中药绞股蓝提取液对抗小鼠皮肤衰老的实验研究

[摘要]目的:研究中药绞股蓝提取液对老龄小鼠皮肤组织的影响，判断绞股蓝提取液在减轻小鼠皮肤自然老化方面的作用。方法：为健康昆明种老龄小鼠灌胃给药绞股蓝提取液，30天后观察小鼠皮肤组织超微结构改变，并以生化分析方法测定H2O2含量及SOD活性。结果:给药绞股蓝后，小鼠皮肤组织中SOD活性明显增强，H2O2含量降低，同时病理切片示其皮肤衰老状态有所改善。结论:绞股蓝提取液有改善老龄小鼠皮肤衰老的作用。

[关键词]绞股蓝；皮肤；延缓衰老；超氧化物歧化酶；过氧化氢

[中图分类号]R758.42[文献标识码]A[文章编号]1008-6455（2008）06-0905-03

The Chinese native medicine G.Pentaphyllum extraction resistancemouse skin senile experimental study

YIN Ying，WU Jing-dong，GU Wei

(Department of Cosmetic,Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Shenyang110032，Liaoning，china）

Abstract： ObjectiveChinese Gynostemma gavage study on aging mice extract skin tissue hydrogen peroxide (H2O2) content, superoxide dismutase (SOD) activity, and the ultrastructure of mouse skin，Judge Gynostemma extract of mouse skin in reducing the role of natural aging. Methods Kunming with healthy aging mice as subjects, administration Gynostemma extract, 30 days after the skin of mice ultrastructural changes, and biochemical analysis of H2O2 content and the activity of SOD. ResultsAdministration Gynostemma, mouse skin tissue SOD activity was significantly enhanced, H2O2 content decreased significantly, while pathological aging skin biopsy revealed that its state has improved. Conclusions Gynostemma extract to improve aging skin aging mice role.

Key words：G.Pentaphyllum；skin；delay growing old；superoxide dismutase；perhydrol

皮肤衰老是因增龄所出现的皮肤老化外貌，临床上常表现为皮肤干燥、粗糙、脱屑增多，敏感性和脆性增加；皮肤松弛、皱纹增多，皮肤萎缩、血管突显等[1]。随着生活品质的提高，人们越来越注重外表美,预防和延缓皮肤衰老已成为生命科学研究的热点之一[2]。现代药理研究证明中药绞股蓝具有抗衰老、提高机体清除自由基能力、降低机体自由基含量等作用，而绞股蓝作为一种抗衰老的中药至今没有其抗皮肤自然衰老方面的报道，因此，我们采用中药绞股蓝提取液对抗小鼠皮肤衰老做了实验研究，现将结果报道如下。

1材料和方法

1.1实验动物：健康3月龄小鼠10只，体重29～31g，作为青年对照组；12月龄小鼠30只,体重48～53g，随机平均分为三组：老年空白对照组、老年阳性药对照组、老年给药组。所有实验用鼠均为雌性昆明种小鼠，由辽宁中医药大学实验动物中心提供。

1.2实验药物：8%硫化钠溶液，医用生理盐水，维生素E，绞股蓝提取液（自行配制）。

1.3实验方法：青年对照组灌胃生理盐水，老年空白对照组灌胃生理盐水，老年阳性药对照组灌胃维生素E，老年给药组灌胃绞股蓝提取液。以上操作每天2次，实验共计30天。第31天将所有实验用鼠用8%硫化钠溶液进行背部脱毛（面积为3cm×3cm）并取下背部脱毛处的全层皮肤（不含皮下脂肪）待行指标测定。

1.4指标测定：皮肤组织SOD活性的测定采用黄嘌呤氧化酶法，皮肤组织H2O2含量的测定采用化学比色法。病理标本光镜下观察结构变化，高级系统生物显微镜下摄片。所用仪器为系统生物显微镜OLYMPUS BX50F4北航病理图像分析系统。 1.5统计学处理：所有数据均通过SPSS11.5 软件进行处理，各组实验参数以x±s表示。组间差异按方差分析进行显著性检验，并用最小显著差法（LSD法）作两两比较。

2结果

2.1皮肤组织中SOD活性及H2O2含量测定：老年阳性对照组、老年给药绞股蓝组的SOD活性均明显高于老年空白对照组，且均有统计学意义（分别是P

2.2皮肤组织形态学检查结果显示：在光镜（×100）下观察小鼠皮肤的病理学改变，正常青年对照组（见图1），小鼠表皮组织结构完整，细胞分层清晰，皮肤厚度正常，具有明显的表皮突及真皮；真皮层可见波浪状纤维组织,排列有序、分布均匀，疏密有致，细胞成分及数量适中。老年空白对照组（见图2），小鼠的表皮组织变薄，结构不完整，分层不清，表皮与真皮交界呈直线状，表皮突及真皮消失；纤维组织因发生变性、破坏可见真皮组织排列紊乱，分布不均，或稀疏，有较多的炎性细胞浸润。老年阳性对照组（见图3）、老年给药组（见图4）、小鼠皮肤组织形态比较相近，表皮组织结构比较完整，细胞分层比较清晰，皮肤厚薄不甚均一，有表皮突及真皮；真皮层可见波浪状纤维组织,排列有序，分布较为均匀，细胞及数量适中，有少量炎性细胞浸润。说明维生素E、绞股蓝提取液均能改善自然衰老小鼠皮肤组织的受损程度。

3讨论

皮肤老化由内源性和外源性多种因素引起，是一个相当复杂的过程[3]。从现代研究来看，与皮肤衰老密切关联的有衰老的自由基学说，测定皮肤衰老较常见的且可说明问题的指标也多从这个方面选取[4]。自由基性质活泼，极不稳定，容易与其他物质进行氧化反应，生物氧化过程的产物之一有H2O2。H2O2可以氧化某些具有重要生理作用含巯基的酶和蛋白质，使之丧失活性，还可将细胞膜磷脂分子中高度不饱和脂肪酸氧化成过氧化物，产生过氧化脂质，后者又通过自身催化作用连续生成大量过氧化物，结果使磷脂的功能障碍，对生物膜造成严重损伤。健康机体同时还存在着强大的防护机制对抗自由基的损伤：一方面是对已损伤大分子修复机制，如谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）可随时使氧化变性的大分子还原恢复其功能；另一方面是清除机制，如体内维生素E、过氧化氢酶（CAT）是过氧化物的清除剂，尤其是超氧化物歧化酶（SOD），是最有效的抗氧化剂和自由基清除剂。根据自由基学说，本项研究通过测定绞股蓝对自然衰老小鼠皮肤中SOD活性及H2O2含量的影响，来推断及探讨绞股蓝抗皮肤衰老的作用及其具体的生物学机理。

自然老化皮肤组织学上也出现了一些改变：①表皮厚度变薄，表皮突变浅，表皮与真皮连接变平坦、松弛；②真皮中胶原纤维、弹性纤维数量减少、排列不规则，且常断裂成碎片；③皮肤附属器：汗腺数目减少且分泌功能减退，汗腺内脂褐质沉积增多。皮脂腺数量有所增加但分泌量减少。甲板变薄变脆，无光泽。颜面和头发的毛囊分布密度下降，毛发脱落和脱色，一般来说毛干的直径变细（终毛转化为毳毛），但是在某些部位如男性的耳朵、鼻子和眉毛以及女性的上唇和下颌的毳毛转变为影响美容的终毛；④皮肤血管变细，神经末梢异常；⑤皮下脂肪层变薄。同时，配合光镜下观察实验小鼠皮肤组织超微结构更直观的证实实验结论[5]。

中药绞股蓝（Fiveleaf Gynostemma Herb）为葫芦科植物绞股蓝的全草，为葫芦科绞股蓝属多年生草质藤本植物。其药性属于平性偏温，归肺、脾、肾经。功用主要包括：益气健脾、补肾温阳、延缓衰老、抗疲劳、养心安神、滋补强壮、解毒等[6]。现代大量药理实验及临床研究表明，绞股蓝具有延缓衰老、抗疲劳、抗溃疡、抗肿瘤、抗突变、抗诱变、增强机体免疫力、保护并提高机体抗氧化及自由基清除能力、降低自由基含量、降血脂、改善血流动力学、抗血栓形成、并具有雄性和雌性激素样作用。它富含人体所需的多种氨基酸、维生素和微量元素，有与人参相同和高于人参的高级营养成分，但目前尚没有关于绞股蓝延缓自然衰老的具体研究，本实验就是检测绞股蓝在延缓皮肤自然老化方面的作用。

本实验使皮肤衰老的自由基损伤学说进一步得到验证：皮肤呈现老化以及皮肤的生物学功能的减退，与增龄引起的自由基产生过多，抗氧化酶活性降低密切相关。从而证实了通过减少自由基的产生和清除皮肤老化代谢产物，提高抗氧化酶活性确实是目前预防和治疗皮肤老化的方法之一。其次，从本次实验的结果来看，绞股蓝对提高老龄小鼠皮肤中SOD的活性、降低皮肤中H2O2含量具有明显的影响，这说明绞股蓝可能通过两种途径（一是通过提高SOD活性来起作用，一是其自身具有一定的抗氧化能力）达到清除自由基并减少自由基产生的目的，从而减少自由基对皮肤中各种大分子的影响。

[参考文献]

[1]丁克祥.老年人皮肤生物学年龄的标志及其评价[J].国外医学老年医学分册，1999,20（3）：131-134.

[2]王红丽，吴 铁.皮肤衰老分子生物学机制的研究进展[J].国外医学皮肤性病学分册.2003,13（3）：114-117.

[3]冯燕艳,普雄明.皮肤自然衰老与光老化[J].国外医学皮肤性病学分册,2004,30(6):354-356.

[4]周鸿波.皮肤老化及其免疫学、自由基损伤学说的研究进展[J]. 辽宁中医杂志,2004,3（3）：123.

[5]刘承煌.皮肤病理生理学[M].北京：中国医药科技出版社，1991:378-383.

[6]李仪儒,李立娜.绞股蓝的综合研究[J].天津药学,1998,10(3):8-10.

[收稿日期]2008-03-26 [修回日期]2008-06-06