比较HPLC法和紫外分光光度法测定清开灵注射液中黄芩苷的含量

[摘要] 目的：比较HPLC法和紫外分光光度法测定清开灵注射液中黄芩苷的含量。方法：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱Diamonsil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），以甲醇-水-磷酸(4753 0.2)为流动相，流速为1.0 ml/min，检测波长为276 nm。结果：清开灵注射液中黄芩苷在10~70 μg/ml浓度范围内呈良好的线性关系，平均回收率为99.1%，RSD=0.75%(n=6)。结论：HPLC法较紫外分光光度法简便、快速、准确、可靠，可以作为清开灵注射液含量控制的有效方法。

[关键词] HPLC法；紫外分光光度法；清开灵注射液；黄芩苷

[中图分类号] R917 [文献标识码]B [文章编号]1673-7210（2007）12（c）-162-02

清开灵注射液是一种中药复方制剂，由板蓝根、金银花、栀子、黄芩苷、胆酸等8种中药组成[1]，具有清热解毒、化痰通络、醒神开窍的作用。按现行标准《中国药典》2005版一部[2]规定，其主要成分黄芩苷的含量测定为高效液相色谱法，原标准《卫生部药品标准中药成方制剂(第一分册)》[1]是采用紫外分光光度法测定，本文对两种方法进行了比较，结果有较明显的差异。

1 仪器与试药

1.1 仪器

LC-10AT高效液相色谱仪，SPD-10A紫外可见检测器（日本岛津公司），N2000色谱工作站（浙江大学智达信息工程有限公司）；UV-2401PC紫外分光光度计（日本岛津公司）；AE240电子分析天平（瑞士梅特勒-托利多）。

1.2 试药

黄芩对照品(中国药品生物制品检定所生产，批号1538-200106)；清开灵注射液（广东永康药业有限公司生产，10 ml/支，5支/盒，批号分别为030612、030805、030813、031027、031105)；盐酸、乙醇、甲醇均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 紫外分光光度法

精密量取清开灵注射液1.5 ml置离心管中，滴加6 mol/L盐酸溶液2滴，搅拌均匀，即析出沉淀，离心，弃去上清液，沉淀用0.2 mol/L盐酸溶液5滴洗涤1次，加70％乙醇约5 ml，微热使溶解，定量转入50 ml量瓶中，用70%乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取1 ml，置25 ml量瓶中，加0.2 mol/L盐酸溶液至刻度，摇匀。照紫外分光光度法，在276 nm波长处测定吸光度，按黄芩苷(C21H18O11)吸收系数（）为631计算，即得。结果见表1。

2.2 高效液相色谱法

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱Diamonsil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；以甲醇-水-磷酸(47530.2)为流动相；流速为1.0 ml/min；检测波长为276 nm；柱温为室温；进样量为20 μl。理论塔板数按黄芩苷峰计算不低于3 000，以外标法计算含量。

2.2.2 线性关系精密称取干燥至恒重的黄芩苷对照品适量，置100 ml量瓶中，加70%乙醇适量使溶解，加流动相1 ml，再加70%乙醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液（每1 ml中含黄芩苷503 μg）。精密量取对照品贮备液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 ml分别置10 ml量瓶中，用70%乙醇稀释至刻度，按上述色谱条件分别进样，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，对照液浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为Y＝3 675X-91.42，r=0.999 8(n=7)。结果表明黄芩苷在10~70 μg/ml范围内线性关系良好。

2.2.3 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液20 μl（批号为030805），在8h内每小时测定1次，结果平均含量为4.83 mg/ml，RSD=0.79%(n=8)，表明供试品溶液在8 h内基本稳定。

2.2.4 精密度试验 取浓度为50 μg/ ml的黄芩苷对照品溶液，连续进样6次，每次进样20 μl，记录峰面积，结果RSD= 0.53%(n=6)，说明本法精密度良好。

2.2.5 重现性试验 取同一供试品溶液(批号为030813)6份，按样品测定方法测定，结果黄芩苷平均含量为5.06 mg/ml，RSD = 0.61%。

2.2.6 回收率试验精密量取已知含量的样品6份，分别加入一定量的黄芩苷对照品贮备液，按照含量测定方法进行测定，计算回收率，平均回收率99.1%，RSD=0.75%，结果见表2。

2.2.7 样品测定 取清开灵注射液1 ml，置100 ml量瓶中，用70%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液，作为供试品溶液；另取浓度为50 μg/ml的黄芩苷对照品溶液，各精密吸取20 μl，分别注入液相色谱仪，测定峰面积，按外标法计算含量，结果见表1。

3 讨论

在对不同批号的5批清开灵注射液中黄芩苷的含量测定过程中，我们发现紫外分光光度法测定值比HPLC法测定值稍高，分析原因可能是清开灵注射液处方中其他成分在276 nm处有吸收，在紫外分光光度法测量中亦被作为黄芩苷的含量计算，因此测定结果与真实值有偏离。

HPLC法测定清开灵注射液中黄芩苷的含量，测定成分为黄芩苷单一成分，专属性强，方法简单，重现性好，结果可靠，可作为清开灵注射液含量控制的有效方法。

[参考文献]

[1]中华人民共和国药典委员会.卫生部药品标准中药成方制剂(第1分册) [S].1996.160-162.

[2]中华人民共和国国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京:化学工业出版社, 2005.610-613.

（收稿日期：2007-10-14）

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