更新。如食品中大肠菌群测定的国标有2003版、2008版和2010版。2009、2010年的实验教学采用的是当时最新的GB/T 4789.3-2008，从2011年起至今采用的是现行的GB 4789.3-2010方法。根据国标调整内容，有助于学生树立法规、标准和规范意识。

粮食中真菌的检测实验中霉菌、酵母菌数的测定，除了样品处理之外，其他操作和水样中菌落总数的操作过程基本一致。考虑到菌落总数测定比真菌数检测常用，就在开课的第三年去除了粮食中霉菌、酵母菌数的测定，保留霉菌标准片的观察。并在已开设的变质食品中蜡样芽孢杆菌检测的基础上，增加蜡样芽孢杆菌的鉴定实验。由于蜡样芽孢杆菌鉴定的实验时间相对较短，就将保留的真菌标准片的观察安排其中。

考虑到学生缺乏微生物实验基础，笔者经过思考，并与其他任教老师商议，将前三个实验设计为培养基配制及灭菌、接种技术练习、简单染色与革兰氏染色。第一个实验配制的培养基供第二个实验使用。第二个实验所接种的是大肠埃希氏菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌三个标准菌株，供第三个实验使用。如此将三个实验联系起来，学生既练习了微生物实验的基本技术，也熟悉了微生物实验的基本流程，有助于后面的实验顺利开展。

八、总结

本单位《卫生微生物学》实验课自2009年开课以来，实验内容及设计安排不断改进，教学效果越来越好，为进一步的实验教学改革奠定了基础。

参考文献：

[1]张朝武.卫生微生物学[M].北京：人民卫生出版社，2012.

[2]吴倩，李磊，王慧娟，王克波，敖淑清，王心如.浅析我国卫生微生物的发展趋势及检验人才的培养[J].中国卫生检验杂志，2010，20（05）：1238-1240.

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