热休克蛋白70,90在口腔鳞癌及癌前病变中的表达及意义

时间:2022-10-06 12:24:06

热休克蛋白70,90在口腔鳞癌及癌前病变中的表达及意义

作者:殷操,沈丽佳,谢思明,谢立群

【关键词】 热休克蛋白;HSP70;HSP90;口腔癌;口腔扁平苔藓

【Abstract】 AIM: To detect the expression of heat shock protein 70, 90 (HSP 70, HSP 90) in oral squamous cell carcinoma (OSCC) and oral precancerous lesions and investigate the roles of HSP 70 and HSP 90. METHODS: SABC immunohistochemical methods were used to detect the expressions of HSP 70 and HSP 90 in 42 cases of OSCC, 22 cases of oral lichen planus(OLP), 20 cases of oral leukoplakia and 10 cases of normal oral mucosa. RESULTS: The rate of the positive or high expression of HSP70 in OLP was 91% (20/22), which was remarkably higher than those of normal oral mucosa, oral leukoplakia and OSCC (P<0.05). The rates of positive or low expression of HSP90 in OLP and OSCC were 73%(16/22) and 70%(14/20), respectively, which was significantly higher than those of oral normal mucosa and oral leukoplakia(P<0.05). CONCLUSION: Both HSP70 and HSP90 may play a role in oral lichen planus. HSP90 may be related with the pathogenesis of OSCC.

【Keywords】 Heat shock protein; HSP70; HSP90; oral cancer; oral lichen planus

【摘要】 目的: 检测热休克蛋白70,90在口腔鳞癌及癌前病变中的表达情况,探讨其在口腔癌中的作用及其意义. 方法: 采用SABC法免疫组化方法检测42例口腔鳞癌、22例口腔扁平苔藓、20例口腔白斑、10例正常黏膜中HSP70,90蛋白表达的情况. 结果: HSP70在OLP组中主要以阳性和强阳性表达为主,占91%(20/22),明显高于正常黏膜、口腔白斑和口腔鳞癌组(P<0.05);HSP90在OLP, OSCC组中主要以弱阳性和阳性表达为主,分别占73%(16/22)和70%(14/20),明显高于正常组和口腔白斑组(P<0.05). 结论: HSP70,90在口腔扁平苔藓中均起着一定的作用;同时HSP90可能还参与口腔鳞癌的发生和发展过程.

【关键词】 热休克蛋白;HSP70;HSP90;口腔癌;口腔扁平苔藓

0引言

热休克蛋白(heat shock protein, HSP),是一类非常保守的蛋白质分子家族. 自从20世纪80年代确定HSP的序列和基因结构位点以来[1],很多研究发现,HSP在细胞保护、免疫应答、信号转导及调节凋亡等方面具有重要作用,还能诱导细胞毒T淋巴细胞活性,特异杀伤肿瘤细胞. 目前有关HSP在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)及癌前病变中的表达和作用的研究较少,为此,我们通过检测HSP70及HSP90在OSCC及其癌前病变中的表达,探讨HSP70,90在OSCC发生发展过程中的作用.

1材料和方法

1.1材料1999/2003年本院手术及活检标本94例(患者术前均未采用化疗、放疗),其中正常口腔黏膜(normal oral mucosa,NOM)10例,口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)22例,口腔白斑(oral leukoplakia,OLK)20例,OSCC共42例,按照其分化程度分为I级20例,II级12例,III级10例. 所有标本均经HE染色,并经口腔病理专家确诊. 鼠抗人HSP70 mAb(浓缩型)、鼠抗人HSP90 mAb(浓缩型)均购自DAKO公司,工作浓度分别为1∶300和1∶200. SABC法试剂盒及DAB显色液均购自DAKO公司.

1.2方法常规石蜡连续切片4 μm,常规脱蜡、梯度乙醇水化至水,微波修复,自然冷却至室温. 采用SABC法免疫组织化学染色,DAB显色3~5 min,苏木素复染5 min,盐酸乙醇分化数秒,流水返蓝15 min,梯度乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封片. 用TBS代替一抗作为空白对照,已知阳性片作阳性对照. 结果在光学显微镜下进行观察. HSP70阳性定位于胞质及胞膜,HSP90阳性定位于胞质,呈黄色或棕黄色颗粒. 采用双盲法统计实验结果. 随机选取10个高倍视野进行计数,计数阳性细胞所占的百分比,根据阳性细胞的比例分为以下四个等级:<5%为阴性(-),5%~25%为弱阳性(±),26%~75%为阳性(+),>75%为强阳性().

统计学分析: 采用SPSS12.0统计软件包进行统计,因各组指标均为等级资料,故其组间的比较采用非参数秩和检验Kruskal Wallis Test,检验水准取双侧α=0.05.

2结果

2.1HSP70的表达见表1. HSP70在口腔正常黏膜中以阳性表达为主,占70%(7/10),主要表达在基底层及棘层;在OLP组中主要以阳性和强阳性为主,占91%(20/22),主要表达在基底层及棘层,固有层淋巴细胞和血管内皮细胞也有阳性表达(图1A). 在OLK中以阳性和强阳性表达为主,占90%(18/20). OSCC组中则以弱阳性和阳性表达为主(图1B),占76%(32/42). 各组间经非参数秩和检验Kruskal Wallis Test, χ2=17.348,P=0.001<0.05,有统计学差异. NOM, OLK, OSCC三组间经非参数秩和检验,χ2=5.058,P=0.08>0.05,差异无统计学意义. 将这三组合并为非OLP组后与OLP组相比,χ2=12.948,P=0.000<0.05,有统计学意义,提示HSP70在OLP中表达上调. OSCC各级相比,χ2=0.006,P=0.997>0.05,差异无统计学意义.

2.2HSP90的表达见表1. HSP90在口腔正常黏膜中以阴性表达为主,占70%(7/10);在OLP组中主要以阳性和弱阳性为主,占73%(16/22). 在OLK组中主要以阴性和弱阳性表达为主(图1C),占70%(14/20). OSCC组中则以弱阳性和阳性表达为主(图1D),占62%(26/42). 各组间经非参数秩和检验Kruskal Wallis Test, χ2=11.233,P=0.011<0.05,有统计学差异. NOM与OLK相比,χ2=1.091,P=0.296>0.05,差异无统计学意义. OLP与OSCC相比,χ2=0.747,P=0.387>0.05,差异无统计学意义. 将OLP与OSCC合并成一组,NOM与OLK合并成另一组后相比,χ2=9.149, P=0.002<0.05,提示HSP90在OLP, OSCC组中表达上调. OSCC各级相比,χ2=7.066,P=0.029<0.05,以OSCC I级表达较低,提示HSP90与OSCC分化程度有关.

3讨论

生物细胞在受到各种理化因素刺激后发生应激反应,诱导HSP的合成. HSP广泛存在于原核和真核

A:扁平苔藓HSP70;B:口腔鳞癌 中HSP70阳性表达;C:口腔白斑HSP90弱阳性;D:口腔鳞癌HSP90阳性.

图1口腔病变组织HSP70,90的阳性表达SABC ×400

生物中,主要功能是在应激状态下保护细胞生命活动必需的蛋白质以维持细胞的生存. 目前认为HSP70,表1HSP70,90在OSCC及其癌前病变中的表达90与肿瘤的关系比较密切,有研究报道HSP70和90表达对癌细胞的生长、分化有重要作用[2],且其过表达与OSCC病理分化存在明显而稳定的关系[3]. 我们的研究表明HSP70在NOM, OLK及OSCC中的表达无统计学差异,提示HSP70在OSCC中可能不起作用. 但HSP70在OLP中表达上调,可在OLP上皮层连续着色或灶性着色,固有层浸润的淋巴细胞、血管内皮细胞也呈阳性表达,这可能是因为淋巴细胞的活化和浸润产生了大量的细胞因子,刺激HSP70的表达,从而对组织起着一定的保护作用. 邸萍等[4]的研究也表明HSP70的表达上调发生在OLP淋巴细胞浸润密集的周围区域,同时RTPCR的结果显示HSP70 mRNA在OLP中表达增强,提示HSP70在OLP的发生中起着重要的作用. HSP90家族是一类可溶性蛋白,能特异地与多种细胞功能蛋白结合而改变其功能状态. 已发现在其他肿瘤中HSP90与肿瘤的发生、发展、预后密切相关[5-6]. 我们的研究表明,HSP90在OLP中表达上调,提示在OLP中除了HSP70外,还可通过刺激HSP90的表达来参与应激反应,对机体起到一定的保护作用. 同时我们的研究还表明HSP90在OSCC中的表达上调,并且与OSCC的分化程度相关,在分化较低的癌细胞中表达上调,提示HSP90在OSCC的发生发展过程中起着一定的作用. 有研究表明HSP90能介导Src基因产物对底物的磷酸化,从而促进细胞的代谢和增殖,抑制肿瘤细胞的凋亡[7],促进肿瘤的发生.

综上所述,HSP70可能在OLP中发挥着重要的作用,而HSP90在OLP, OSCC中均起着一定的作用. 尚需进一步的研究来观察HSP90与OSCC患者预后、淋巴结转移之间的关系,为判断OSCC患者的预后提供一个可供参考的指标.

【参考文献】

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[2] 白晓霞,王文栋,陈亚琼. 子宫内膜热休克蛋白70和90表达与ER表达的关系[J]. 第四军医大学学报, 2002, 23(14): 1337-1340.

[3] Kaur J, Srivastava A,Ralhan R. Serem p53 antibodies in patients with oral lesions: Correlation with p53/HSP70 complexes[J]. Int J Cancer, 1997,74(6):609.

[4] 邸萍,高岩. 热休克蛋白60、70在口腔扁平苔藓中表达的研究[J]. 中华口腔医学杂志,2003,8(4):275-279.

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[6] 唐伟,李家兵. HSP70和HSP90α在人膀胱癌中的表达及意义[J]. 第三军医大学学报,2005,27(6):560-562.

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