热休克蛋白70和Ki67蛋白在宫颈病变中的表达及临床意义

[摘要] 目的 探讨热休克蛋白70（heat shork protein 70，HSP70）和Ki67蛋白在宫颈病变中的表达及意义。 方法 应用免疫组化方法检测HSP70和Ki67蛋白在62例宫颈鳞癌、20例宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）、12例慢性宫颈炎中的表达。 结果 HSP70和Ki67蛋白在宫颈鳞癌组织中的阳性表达（71.0%、77.4%）显著高于慢性宫颈炎（0、0）（P < 0.05）；Ki67在CINⅢ中的表达（45.5%）显著高于慢性宫颈炎（0）（P < 0.05），Ki67在宫颈鳞癌（77.4%）和CINⅢ（45.5%）中的阳性表达无差异（P > 0.05）；宫颈鳞癌中HSP70和Ki67的表达与病理级别、临床期别、淋巴结转移有关（P < 0.05）；HSP70和Ki67在宫颈鳞癌中的表达有关（P < 0.05）。 结论 HSP70和Ki67可能协同促进了宫颈鳞癌的发展；CIN中Ki67的过度表达可能预示病变的恶性发展趋势。

[关键词] 宫颈癌；热休克蛋白70；Ki67

[中图分类号] R711.74 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）07（a）-0073-03

宫颈癌是临床上常见的恶性肿瘤，在我国其发病率逐渐上升，但其发病机制并未明确。热休克蛋白70（HSP70）是在应激状态下产生的一组蛋白质，研究表明，与正常组织相比较，HSP70在肿瘤组织内的表达显著增高， 认为HSP70促进了肿瘤细胞的增殖，参与了肿瘤细胞的免疫，并与恶性肿瘤的预后有密切关系[1]，Ki67是增殖细胞相关核抗原，其功能与有丝分裂密切相关，在肿瘤细胞增殖中不可缺少。本实验通过对宫颈鳞癌组织、宫颈上皮内瘤变（CIN）组织和慢性宫颈炎标本中HSP70 和 Ki67表达的研究，探讨两者在宫颈病变发生发展中的作用及相互关系。

1 材料与方法

1.1 组织标本来源

62例宫颈鳞癌组织为河南科技大学第一附属医院妇科2009年1月～2010年12月病理石蜡切片，20例CIN组织及12例慢性宫颈炎组织取自子宫良性病变行全子宫切除术后患者，全部病例取标本前均未做放疗、化疗，均无其他慢性疾病，中位年龄 44.5岁（30～73岁）；临床分期根据国际妇产科联盟（FIGO）2000年修订的临床分期，本资料62 例宫颈鳞癌组织的临床分期为Ⅰ～Ⅲ期，其中50例进行了宫颈癌根治术，术中清扫淋巴结，可进行是否有盆腔淋巴结转移的探讨。

1.2 方法

所有试剂均购自福建迈新公司，HSP70、Ki67基因蛋白的检测采用免疫组织化学SP法。

1.3 结果判定

HSP70免疫组化染色阳性信号呈棕黄色，定位于细胞浆，Ki67阳性表达为胞核着色。在高倍镜下取5个热点视野，计数阳性细胞与肿瘤细胞的百分比：

1.4 统计学方法

应用 SPSS 19.0统计软件，采用χ2检验和Spermann等级相关检验进行分析。以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 宫颈鳞癌组织、CIN和慢性宫颈炎组织中HSP70、Ki67的表达

HSP70在宫颈鳞癌组织中的表达水平明显高于慢性宫颈炎组和CIN组 （P < 0.05）；Ki67在宫颈鳞癌组织中的表达水平明显高于慢性宫颈炎组和CINⅠ、Ⅱ组（P < 0.05），但与CIN Ⅲ组之间差异无统计学意义（P > 0.05），Ki67在慢性宫颈炎组和CIN Ⅲ组中的表达差异有统计学意义（P < 0.05）。见表1。

2.2 HSP 70、Ki67的蛋白表达水平与临床病理指标的联系

宫颈鳞癌中HSP70和Ki67的阳性表达与病理分级、临床分期、淋巴结转移有关（P < 0.05）。见表2。

2.3 HSP 70、Ki67两者间的相关性

62例宫颈鳞癌组织标本中，HSP70、Ki67蛋白共同阳性36例，共同阴性6例，经相关性分析，差异有统计学意义（r = 0.357，P = 0.004），HSP70、P53两者间有相关性。

3 讨论

热休克蛋白在原核生物和真核生物中存在较多，比较保守，是在应激时产生的蛋白，它能够与细胞中的多种蛋白质相互结合，从而使下一级蛋白作用、功能及活性发生变化[2]。平素由细胞周期对HSP70进行严格控制，在正常生理情况下细胞内存在的HSP70很少量[3]，与机体的生长和代谢有关，而肿瘤细胞具有无限增殖的特点，肿瘤自身的生长需要大量HSP70进行调节，能独立于细胞周期持续高表达诱导型HSP70。较多研究显示在恶性肿瘤中HSP70表达明显增强，与恶性肿瘤的发生、发展、复发等关系密切[4]，可作为恶性肿瘤预后的不良指标[5-6]。该研究显示：HSP70在正常宫颈组织、CIN、宫颈鳞癌中阳性表达率逐渐增高，考虑HSP70很可能促进癌前病变细胞发展为宫颈癌；HSP70在高、中、低分化的宫颈鳞癌中阳性表达率逐渐增高，差异有统计学意义（P < 0.05），有淋巴结转移者阳性表达率显著高于无淋巴结转移者（P < 0.05），Ⅱ、Ⅲ期宫颈鳞癌中HSP70的阳性表达率显著高于Ⅰ期宫颈鳞癌组织（P < 0.05），提示在肿瘤组织中，病理分化越差，细胞恶性度越高，增生越活跃，则HSP70表达越高，认为用免疫组化法检测HSP70的表达有助于评价预后。

Ki67是一种存在于增殖细胞核的与细胞增殖密切相关的白，也是近年来人们研究最多、最有研究价值的细胞增生标记[7-8]。大量研究结果显示，恶性肿瘤细胞中Ki67的表达水平越高其临床疗效及预后就越差[9-10]，多数学者研究认为Ki67的表达与肿瘤的临床病理学分级呈正相关[11]，本研究结果显示：Ki67在宫颈鳞癌组织中的表达水平明显高于慢性宫颈炎和CINⅠ、Ⅱ（P < 0.05），但与CIN Ⅲ之间差异无统计学意义（P > 0.05），表明Ki67不仅参与了宫颈癌的发生发展过程，而且可以视为一种反应宫颈上皮细胞异型性的比较灵敏的标志物，进一步证实了Ki67有较强的预测宫颈病变发展趋势的价值[12]，认为可以联合CIN 分级，共同参与临床治疗的决策；本研究中，Ki67 表达的阳性率随着宫颈癌临床分期的升高而增加，低分化肿瘤组织中的表达水平高于高分化肿瘤组织，有淋巴结转移的阳性表达显著高于无淋巴结转移组织，提示Ki67的表达水平可以判断疾病预后。

细胞恶性转化是由于细胞周期调控异常，细胞增殖活性增强所致，研究表明HSP70可以与c-myc，P53等形成复合体，抑制P53促凋亡作用，而Ki67与P53、Survivin、c-myc等功能密切相关[13-14]，本研究中，HSP70，Ki67两者间有明显的相关性，可以推测在Ki67促进肿瘤细胞增殖的过程中，HSP70作用提供保护，两者协同促进了肿瘤细胞的增殖能力。

随着生物技术的发展，HSP70，Ki67有可能作为肿瘤治疗的靶点，如用小分子干扰RNA技术沉默肿瘤组织HSP 70，Ki67的表达，抑制肿瘤细胞增生[15]；在肿瘤细胞中提取HSP，制成HSP-PC疫苗等，这些都为肿瘤治疗提供新的思路[16]，是今后研究的方向。

[参考文献]

[1] Wang XP，Qiu FR，Liu GZ，et al. Correlation between clinicopathology and expression of heat shork protein 70 and glucose-regulated protein 94 in human colonic adenocarcinoma [J]. World J Gastroenterol，2005，11（7）：1056-1059.

[2] Ritossa F. Discovery of the heat shock response [J]. Cell Stress Chaperones，1996，1：97-98.

[3] 杨秉芬，孙启鸿.热激蛋白70研究进展[J].生物技术通讯，2009，20（5）：716-218.

[4] Mizumura K，Gon Y，Kumasawa F，et al.Apoptosis signal—regulating kinas 1-mediated signaling pathway regulates lipopolysaecharide-induced tissue factor expression in pulmonary microvasculature [J]. Int Immunopharmacol，2010，10（9）：1062-1067.

[5] Yang Q，Sakurai T，Yoshimura G，et al. Prognostic value of Bcl-2 in invasive breast cancer receiving chemotherapy and endocrine therapy [J]. Oncol Rep，2003，10（1）：121-125.

[6] Eur J. Long-term prognostic significance of HSP70 C-myc and HLA DR expression in patients with malignant melanoma [J]. Eur J Surg oncol，2001，27（1）：88-93.

[7] Tanei T，Shimomura A，Shimazu K，et al. Prognostic significance of Ki67 index after neoadjuvant chemotherapy in breast cancer [J]. Eur J Surg oncol，2011，37（2）：155-161.

[8] 郭杨，张项俊，杨会钗，等.肺癌组织中耐药相关蛋白和P53，bcl-2表达意义[J].中国肿瘤临床，2005，32（18）：1037-1039.

[9] Czyzewska J，Guzifiska UK，Lebelt A，et al. Evatuation of proliferating rInrkeH Ki-67，PCNA in gastric eancens [J]. Rocz Akad Med Bialymst，2004，49（Suppi l）：64-66.

[10] Santisteban Marta，Reynolds Carol，Barr Fritcher. Emily-Ki67：a time—varying biomarker of risk of breast cancer in a typical hyperplasia [J]. Breast Cancer Research and treatment，2010，2（121）：431-437.

[11] Gurgel CA，Ramos EA，Azevedo RA，et al. Expression of Ki67，p53 and p63 proteins in keyatocyst odontogenic tumors：art immunohistochemical study [J]. J Mol Histol，2008，39（3）：311-316.

[12] Kruse AJ，JP，Janssen EA，et al. Ki67 predicts progression in early CIN：validation of a multivariate progression-risk model [J]. Cell Oncol，2004，26（1-2）：13-20.

[13] Li X，Fan X，Zhang K，et al. Influence of psoriatic peripheral blood CD4+T and CD8+T lymphocytes on C-myc，Bcl-xL and Ki67 gene expression in keratinocytes[J]. Eur J Dermatol，2007，17（5）：392-396.

[14] Rani K，Isabella F，Theresa R，et al. Expression of cell cycle proteins in male breast carcinoma [J]. World J Surg Oncol，2010，（8）：10. [15] Nylandsted J，Brand K，Jaattela M. Heat shock protein 70 is required for the survival of cancer cells [J]. Ann N Y Acad Sci，2000，926：122-125.

[16] 游朝勇，冯一中.HSP70与恶性肿瘤关系的研究进展[J].实用癌症杂志，2012，27（1）：89-94.

（收稿日期：2013-02-18 本文编辑：郝明明）