急性心肌缺血再灌注时BaX的免疫组织化学研究

【摘要】 目的 为心肌缺血／再灌注损伤所致心性猝死的法医学诊断提供形态学依据，方法运用免疫组织化学方

法，研究bax蛋白在心肌组织中不同区域的表达。 结果 对照组正常心肌组织无bax蛋白表达。bax蛋白再灌注0．5

h后即可在缺血区域表达，且表达主要在心肌内层。再灌注1 h后可观察到bax蛋白不仅表达于心肌内层且已经扩展至

心肌的全层。再灌注2 h发现心肌外层表达明显强于心肌内层，随着再灌注时间的延长可以发现bax蛋白的表达逐渐减

弱。 结论在急性心肌缺血再灌注中，bax基因对心肌细胞凋亡的发生有着重要的作用，且可以作为心肌缺血再灌注

的早期诊断提供一项辅助诊断依据。

【关键词】心肌再灌注损伤；bax蛋白；免疫组织化学；法医病理学

【中图分类号】d919．1；r392．3

【文献标识码】a

【文章编号】 1007—9297(20__)02—0129～02

immunohistoc hemical study on bax protein expression in the acute myocardial ischemia／reperfusion in rats．w ang feng，

wang de-guo，flu yong-liang，li yong-hong．department of forensic pathology，wannan medical college，anhui 241001，

china

【abstract】0bjective to search the objective morphologic evidence for the forensic pathological diagnosis on the acute

myocardial ischemia／reperfusion in rats． method to study the expression of bax protein in the different rid& in the acute[！]

myocardial ischemia／reperfusion(i／r)in rats with immunohistochemistry． result these was no expression of bax protein

in control group．the expression of bax protein began to increase in myoc ytes 0．5 h after i／r in the ischemic areas and the ex—

pression of bax protein in inner layer was stronger than in outer layer．however，the expression of bax protein appeared firstly

in the inner layer of myocardium and extended gradually toward the outer layer 1 h after i／r．there would find that the expres —

sion of bax protein in outer layer was stronger than in inner layer，then the expression of bax protein was weaken gradually．

conclusion m aybe bax gene is a important regulative gene in the proc ess of apo ptosis，these changes observed in the present

sudy might be useful for the f0rensic pathological diagnosis of the early myocardial ischemia／reperfusion．

【key words】 myocardial reperfusion injury；bax protein；immunohistochemistry；forensic pathology

缺血能导致组织损伤甚至细胞死亡，而缺血后再灌注又能

引起新的损害，即所谓的再灌注损伤 j。心肌缺血再灌注损伤

经历两个独特而又相关联的病理过程：内皮触发与中性粒细胞

放大。再灌注早期的主要病理生理改变是内皮细胞功能失调，

它以内皮一氧化氮释放明显降低为特征，这种内皮功能状态的

改变可引发一系列的病理生理变化，开始再灌注损伤的病理过

程 2 j，这就是所谓的“内皮触发机制”；紧接着再灌注过程中的第

二个主要病理生理改变即“中性粒细胞放大作用”。

本实验，通过观察大鼠心肌组织，在心肌缺血后再灌注的不

同时间段的bax蛋白的表达规律，以期能为心脏缺血再灌注损

伤及其引起猝死的法医学诊断提供依据。

材料与方法

一

、实验动物分组

成年wistar大鼠30只(由南京药科大学提供)，自然光照，

室温饮食，饮水不限。随机分为6组，每组5只，雌雄不限，质量

200 g左右。分为断颈处死组、心肌缺血15 min后再灌注0．5 h

组、1 h组、2 h组、4 h组和6 h组。

二、动物模型的制备

根据文献[3]的方法并加以改良，大鼠乙醚麻醉后上腹带加

压，呼吸机常压口腔通气并维持麻醉。暴露心脏，从左心耳下缘

进针，动脉圆锥左缘出针，线两端穿过一段双聚乙烯管，拉紧丝

线两端，压紧心肌表面并夹紧，根据心电图判断血流是否阻断，

持续阻断15 rain，松开止血钳实施再灌注。逐层关胸，切口放少

量青霉素，分笼饲养。

三、梗死区域的判定

采用1vrc染色法，沿心脏左室长轴切块，加1％ttc溶液，

37℃ 水浴15 min，置于4％多聚甲醛溶液中。

四、bax免疫组织化学

bax一抗体(美国sigma生物试剂公司)sabc试剂盒、dab

显色剂(武汉博士德公司)。各组心脏标本石蜡切片厚5衄，免

疫组化染色，按照说明书的操作步骤进行。pbs取代一抗作阴

性对照。

五、图像分析及统计学处理

形态计量法方法：每组测定5张切片，每张切片取5个视野，

以视野数为单位，每组共25个视野，用hpias一1000高清晰彩

色病理图像测量系统进行测量，选取平均光密度值(optical den—

sity，od )为定量参数，测定bax蛋白的表达。

结 果

一

、常规he染色

正常对照组和不同时间缺血／再灌注组心肌细胞均染色清

世圳№ 诎 但 ⅲ { tll[ “

二 x免疫组织化学染色

0叭i j．i腰f !itl_ij }q灌往i hn 1 j 蠕刊“x噩ii{ 他点

j l }【口 眦1’c-l儿oq十 (0h j；!) i #iii f h垃

ⅵ i】『1 l )l ^ r¨ } 1·．5 心 t， l■＆] lj l， l4 断 何潍- 埘 1蚺蜒长1q

j【 心地l’战竹 m 件邑 忸 打眦 li 瑚i [ 矗 垭衙 )ⅲ l 是一 ⅲ 【

也l 、 i rlm ¨ 1 ， i 缺 【‘耻 il丧 l 也 i 【l1 仇 蠢lj

1 0 m i i¨】

l he h 0f‘¨l vu1⋯ 鼬、i11⋯ ’ i

i m缺 再 i i． r 0m蜘胞胞 { c⋯ r

c a1 ⋯】 l l ur i fhe x1)r p ll ln in ⅲⅷ u

l，ni“ln ill nlⅷ ‘ l i11i’rl⋯ i n n l i ‘i1eⅲirli～

讨论

鼻j献㈨‘¨ } 俩 『 ili 0d 清楚川l

ⅱ瀚ri 一i 仃 制1 蒙j l『it j 眦

械氧川 u 此“ i nl iii灌汁 11 ⅲ【

9 【 i¨ ～{ 缺 【『 r j _j f lii 址防ll=f — l jh

提供| - 帅^

l、¨ h¨i ⋯ i’ill} r m i ffj计r机制．孙 l

l～一tl, ⋯他删 帕m洲 t h 卅 ^州i’他世

⋯ l 呐#求i_：l i 瞅 恫t i1㈣j{忸州 lr艄札蛹i j．i⋯

l i l!j『叭

【m、 jl j 川i 家她呐l止“ i l !" 皿

" f十．ii；lx^t ，k j ⋯¨j【lj { l i 时 j i j n0

州“n川fn j ti f j j n 鲥1 - fi¨ 体帆川尚 、讷世

～ ． i -i 1 j 吁州i岫 ．iil} “ i k

k 肌lj ”n ¨{ h lktill li] 【j li⋯ 认～ ih

l． {!}ifi1i仲rill j¨【"暗 ≠ j il "础 靶 什『ii

l 、 * 】llli 喘 l j 世 4 i nt } }l}{0 儿

}h j】 f1 j l i ^ 竹cj] i’、^ }1{ jf l

¨地 h| 缺m k讹 j j越自【魁叫i ． m ⅲ碟j=^ 1 ： ¨们

恤 i 牌．1㈨ 州i i川眦‘ 【 fill

_¨持绌川jhifj戈i ～ j肚 【胫挑⋯ i． h 协l’l!j}y rlli

t螗ii ¨ 订 川i_l f 端¨ 【li拈术 ㈨ 泄n 观t1．

叭卦¨魁 l’l{j ，fi l】 能说i 性仃 呲 i

’ 州h ： n m j f 、 川 0 i 叠 l

自 j* ¨f|lj i心 i 的{ c『眦‘ 心iii【 ”j {f 曲『¨¨ l刊

ⅲl ¨q c 7ill!jl t 11川fit ¨f十}【l制 土m j盯

心 l缺 灌h l竹致心 伴 ．f h l】桃玎__j

t 陆 i世4 j 心喹造卅 j j i 4借求璀凡1h唯

}l铷坩木艟 种d毗hr 刊特 懦删 心jill缺 冉

口 怫邶忙 毕^垃．胜 断似然世 一 蜘域rl_岫

凡

} 究赶 两驯 h 1 d l·小，¨ 『 r 蚩由最

选fl城ii i】jli j m j l 强惯 地i 心冉檀凡隼诤

i㈦ 灯 l小献mi 馊 胁 ㈣瞎晰扼 顺辅l∞偿断他据

# 女雠

tif,ji^ k ·1·l 】 】i r1 it—k,i j jll_lii|i11l⋯c{l ⋯ h 儿1 dli

i l “|_ ii【‘i⋯ ni rihi ¨·t l l 1 ：i’ ¨ ’ ’～ ¨l’ all

c ii‘ ii j⋯【j uqj i：i 、i 5i

／j ．}i ＼1． ww i ⋯ 一h wi ¨ ⋯ i 、 f ⋯hi⋯

j 【i 1¨tt]r 1『{i⋯ 【 rf1f i¨⋯v ii1 【 v r i d ． ¨¨ ．1_⋯ r-i·(】[i j

】【i h ’ii c l i[iliiii f j ：i ¨ f1i

ij i⋯ i～ 、 、．⋯ _ |_＼ ii ii【l i i- 【 i l—ii【}-f⋯ l l l ll~’l j⋯

l-t]i ⋯ 1|1、i l川1． 、、l _|j j i ⅵ { h i⋯ ‘1 lii ii jii fv

^ ⋯ii -ii-i j l h1ji i[ii r¨ 、i w i l rl }⋯ 『t。一1 i‘⋯ 、 |_

ji ；

i1 t r n1i -m i^ i1、h ⋯r( ⋯ ⋯ ” 1⋯l¨‘【l |_

‘ltⅲh．f、’ 一 ⋯v { l l、i l_【-】【ⅲ ‘i7 ‘m-{ j l 5#

【 f h 【⋯ {} 【m w if r 【 『『 h· l“ 、 1、

⋯ 1 i 】‘，、 i r7l ⋯m

n _l_h l_ l_ jl l j” ，．i l⋯ ⋯ -l-·f ，l 【· h： l_

． 『 f 1 【；l i1 r『 { t¨h u1 c 7i

7 【1 l ^f r · i¨l |1 1h l、ii_¨ ⋯vl¨ ll ⋯ ‘ 1 ．

’ 1 7 j：‘i j i