葡萄酒中合成着色剂检测方法的探讨

摘要：目的： 提高葡萄酒中合成着色剂检测方法的回收率和精密度。方法： 改进试样前处理过程中的提取步骤。结果： 检测方法的回收率为91.5%-107.2%，测定结果相对标准偏差小于7.2%。结论： 改进后的检测方法操作简便，精密度好准确度高。

关键词：精密度 准确度

中图分类号：R155.5 文献标识码：A 文章编号：1672-5336（2013）22-0030-02

色素（着色剂）作为食品添加剂，可分为食用天然色素和人工合成色素两大类，前者一般较为安全。人工合成色素是用人工化学合成方法所制得的有机色素，主要是以煤焦油中分离出来的苯胺染料为原料制成的，本身无营养价值，但由于其成本低廉、色泽鲜艳、着色力强、性质稳定、配色方便，可以增加食品的感官美和提高人们的食欲，在食品生产加工行业中被广泛应用。

研究表明过量摄入人工合成色素，将会在体内畜积，对肾脏、肝脏产生一定的伤害。偶氮化合物在体内代谢，可形成具有潜在致突变的化合物。因此GB2760-2011《食品添加剂使用标准》中对着色剂的使用范围及限量有明确的规定，葡萄酒中禁止使用。

1 原理

试样中的人工合成着色剂用聚酰胺吸附法提取，制成水溶液，注入高效液相色谱仪，经反相色谱分离，根据保留时间定性和峰面积外标法定量。

2 溶剂与材料

（1）甲醇：色谱纯。（2）聚酰胺粉（尼龙6）：过200目筛。（3）甲醇+甲酸溶液：6+4。（4）乙醇+氨水+水溶液：7+2+1。（5）柠檬酸溶液：200g/L。（6）pH6、pH4的水：水加柠檬酸溶液调pH值。（7）乙酸铵溶液：0.02mol/L称取1.54g乙酸铵加水定容至1000ml溶解，调pH=4经0.45μm滤膜过滤。（8）合成着色剂标准溶液：采用国家标物中心的有证标准溶液。

3 仪器和测定条件

（1）高效液相色谱仪：（HPLC）岛津SPD-10Avp配有紫外检测器。（2）色谱柱：SHIMADZU VP-ODS 150mm×4.6mm5um。（3）流动相：甲醇：乙酸铵（0.02mol/L）。（4）梯度洗脱：20%～35%，3min；35%～98%，6min；98%继续6min。（5）流速1.0ml/min。（6）波长254nm。（7）进样量20ml。（8）旋转蒸发器：RE-52A。

4 样品前处理

聚酰胺吸附法：称取10.0g试样于小烧杯调pH值到6，放入水浴锅中加热至60℃，加1g聚酰胺粉搅拌均匀至无颗粒，用60℃pH=4的水将试样转移至G3垂融漏斗，然后用甲醇+甲酸混合溶液洗涤3-5次，再用水洗至中性，用乙醇+氨水+水混合溶液解析3-5次，每次5ml，收集解吸液于旋转蒸发器的蒸发瓶中，将蒸发瓶至于旋转蒸发器中，蒸发温度60℃，蒸发至干，加pH=6的蒸馏水5.0ml定容，经0.45um微孔滤膜过滤后，供HPLC测定。

5 分析结果

5.1 保留时间与峰形

取浓度为0.05mg/ml合成着色剂混合标准样品，检测到柠檬黄、苋菜红、胭脂红和日落黄标准品谱图。

由图1可见，本方法所测柠檬黄、苋菜红、胭脂红和日落黄峰形尖锐，对称性好。

5.2 精密度

取浓度为0.05mg/ml合成着色剂混合标样，连续进样5次以组分日落黄为例，组分日落黄保留时间和峰面积。

本方法在测定合成着色剂混合标样时，具有良好的精密度和重现性。

5.3 提取效率的测定

取浓度为0.05mg/ml合成着色剂混合标准样品于试样同时进行试样前处理，经吸附、解析、蒸发定容测定提取效率结果如下。

浓度为0.05mg/ml合成着色剂混合标准样品经提取后测定结果计算出提取效率

本方法在合成着色剂混合标准品提取测定时，提取效率为96.4%-99.4%，所测柠檬黄、苋菜红、胭脂红和日落黄谱图与合成着色剂混合标样谱图符合。

5.4 加标回收

以红葡萄酒为基质样品，做加标回收率测定。

取不同浓度的合成着色剂混合标准工作液，加入红葡萄酒样品中使最终合成着色剂混合样品浓度为0.05mg/ml、0.01mg/ml 和0.005mg/ml，检测到柠檬黄、苋菜红、胭脂红和日落黄的谱图。

由图3可见，葡萄酒中添加合成着色剂混合样品中组分柠檬黄、苋菜红、胭脂红和日落黄峰形尖锐，分离度好。

葡萄酒中添加合成着色剂混合标样获得平均回收率和相对标准偏差（n=6）

测定结果如下：

不同浓度的样品回收率测定，回收率在91.5%-107.6%，相对标准偏差2.3-7.2%。

6 结语

本方法在样品的前处理过程中，采用蒸发瓶收集解吸液后，直接连接旋转蒸发器蒸发可蒸发至干，简化了试样的前处理过程，缩短了试样蒸发至干的时间。改进后样品的测定数据表明该方法稳定可靠，样品回收率在91.5%-107.6%，样品测定的变异系数均小于10%，操作简单方便，灵敏度较高重现性好。

参考文献

[1] 杨惠芬等主编.《食品卫生理化检验标准手册》第二章.

[2] GB/T5009.1～5009.100-2003《食品卫生检验方法 理化部分》.