液相色谱―质谱法测定塑料杯中双份A的不确定度

1.分析方法和测量步骤

1.1 提取步骤

将食品罐头用低温液氮粉碎仪粉碎至颗粒1mm以下，称取约0.5g样品（精确至0.1mg）于100mL锥形瓶中，加入30mL甲醇，超声提取60min，取上清液于50mL容量瓶中，用甲醇定容，取1mL进样分析。

1.2 仪器条件：

样品使用Agilent 1200-6400 QQQ液相色谱-质谱联用仪测量，色谱柱为ZORBAX Eclipse XDB-C18反向色谱柱，100×3mm，粒径为1.8μm.流动相采用甲醇和纯水，梯度洗脱，梯度如下式（1）所示：

进样体积为5μL，流速为0.4mL/min，柱温为35℃。

采用电喷雾（ESI）离子源，负离子模式检测，喷雾毛细管电压为4000V，去溶剂气压力为50psi，温度为350℃，流量为10L/min，选择反应检测（SRM）模式扫描，定量离子强度定量。

1.2.1 定量方法

采用外标法定量，配制一系列浓度为5μg/L、10μg/L、20μg/L、50μg/L、100μg/L的BPA标准工作溶液，按分析方法测量定量离子的峰面积，绘制标准曲线，外标法定量。经过7次平行测试，样品中BPA的含量分别为：μg/kg。

2.计算公式和数学模型

样品中的BPA含量可采取下式计算：

其中，

X――样品中BPA的含量，μg/kg；

C――样品定容后溶液的浓度，μg/L；

V――样品定容体积，mL；

m――称取的样品质量，g；

d――稀释因子（不稀释时可忽略）；

3. 不确定度的分量来源分析和计算

根据数学模型，LC-MS/MS测量BPA含量的不确定度来源于以下因素：

（1）标准曲线产生的不确定度u1；

（2）标准溶液产生的不确定度u2；

（3）样品定容产生的不确定度u3；

（4）样品称量产生的不确定度u4；

（5）测量重复性产生的不确定度u5；

现对以上因素计算如下：

3.1标准曲线产生的不确定度u1

标准曲线取5个浓度点，每个浓度点重复进样3次，结果如表1所示：

平均浓度 （μg/L）：（m为标准溶液浓度水平的个数）

峰面积平均值：（n为每个标准溶液浓度水平的个数）

由此，可得到

用最小二乘法拟合线性方程，得到：

A=-1762.81+910.33C ，相关系数r=0.9997

对C20.0进行2次重复测量，由标准曲线得到2个数据点为：19.11μg/L和19.06μg/L，求得C20.0=19.09μg/L。

根据标准不确定度的计算公式：

式中：

p――重复测量的次数（p=2）；

m×n――标准曲线溶液的测量次数（m×n=15）；

――标准曲线中BPA浓度的平均值，μg/L；

SR――标准曲线的标准差。

带入，可得到：

μg/L

因此，标准曲线产生的相对标准不确定度为：

3.2 标准溶液产生的不确定度u2

浓度为200mg/L的贮备溶液，用200μL

移液枪准确移取100μL该溶液，定容至10mL，得到的溶液浓度为2mg/L，再用200μL移液枪分别移取25、50、100、250、500μL定容至10mL，得到系列标准溶液，在这个过程中，影响不确定度的分量分别为：

3.2.1 移取贮备溶液的不确定度

将浓度为200mg/L的贮备溶液稀释至2mg/L，需用到一支量程为20-200μL的移液枪，根据证书，其相对标准不确定度为0.14%，因此移取100μL溶液产生的相对标准不确定度为0.0007。定容至10mL需要用到10mL的容量瓶，由校准证书知实验室用容量瓶为A级，容量允差为±0.02mL，此不确定度属于B类，取三角分布可得对应的相对标准不确定度：

定容过程中还应考虑稀释重复性带来的相对标准不确定度，稀释的重复性标准差约为0.01mL，按照均匀分布，相对标准不确定度为。

因此由贮备溶液稀释带来的相对标准不确定度为

3.2.3 配制系列标准溶液的不确定度

配制系列标准溶液时，需要用量程为20-200μL的移液枪移取上述溶液，根据证书，这支移液枪的相对标准不确定度为0.14%，因此移取25、50、100、250、500μL溶液所产生的相对标准不确定度分别为：0.00018、0.00035、0.0007、0.00175、0.0035，按照均方根计算标准溶液体积误差引起的溶液浓度的相对标准不确定度为：

同样，配制系列标准溶液也需定容至10mL，其容量允差为±0.02mL，因此由容量瓶引入的相对标准不确定度：

而稀释的重复性标准差为0.01mL，按照均匀分布，相对标准不确定度为：。

因此配制系列标准溶液引入的相对标准不确定度为：

3.2.3 标准溶液产生的相对标准不确定度为：

3.3 样品定容产生的不确定度u3

样品溶液体积的不确定度由体积误差和稀释重复性构成，定容需要用到50mL容量瓶，其允差为±0.05mL，此不确定度属于B类，取三角分布可得其相对标准不确定度为：

mL

稀释的重复性偏差约为0.03mL，按照均匀分布，相对标准不确定度为：

因此样品定容产生的相对标准不确定度为：

3.4 样品称量产生的不确定度u4；

称取0.5000g样品，天平的最小刻度为0.1mg，按照均匀分布，标准不确定度为g，相对不确定度为：

3.5测量重复性的不确定度u5

称取7个平行样品，根据上述实验步骤和检测步骤，最终检出的BPA浓度分别为：1898.1、1809.2、1810.0、1803.3、1753.3、1794.5、1810.7μg/kg，平均值为：

μg/kg

其中，n为重复测量次数（n=7）。

因此计算可得标准偏差为：

μg/kg

因此，平均值的标准不确定度为：

μg/kg

3.6 相对标准不确定度分量汇总表

3.7 合成标准不确定度

以上分析中，各因素互不相关，因此按照方和根计算合成不确定度：

因此，用液相色谱-质谱法测定水管中的BPA含量的标准不确定度为：

μg/kg

3.8 扩展不确定度的评定

取包含因子k=2，得到扩展不确定度为：

μg/kg

4 分析报告

用液相色谱-质谱法测定食品罐头中的BPA含量，样品中BPA的含量为μg/kg