热休克蛋白70在宫颈癌组织中的表达及意义

[摘要] 目的:探讨宫颈癌组织中热休克蛋白(heat shock protein,HSP)70的表达及HSP70与组织类型、组织分级之间的关系。方法:采用免疫组化SP法检测47例宫颈癌组织中HSP70的表达。结果:宫颈癌组织的HSP70阳性率高于正常组织,且低分化宫颈癌组织的阳性率高于高分化宫颈癌。结论:HSP70的过度表达可能与宫颈癌的发生、发展及预后有关。

[关键词] 宫颈癌;HSP70;免疫组化

[中图分类号] R737.33 [文献标识码]B[文章编号]1673-7210(2010)03(b)-161-02

热休克蛋白(heat shock protein,HSP)是一组进化上高度保守的蛋白质,机体细胞在热休克或受到其他外来刺激时诱导HSP产生,其在许多肿瘤中呈高表达[1-2]。本研究采用免疫组化SP法检测宫颈癌组织中HSP70的表达,从而探讨其与宫颈癌的关系。

1 对象与方法

1.1研究对象

选择2008年1月～2009年1月我院收治的47例宫颈癌患者,均接受手术治疗,留取手术切除标本。术前均未进行放、化疗。同时收集10例正常宫颈组织作为对照组。

1.2试剂

兔抗人HSP70多克隆抗体、SP免疫组化试剂盒及DAB显色剂均购自北京中杉生物技术有限公司。

1.3免疫组化SP法

切片经脱蜡、梯度酒精脱水后,自来水冲洗,蒸馏水冲洗3 min。3%甲醇-H2O2中室温孵育20 min,蒸馏水冲洗冲洗3 min,PBS冲洗5 min×2次。HSP70采用高压热修复。室温冷却,放入PBS内冲洗5 min×2次,用山羊血清封闭,37℃温箱内孵育45 min。滴加兔抗人HSP70抗体(一抗)按1∶100稀释,对照组用PBS,4℃过夜。PBS冲洗5 min×3次,滴加二抗工作液,37℃温箱内孵育30 min,PBS冲洗5 min×3次。滴加三抗工作液,37℃温箱内孵育30 min,PBS冲洗5 min×3次,DAB显色。苏木素复染,常规梯度酒精脱水,中性树胶封片,显微镜下观察。以已知阳性切片作阳性对照,PBS代替一抗作阴性对照。

1.4结果判定

阳性染色为胞质和(或)胞核中出现棕黄色颗粒。每张切片至少观察10个高倍视野,计数阳性细胞与肿瘤细胞的百分比:50%为(+++),(+)～(+++)为阳性。

1.5统计学方法

数据用SPSS 10.0软件进行分析,经确切概率法检验,P

2 结果

2.1 HSP70的表达

47例宫颈癌中HSP70阳性表达率为74.5%(35/47),10例正常宫颈组织中HSP70阳性表达率为20.0%(2/10),经确切概率法检验,差异有高度统计学意义(P

2.2 HSP70与组织分级的关系

47例宫颈癌包括高分化10例,中分化21例,低分化16例,其阳性率见表1。结果显示,宫颈癌分化程度越低,HSP70的表达越强。

表1 宫颈癌HSP70阳性率与组织分级的关系[n(%)]

2.3 HSP70与宫颈癌组织学类型的关系

宫颈癌组织分型及HSP70阳性率见表2。经统计学分析,差异无统计学意义(P>0.05)。

表2 宫颈癌HSP70阳性率与组织学类型的关系[n(%)]

3讨论

HSP广泛存在于原核和真核生物,在生理条件下,HSP呈基础表达,调控细胞的增殖与分化、胚胎的生长发育、激素的功能效应等。HSP能调节蛋白质的折叠、传递与降解,在维持组织细胞的自身稳定和环境适应性方面也有重要作用。在有害因素如热、冷、缺血、低氧、有机毒物、重金属、微生物、组织创伤、基因损伤等的刺激下,均可诱导HSP产生,并保护细胞对抗热休克和其他导致大量蛋白质损伤、变性的有害刺激,防止应激所致的蛋白质损伤,进而启动内源性保护机制,发挥抗损伤的应激保护效应。大量研究显示,表达HSP的肿瘤细胞对热休克、射线(如γ射线)、TNF-α等多种刺激诱导的凋亡有抑制作用。肿瘤细胞HSP70表达水平一般较高,赵霞等[3]用HSP70反义寡聚核苷酸阻断Molt-4等肿瘤细胞的内源性HSP70表达,结果发现,HSP70反义寡聚核苷酸的使用可以诱导肿瘤细胞凋亡,同时抑制肿瘤细胞增殖,提示HSP70的表达有助于肿瘤细胞的生存和增殖。

本研究发现,宫颈癌组织HSP70的阳性表达率为74.5%,正常宫颈组织HSP70的阳性表达率为20.0%,与郭云鸿等[4]的报道一致。本研究结果显示,HSP70的表达与宫颈癌细胞的分化程度和组织类型没有明显的相关性,但可以看出,高、中、低分化各自的阳性率差别很大,细胞分化程度越低,HSP70的表达越强,推测HSP70的表达可能与患者的预后有关,HSP70表达越强,患者预后越差。由此可以推断,HSP70的表达可能与宫颈癌的发生、发展及预后有关,检测其表达水平有望作为估计患者预后的指标之一。

[参考文献]

[1]Jones EL, Zhao MJ, Stevenson MA, et al. The 70 kilodalton heat shock protein is an inhibitor of apoptosis in prostate cancer [J]. Int J Hyperthermia,2004,20(8):835-849.

[2]Wang XP, Qiu FR, Liu GZ, et al. Correlation between clinicopathology and expression of heat shock protein 70 and glucose-regulated protein 94 in human colonic adenocarcinoma [J]. World J Gastroenterol,2005,11(7):1056-1059.

[3]赵霞,魏于全,彭芝兰.HSP70反义寡聚核苷酸诱导卵巢癌细胞凋亡[J].中华医学遗传学杂志,2000,17(1):32-35.

[4]郭云鸿,田晓予,米建强.宫颈鳞癌组织中HSP70和Bcl-2的表达及意义[J].山东医药,2006,46(24):11-12.

(收稿日期:2009-06-30)