血细胞范文
时间：2023-09-26 03:38:37
血细胞篇1
[中图分类号] R551 [文献标识码]C[文章编号]1673-7210（2007）06（a）-087-01
1 病例资料
女性，56岁，因反复发热2年余入院。2年前无明显诱因出现发热、纳差，不规则热，体温最高40℃左右，在当地多家医院先后诊断为 “浅表性萎缩性胃炎”“胆系感染”“结核感染”“支原体肺炎”，抗感染、抗痨治疗均无明显效果。曾应用激素治疗，治疗过程中和治疗后体温共正常6个月，停用激素后再次出现发热。诊治过程中曾出现颜面部皮疹，颈部淋巴结肿大，CT检查发现纵隔淋巴结肿大。既往有慢性乙肝（小三阳）病史21年。
入院时查体：皮肤、巩膜无黄染，无皮疹、出血点，左侧下颌下角可触及一黄豆大小淋巴结，活动度好；双侧腹股沟可触及多个枣核大小淋巴结，部分淋巴结融合，质硬、移动度差。双侧腋窝未及肿大淋巴结。胸廓无畸形，双肺呼吸音粗，双肺可及干鸣音，未及湿音。心、腹未查及异常。院外胸部CT：纵隔内多个肿大淋巴结；化验抗核抗体、抗双链DNA抗体均为阴性 ；Tb-PCR阴性；布鲁杆菌抗体阴性；乙肝五项：小三阳。入院后实验室化验：血常规：WBC 7.7×109，GR 67%，RBC 3.3×1012，Hb 87 g/L；血沉58 mm/h；生化系列中： ALT 55 U/L、AST 137.6 U/L、LDH 809 U/L、α羟丁酸脱氢酶767.2 U/L，血清白蛋白27.98 g/L，K+3.37 mmol/L ，余项基本正常；血凝系列凝血酶原时间延长至16.6 s，INR增至1.53；抗核抗体谱：阴性； β2微球蛋白6.26 μg/ml。
入院后取右侧腹股沟淋巴结活检，病理回报结果：腹股沟淋巴结结构尚存，淋巴窦可见上皮样及单核样细胞，副皮质区及髓索可见大量浆细胞及免疫母细胞及单核样细胞，结合部位考虑感染引起的淋巴结反应性增生。建议结合临床。在此期间患者出现左侧颈部多枚淋巴结肿大，再次取颈部淋巴结活检，经北大医院、首都儿研所病理科会诊确定左颈部淋巴结活检病理：血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤。免疫组化结果：①CD3（+++）；②CD45RO（++），CD43（++），CD20（+），CD79a（+）,CD30（+）。确诊后予CHOP方案化疗，患者体温正常后，继续回当地医院治疗。
2 讨论
血管免疫母细胞性T 细胞淋巴瘤(angioimmunoblastic Tcell lymphoma，AITL) 为侵袭性T 细胞淋巴瘤的一种,为中高度恶性，最初被认为是一种非肿瘤性的淋巴结反应性增生性疾病而被命名为“血管免疫母细胞性淋巴结病”(angioimmunoblastic lymphadenopathy , AILD)。随着研究的进展，目前认为AILD 就是恶性淋巴瘤成为主流观点，REAL 分类将之归类为AILD-TCL[1]，但对于AILD病变性质的争论一直都未停止。
AILD的病因及发病机制尚无定论，可能与药物过敏、自身免疫功能异常、病毒感染有关。AITL为一种少见病，主要发生于中老年人,儿童少见，其临床表现包括：发热占97%，为持张热、间歇热或不规则热型，抗菌治疗无效。皮肤瘙痒和皮疹占74%，多为斑丘疹和荨麻疹，皮疹多反复出现。无痛性淋巴结肿大占70%～100%，多为全身淋巴结受累[2]。此外肝脾肿大也较常见。AITL患者多存在血液学检查异常，包括贫血、嗜酸粒细胞增多、多克隆免疫球蛋白血症以及类风湿因子、抗核抗体阳性等，但上述异常均无特异性。AITL确诊有赖于淋巴结活检病理检查，其病理组织学呈“三联征”：淋巴结正常结构破坏,生发中心消失,免疫母细胞和浆细胞增生；树枝状血管显著增生；间质中有嗜酸性物质沉积[3]。
目前AILD的治疗方法不令人满意,总的来说方法各异，疗效不一。有资料提示应用化疗的病人预后明显优于支持治疗者[3]。也有部分作者主张首选支持疗法并用糖皮质激素，此外也有用左旋米唑、血浆置换和大剂量甲基强的松的治疗报道。AITL患者预后差于其他类型淋巴瘤，中位生存期仅为8～9个月,多数患者经治疗后可获短期缓解，但复发率高且继续治疗无效，多数患者随病情进行性发展，因反复感染和全身衰竭死亡。
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（收稿日期：2007-04-03）
血细胞篇2
一、内皮损伤、血栓形成与再狭窄
PTA可造成血管损伤，内皮的剥脱造成内皮下组织的暴露,血小板立即通过VonWillebrand因子（VWF）黏附于内皮下的基质,随后发生聚集并释放α颗粒成分,其释放的血小板衍生生长因子(PDGF)可能与中膜平滑肌细胞的激活和迁移有关［1］。最近的研究表明血小板减少可抑制已激活的平滑肌细胞从中膜向内膜迁移。由内皮损伤引发的凝血过程将形成附壁血栓,血栓的形成不仅可造成血管的急性闭塞,而且为平滑肌细胞内迁提供了框架,血栓的机化可直接引起内膜增厚,而且血栓中的凝血酶本身就是强力的平滑肌细胞致分裂原［2］。实验证明损伤部位内皮的早期重建可抑制血小板附着和血栓形成［3］。
二、内皮细胞和内膜增厚
血管损伤后出现的组织愈合反应可造成不同程度的内膜增厚,其中包括3种主要成分:平滑肌细胞、内皮细胞及细胞外基质。损伤后30分钟就可以检测到平滑肌细胞早期激活的标记——核原癌基因的表达［4］,活化的平滑肌细胞从收缩表型转向合成表型，从而引发平滑肌细胞的增生迁移和基质的合成。平滑肌细胞增生后向内膜迁移，迁移到内膜的平滑肌细胞部分继续增生。有作者认为平滑肌细胞的增生和分裂是两个不同的机制［5］，一些因素只影响其中一个而不影响另一个，PDGF是平滑肌细胞向内膜迁移强力的趋化因子，成纤维细胞生长因子b（bFGF）则是平滑肌细胞的致分裂原。平滑肌细胞要穿过细胞外基质和弹力层才能到达内膜，其迁移过程与纤维蛋白溶解酶原激活物及金属蛋白酶（MMP）的增加有关。
三、内皮细胞与血管重构
四、内皮细胞损伤、修复及功能异常
五、加快重内皮化、促进内皮细胞功能恢复
蛋白激酶C（PKC）是广泛存在于细胞内的信号传递物质，是内皮细胞增殖所必需的,用12-豆蔻酸-13-乙酸佛波酯直接活化内皮细胞PKC，发现内皮细胞黏附、伸展及移行能力均增强，而用PKC抑制剂则降低了内皮细胞的再生能力，可见PKC激活剂可作为促进重内皮化的一种方法。
六、金属内支架和血管内皮化
金属内支架的应用大大减低了PTA术后的急性动脉闭塞，其形态稳定性限制了血管的回缩，从而防止了不利的血管重构，但金属内支架本身具致凝性，置入血管后需长期抗凝治疗，而且内支架置入并未彻底解决再狭窄的问题，目前认为PTA术后再狭窄是内膜增生和血管重构双重作用的结果，而内支架置入后再狭窄则主要由内膜增生引起［26］。为阻止内膜增厚，许多学者用带有涤纶被膜的内支紲进行实验研究和临床探索，但一直没有肯定的结果，Schurmann等［27］的实验研究发现，与普通支架相比，被膜式支架引起了更严重的内膜增生和炎症反应；Maynar等［28］的一组股动脉临床资料也表明被膜式支架的通畅率并不理想。支架置入部位的早期内皮化可能预防血栓形成和再狭窄。加速支架内皮化的方法目前主要有两种,一是支架置入后局部灌注药物或导入基因,常用的是VEGF；另一方法是支架置入前在体外先种上内皮细胞［29-31］，可选用转基因内皮细胞进行种植［30，31］，此法最大的障碍是支架置入过程中内皮细胞的丢失［30，31］，但支架金属丝侧面往往有内皮细胞残留，这些细胞可重新增殖并覆盖支架［15,31］。
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血细胞篇3
内皮祖细胞(endothelial progenitor cells，EPCs)EPCs是一种起源于骨髓的原始细胞，类似于胚胎期的成血管细胞(angioblast)。在生理或病理因素作用下，骨髓中的EPCs进入外周血循环，并且在一定条件下可定向分化为成熟的内皮细胞。新近，有研究证实循环内皮祖细胞的数量和功能与心血管危险因素及动脉粥样硬化(artherosclerosis，AS)高度相关[1]，并且可以作为危险分层的标志。高血压病是重要的心血管疾病的危险因素，可导致动脉粥样硬化。作者就高血压病与EPCs关系作一综述。
1 EPCs与血管内皮
血管内皮细胞(vascular endothelial cell，VEC)是一层连续覆盖整个血管腔表面的扁平细胞，内衬于血管内壁上，为血流提供光滑的表面，维持血液的正常流动。VEC起屏障作用，还具有重要的内分泌功能，参与血管损伤后的修复和免疫反应，是体内最大的内分泌和旁分泌器官。血管内皮的完整对维持血管内皮的正常功能具有重要作用。大量研究证实，血管内皮功能障碍与多种心血管疾病密切相关。
EPCs可以表达早期造血干细胞的标志CD34、CD133和血管内皮生长因子受体-2（VEGFR-2，即KDR）3种细胞表面标志物。EPCs分化的细胞可以显示经典的内皮细胞的形态和特征，例如表达血管性血友病因子和血管内皮钙黏蛋白、能够摄取乙酰化低密度脂蛋白。EPCs由CD34+/KDR+细胞分化为CD34low/KDR+/CD14+细胞，直至成为具有更多成熟内皮表型的细胞。动物模型和人体试验都表明EPCs可以促进新生血管的形成和已损伤内皮的再内皮化，在内皮的维持与修复中发挥重要作用。
粒-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、干细胞因子（SCF）、血管内皮生长因子（VEGF）和血管生长素-1（Ang-1）等细胞因子的释放可促进EPCs动员入循环血。VEGF是最有效的促进EPCs动员的细胞因子之一。小鼠经腹腔注射可溶性VEGF10μg，每天1次，连续1周，与对照组相比，外周血液中EPCs在治疗第1天增加了254％，在治疗第4天达峰值，EPC增加了375％，到治疗第14天仍增加了214％[2]。在人体中，血管损伤和心肌梗死所致的组织缺血引起循环中VEGF增高，同样与外周血EPCs数量增加有关。VEGF等动员因子诱导的基质金属蛋白酶-9（MMP-9）活化促进膜结合Kit配体向可溶性配体转化，随后干细胞和祖细胞移动到骨髓微环境的血管区，进而细胞由静止到增殖、分化进而释放入外周血。
多种心血管危险因素能导致血管内皮受损，可以出现VEC的凋亡与脱落。随之发生巨噬细胞黏附和侵入、平滑肌细胞的迁移和增殖，最终引起靶血管的狭窄。内皮功能障碍本质是内皮损伤和修复之间动态平衡的破坏。已损伤内皮细胞的再内皮化可有效减少平滑肌细胞的增殖和新内膜形成内皮。损伤后的修复过程除了原先存在的邻近成熟内皮细胞的出芽或迁移外，受损的内皮层可由循环EPCs再生，EPCs促进再内皮化，延缓动脉粥样硬化形成。Zhao等[3]发现颈动脉损伤鼠经EPC移植1周后，再内皮化程度高于对照组，3周后新内膜的生成少于对照组。动物实验和临床研究均证实，新生血管中25%的内皮细胞是由EPCs分化而来的，血管修复部分依赖于循环血中的内皮祖细胞在损伤部位的黏附、聚集、增殖、分化形成新的血管内皮[4]。
2 EPCs与高血压
高血压病是重要的心血管病危险因素，可造成心、脑、肾及周围血管内皮损害，导致动脉粥样硬化。已有研究表明高血压与内皮功能障碍关系密切，高血压可导致内皮损伤，引起内皮功能障碍、血管壁重塑，这种血管重塑过程使得外周阻力升高，对VEC的损伤也进一步加重，构成恶性循环。现有研究已发现具有心血管病的危险因素，如高胆固醇血症、吸烟、1型和2型糖尿病的患者存在EPCs数量减少和功能障碍。根据受试者的Framingham风险评分，EPCs的数目和心血管病的危险因素成负相关，循环EPCs减少的水平可以预测未来心血管事件的发生[5]。EPCs可维持内皮的完整和抑制内皮的激活，这种生物学作用可能在高血压引起的靶器官损害和并发症的发生、发展过程中起关键作用，甚至有可能涉及高血压本身的发病过程。
2.1 EPCs与微血管
阻力小动脉直径的减小、微小动脉及毛细血管密度的减小可导致外周阻力增高，与高血压的发生发展密切相关。高血压患者的微血管减少与舒张压的升高密切相关，可能继发于外周阻力的增加。自发性高血压大鼠微血管的减少可以出现在高血压状态以前。同样，在有高血压病家族史或临界高血压的人中也可以发现微血管的减少。有研究显示已受损的血管内皮再生减少引起的血管生长受损导致了微血管的减少。尽管微血管的减少作为高血压发病的起始因素还有争议，但是它与实验或临床性高血压有关，外周阻力增加将使高血压和高血压引起的靶器官损害加重是可以明确的。而EPCs可以通过归巢、融合形成新的毛细血管，提高毛细血管密度，促进血流恢复。利用体外扩增的人EPCs可明显促进缺血裸鼠毛细血管密度的增加，在鼠后肢缺血模型上进行自体骨髓细胞移植，也能促进侧支血管形成。分离后的人外周血内皮祖细胞，体外扩增4周后注射进心肌梗死模型鼠，结果显示心肌梗死面积减少，心肌毛细血管密度明显增加[6]。
2.2 EPCs与动脉弹性
动脉弹性下降是老年性高血压的发病机制之一。研究[7]显示增龄导致EPCs数目进行性减少和动脉弹性下降，并且EPCs数量的变化与动脉弹性的改变呈正相关。EPCs参与内皮修复和内皮功能的调节，动脉弹性受内源性一氧化氮生成的影响。这一结果提示循环EPCs减少导致内皮细胞修复能力下降和功能受损，可能是增龄导致动脉弹性减低的原因之一。
2.3 EPCs与一氧化氮利用障碍
内皮源性血管舒张因子一氧化氮利用障碍与高血压密切相关。鼠内皮一氧化氮合酶的缺乏可以导致基质金属蛋白酶上调受阻及EPCs动员入外周血减少[8]。这提示EPCs的募集可因一氧化氮合成的减少而减少。相反，能够改善内皮功能和一氧化氮利用的因素，如他汀类药物、促红细胞生成素和雌激素可以促进EPCs的动员。Masaaki等[9]研究发现经缺血预适应后鼠的EPCs能迅速募集到缺血心肌，并且EPCs能提供大量的一氧化氮合酶，这是缺血预适应的保护机制之一。
2.4 EPCs与高血压并发症、预后
高血压引起的血流动力学变化可使动脉内皮细胞间的连续性中断，内皮细胞回缩，从而暴露内膜下组织，启动凝血及纤溶机制，机体处于高凝状态，与高血压的并发症（血栓形成、动脉粥样硬化等）及预后关系密切。EPCs可以修复已损伤内皮，促进再内皮化。EPCs数目的增加与再内皮化的加速有关，并且可以抑制内膜增生和动脉损伤。循环内皮祖细胞减少的水平可独立地预测动脉粥样硬化疾病的进程，并且在影响冠心病临床进程的内源性血管修复中发挥重要作用[10]。与心血管疾病相似，EPCs数量减少在脑血管疾病的病理生理中也有重要作用。可以推测，EPCs与高血压的并发症及预后有密切的关系。
2.5 EPCs功能障碍与高血压
Hill等[1]发现，健康志愿者动脉血压与EPC的数量及增殖能力呈负相关。还有研究发现，高血压可独立地预测EPCs的迁移功能障碍[11]。Imanishi等[12]发现无论是自发性高血压大鼠和盐敏感性高血压大鼠还是高血压病人，高血压加速EPCs的衰老，这可能和端粒酶这一能延缓细胞衰老的重要酶失活有关。EPCs加速衰老可能影响已受损血管修复的过程。Werne等[13]进行了有507例冠心病患者参加的CD34+/KDR+细胞数量对心血管事件预测价值的研究，在伴有高血压的432例冠心病患者的亚组分析中发现高血压与CD34+/KDR+细胞数量之间呈负相关。Fadini等[14]发现CD34+细胞的水平与收缩压有关，与舒张压无关。尽管目前的研究不足以形成定论，但这些结果提示，高血压患者存在的EPCs功能障碍可能加重靶器官的损害。
尽管关于高血压中存在的EPCs功能障碍的分子机制尚未完全研究透彻，但在高血压大鼠模型及高血压患者中观察到的氧化应激增强可能影响了EPCs的存活和功能。Imanishi等[15]研究证实血管紧张素Ⅱ通过诱导氧化应激加速EPCs的老化。培养的EPCs对血管紧张素Ⅱ的反应为NADPH氧化酶的成分gp91 phox增加。NADPH氧化酶的增多增加了细胞内的氧化应激并且导致EPCs的衰老显著加速，这可能与端粒酶的失活有关。与对照组相比，血管紧张素Ⅱ明显增加EPCs老化的速度，并且导致EPCs增殖受损。血管紧张素Ⅱ介导的EPCs老化可以明显地被缬沙坦或超氧化物歧化酶所抑制。Marumo等[16]研究发现，在体外醛固酮可减少EPCs的生成，这种作用呈浓度依赖性，并且可以被醛固酮拮抗剂螺内酯所减轻。醛固酮减少VEGFR-2 mRNA的水平，相应的VEGFR-2介导的AKt磷酸化也将减少。Marumo认为醛固酮导致EPCs生成减少的机制可能是抑制VEGFR-2及随后AKt信号系统的表达。血管紧张素Ⅱ及醛固酮在高血压病的发生、发展中起重要作用，它们对EPCs的影响可能是其作用机制之一。
2.6 EPCs与血糖代谢
相当多的高血压患者同时存在伴随超重导致的糖代谢紊乱。2型及1型糖尿病都可以导致EPCs数量明显减少。糖尿病患者外周血的EPCs经培养后显示出黏附、增殖、融合、释放促血管生成因子的旁分泌等功能受损，这可能是糖尿病血管并发症的发病机制之一，而增加一氧化氮则可以改善EPCs的迁移及变形能力[17]。在这些研究中，EPCs的分化和功能与糖化血红蛋白呈负相关，显示与血糖紊乱的程度有关。还有研究[18]证实，高血糖可使新生儿EPCs凋亡与老化增加，增殖减少。
3 抗高血压药物与EPCs功能障碍
3.1 EPCs与血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）、血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂（ARB）
综上所述，抑制血管紧张素Ⅱ的活性将对EPCs的数量和功能产生有利的影响。另外，ACEI还可改善EPCs的黏附、增殖、迁移和融合等功能。新近研究报道ARB奥美沙坦能够增加2型糖尿病患者循环CD34+定向造血干细胞和EPCs的数量[19]。替米沙坦能够促进高血压患者EPCs的动员，引起循环EPCs数量增多。ARB和ACEI都被证实可以改善内皮功能和微血管数量的减少。可以推测，改善EPCs的功能可能是产生以上益处的机制之一。
3.2 EPCs与钙拮抗剂
Ralf 等[20]研究发现，钙拮抗剂尼索地平治疗6周能够引起高血压患者EPCs的动员，引起循环EPCs数目增多。该研究提示抗高血压药物引起的EPCs动员可能是抗高血压药物独立于降压效应以外减少血管损伤的修复机制。
4 结 语
总之，EPCs功能障碍可能导致内皮修复和血管再生受损，加速高血压患者靶器官损伤之前的微血管异常和动脉硬化。可以推测EPCs数量增加和功能改善不但可以阻止高血压早期的微血管异常，还可延缓动脉弹性下降及靶器官损伤。前述的几类抗高血压药物对EPCs数量和功能的改善作用将有助于进一步解释它们的靶器官保护作用机制。
关于EPCs在高血压的病理过程中作用的研究才刚开始，高血压与EPCs关系的研究还需要进一步深入，随着两者之间的关系逐渐明朗，将可能为高血压的防治提供一条新的途径。
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血细胞篇4
中图分类号：R551 文献标识码：B 文献编号：1671-4954(2010)08-604-01
1 临床资料
患者，男，73岁。因发热、咳嗽1周，鼻出血1d于2004年8月13日入院。既往体健。查体：T 38.6℃，P 100次／min，R 20次／min，BP100／70mmHg(1mm Hg=0.133kPa)。神清，咽充血，口腔黏膜多处淤斑，双侧扁桃腺I度肿大，双肺呼吸音粗，双肺底可闻及散在湿口罗音，心界无扩大，心率100次Pmin、律齐，s1低钝，各瓣膜区未闻及病理性杂音，腹平软，无压痛，无反跳痛，无肌卫，肝脏、脾脏未触及，肠鸣音存在，双下肢无水肿，全身皮肤散在大片状瘀斑，双下肢皮肤散在多处出血点。入院后检查：血WBC5.11×109／L，RBC 3.8×1012／L，Hb108g／L，PLT1.7×109／L，L0.04、M 0.27。ALT67U／L，AST54.04U／L，GGT161U／L，TBIL54.5Fmol／L，DBIL38.83μmol／L，TP44.0g／L，ALB13.8g／L，APG1.2，BUN 25.97mmol／L，Cr 54.0μmol／L，UA 506μmol／L，GLU17.14mmol／L，FMN 2.21mmol／L，TG5.65mmol／L，FCH 3.0mmol／L，HDL 0.13mmol／L，LDL 1.3mmol／L。心电示窦性心动过速。
X线胸片示双下肺肺炎。骨髓穿刺活检示：(1)中性粒细胞中毒性改变，巨核细胞退化改变，血小板减少；(2)噬血细胞综合征(hemophagocytic syndrome HPS)。立即补液、加强抗炎：头孢吡肟钠2.0g静脉滴注，每日2次；隔日输注血小板2单位，5次共10单位；地塞米松10mgPd静脉滴注，持续1周后逐渐减量，同时每日复查血小板，1周时PLT升至56.5×109／L，MPV11.0ft，PCT0.062，PDW 18.35，患者全身瘀斑逐渐消失，咳嗽、咯痰减轻，体温正常。2周后再次复查x线胸片示：肺部炎性反应消失。复查血常规示：PLT 80×109／L，MPV11.64ft，PCT0.16，PDW0.016。出院后给泼尼松5mg口服，1次Pd，维持1个月，多次随访均正常。
2 讨论
HPS是一组细胞病，是由于骨髓或者淋巴组织中的巨噬细胞受感染或者肿瘤刺激后，吞噬各种血细胞的一组临床症候群。该病起病急，病情凶险，预后差，病死率高达50％。临床分原发性和继发性，原发性多为各种细菌、病毒感染所致；而继发性常见于感染、恶性肿瘤、红斑狼疮等免疫结缔组织性疾病。
血细胞篇5
【摘要】
目的: 在体外实验中， 探讨血小板和红细胞对T细胞亚群的调控作用。 方法: 流式细胞术测定血小板CD59、 红细胞CD59、 T细胞CD3+CD4+、 CD3+CD8+的表达水平。按不同的实验条件进行分组， 全血细胞组、 有PL无红细胞(RBC)组、 无血小板(PL)组、 无RBC无PL组。同时观测各组抗原刺激前后T细胞变化。结果: 各组T细胞CD3+CD4+、 CD3+CD4+/CD3+比较: 全血细胞组>有PL无RBC组， 抗原刺激前后（P无RBC无PL组刺激前(P>0.05)刺激后（P
【关键词】 血小板 红细胞 CD4+T细胞 CD8+T细胞 CD59
机体免疫应答是一个非常复杂的过程， 需要淋巴细胞和许多免疫细胞共同协调作用来完成。以往研究表明， 由于免疫系统的调节机制复杂， 细胞、 细胞因子微环境等多种因素影响着免疫应答的程度。血液系统如何维持一种免疫平衡状态仍未被充分认识。由于特发性血小板减少性紫癜（idiopathic thrombocytopenia purpura， ITP）、 系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus， SLE）等自身免疫病的免疫失衡状态不同， 临床表现变化多样， 临床治疗也只能局限于治标不治本的方法。认清免疫系统的平衡调节过程具有重要的临床意义和应用价值。本实验初步探讨了正常人外周血中血小板（platelet， PL）和红细胞(red blood cell， RBC)调控T淋巴细胞亚群相互协调的关系。
1 材料和方法
1.1 材料 健康成人(7名， 男性， 年龄35～45岁)ACD抗凝新鲜全血由中国人民解放军上海血站提供。红细胞裂解液（10倍）、 抗CD59单克隆抗体（mAb）、 抗CD3/CD4多克隆抗体、 抗CD3/CD8多克隆抗体均购于美国BD公司。S180（5×109/L）为长海医院输血科免疫实验室提供。
1.2 方法
1.2.1 红细胞和白细胞混合液(SRBC+WBC)制备 取10 mL ACD抗凝全血， 1500 r/min离心5 min， 血浆留取另一试管备用; 沉淀细胞用生理盐水（NS）洗2次（2500 r/min离心5 min）， 用NS恢复原体积， 混匀为SRBC+WBC。
1.2.2 白细胞悬液制备 取适量制备的SRBC+WBC， 每0.8 mL全血细胞加4 mL蒸馏水在冰水中（约-4℃）轻轻混匀作用约1 min（
1.2.3 富血小板血浆（PRP）制备 吸取上层血浆， 混匀即为PRP。显微镜下观察富血小板。
1.2.4 纯血浆的制备 取适量PRP， 3500 r/min离心 15 min， 上清即为纯血浆; 显微镜下观察无PL、 无RBC。
1.2.5 免疫反应体系设计 分为4种不同的实验条件进行试验研究。全血细胞组: 0.3 mL PRP+0.2 mL NS+0.2 mL SRBC+WBC; 有PL无RBC组: 0.3 mL PRP+0.2 mL NS+0.2mL WBC; 无PL组: 0.3 mL纯血浆+0.2 mL NS+0.2 mL SRBC+WBC; 无RBC和PL组: 0.3 mL纯血浆+0.2 mL NS+0.2 mL WBC。同时以上各组S180刺激作为对照。以上试管加样后37℃孵育作用1 h， 每20 min混匀1次。孵育后以1500 r/min离心5 min， 分离上清和沉淀细胞用于流式测定。
1.2.6 各组监测指标分析 应用FCM测定各组PLCD59、 RBCCD59和T淋巴细胞CD3+CD4+、 CD3+CD8+的表达。采用直接免疫荧光法， 抗CD59 mAb， 抗CD3/CD4多克隆抗体、 抗CD3/CD8多克隆抗体分别为CD59PE标记、 CD3FITC标记、 CD4PE标记、 CD8PE标记， 结果用Cell Quest软件分析。
1.2.7 统计学处理 组间比较采用LSDt检验， 变量间关系研究采用相关分析， 应用SPSS11.5软件进行统计处理。
2 结果
2.1 各组T淋巴细胞表达CD3+CD4+、 CD3+CD8+的变化结果 各组T细胞CD3+CD4+比较: 有无S180刺激， 全血细胞和无PL组比较无统计学意义（P>0.05）。全血细胞组>有PL无RBC组S180刺激前后（P无RBC无PL组刺激前(P>0.05)、刺激后（P
表1 各组T淋巴细胞CD3+CD4+、 CD3+CD8+表达 （略）
aP
2.2 各组CD3+CD4+/ CD3+、 CD3+CD8+/CD3+的变化结果 各组CD3+CD4+/CD3+比较: 有无S180刺激， 全血细胞组>有PL无RBC 组（P无RBC无PL组刺激前(P>0.05)刺激后(P
表2 各组CD3+CD4+/CD3+、 CD3+CD8+/ CD3+的结果（略）
aP
2.3 无刺激各组PLCD59、 RBCCD59与CD3+CD4+、 CD3+CD8+、 CD3+CD4+/CD3+、 CD3+CD8/CD3+的相关性结果全血细胞组PLCD59
表3 无刺激各组PLCD59、 RBCCD59与CD4+、 CD8+、 CD4+/CD3+、 CD8+/CD3+的相关性结果（略）
3 讨论
T淋巴细胞是细胞免疫系统的主要成分， T淋巴细胞亚群之间的平衡与否， 直接影响着机体的免疫功能以及与感染性疾病的状态密切相关。T细胞亚群的平衡调节过程是个动态的过程，并受内环境中细胞传递的各种的不同信号所调控［1］。红细胞、血小板可调节T细胞活性[2， 3]。本实验结果与上述结论是一致的， 并证明血小板、 红细胞对CD3+CD8+的变化无影响。本实验结果还显示， S180刺激前红细胞可正调控CD3+CD4+/CD3+， 负调控CD3+CD8+/CD3+; 血小板不能引起各指标变化。我们比较S180刺激后各组CD3+CD4+/CD3+: 全血细胞组（53.78%±10.62%）>无RBC组（36.25%±9.62%）， 无RBC组>无RBC无PL组（32.34%±9.46%）， 全血细胞组（53.78%±10.62%）与无PL组（53.02%±8.94%）比较均无统计学意义; 说明红细胞可正向调节CD3+CD4+/ CD3+; 无红细胞存在时， 活化血小板可正向调节CD3+CD4+/CD3+; 红细胞正调控能力更强。比较S180刺激后各组CD3+CD8+/CD3+: 全血组（40.73%±5.05%）
S180刺激前后， 全血细胞组与无PL组比较各指标均无统计学意义， 是否在全血免疫系统中血小板不发挥调控T细胞的作用？ 血小板和红细胞之间存在怎样的相互影响关系？ 由于血小板的激活反应除多与补体的活化程度有关外， 还与血小板膜表面的补体调节蛋白有关。在各种细胞膜表面的补体调节蛋白中CD59所起的作用最为重要[4] 。此外， CD59能介导细胞活化信息， CD59可与T细胞CD2相作用参与T细胞活化。我们通过比较RBCCD59、 PLCD59与T细胞表面免疫分子之间的变化来辅助判断各组中血小板、 红细胞的调控能力的变化。未受S180刺激时全血细胞组中RBCCD59与无PL组RBCCD59无统计学意义， 全血细胞组中RBCCD59与CD3+CD4+呈负相关， 而在无PL组中则无相关性， 说明全血细胞组（血小板存在时）， 红细胞调控CD3+CD4+细胞的能力发生变化。在维持机体免疫平衡过程中， RBCCD59并未发生调控作用。1981年Siegel等提出红细胞可通过识别C3b受体黏附到抗原抗体补体复合物上。 我们比较PLCD59的变化发现， 全血细胞组PLCD59无RBC组>无RBC无PL组; 各组CD3+CD8+/CD3+: 全血细胞组（无PL组）
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血细胞篇6
异基因造血干细胞移植后，供者细胞可产生强大而持久的免疫治疗功效，其中异源反应性NK细胞活性是T细胞异源反应活性以外的，具有显著抗肿瘤/白血病活性的自然免疫现象，并逐渐受到人们的重视。已证实，NK细胞通过其受体与靶细胞MHC分子特异性的识别机制参与移植物抗白血病（GVL）作用并影响移植物抗宿主病（GVHD）的发生。异基因造血干细胞移植后异源反应性NK细胞输注已从动物实验逐渐应用于临床。本文就NK细胞异源反应性及其在异基因造血干细胞移植中的作用进行综述。
【关键词】 异基因造血干细胞移植；NK细胞；移植物抗白血病；移植物抗宿主病
Role of NK Cells in Allogeneic Hematopoietic Stem Cell Transplantation ——Review
Abstract
After allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (allo-HSCT)，the donor cells present a profound immunization therapy efficiency. Among these effector cells，allo-reactivity natural killer (NK) cell activation are concerned with the graft-versus-host disease (GVHD) and graft-versus-leukemia (GVL) effect . As known，GVHD is primarily a T-cell-mediated event but not initiated by NK cells. NK cells may significantly enhance GVL immune response by using an integration of activating and inhibitory receptors. Allo-reactivitive NK cell infusion after allo-HSCT already transits from experiments to clinic. In this review the background on NK cells，and their clinical roles in Allo-HSCT were summarized.
Key words
allogeneic hematopoietic stem cell transplantation; natural killer cell; graft-versus-leukemia; graft-versus-host disease
异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)是治疗多种恶性病及一些非恶性病的有效方法，尤其在治疗急性白血病方面，可使50%患者长期无病生存。研究发现，异基因造血干细胞移植后，供者免疫系统在受者体内的重建可产生移植物抗白血病（graft versus leukemia，GVL）作用，但也产生危及患者生命的移植物抗宿主病（graft versus host disease，GVHD）及迟发的免疫功能障碍。随着对NK细胞功能及活化机制的了解，其在allo-HSCT后造血重建及免疫重建中的作用越来越受到重视。许多的动物实验和临床观察均提示allo-HSCT后，供者NK细胞的异源反应活性通过促进植入、阻止T细胞介导的GVHD、攻击宿主白血病细胞发挥GVL效应。上述现象最初发现于单倍不相合移植，而后研究提示在HLA相合有血缘关系及非血缘关系供者移植中均有体现［1，2］。但最近国外也有研究发现，KIR-配体不相合引起的NK细胞异源反应性与移植相关死亡率（transplantation related mortality，TRM）升高及总存活率下降有关［3，4］，故在这方面的研究仍是热点，存在许多争议。本文就NK细胞异源反应性的形成机制、NK细胞在allo-HSCT中的作用等问题的研究新进展综述如下。
NK细胞群
NK细胞及来源
NK细胞是淋巴细胞谱系中不同于T、B淋巴细胞的一类大颗粒淋巴细胞，其代表性表型为CD3-、CD56+、CD16+。它是天然免疫系统的主要效应细胞，无需抗原预先致敏，与靶细胞混合后4小时内即可发挥杀伤作用，表现为速发效应，因此位于机体抵御肿瘤和病毒感染的第一道防线，同时又能通过早期分泌多种细胞因子和趋化因子来调节获得性免疫，故也是连接天然免疫与获得性免疫的桥梁［5，6］，在机体免疫调节、造血调控、抗肿瘤和抗感染等方面发挥着重要的作用。Cooper等［7］根据NK细胞上CD56分子表达密度的不同将NK细胞分为CD56bright和CD56dim两个亚群，在正常人外周血单个核细胞主要参与NK细胞细胞毒作用。NK细胞来源于骨髓CD34+造血干细胞，其发育、成熟需要骨髓微环境包括骨髓基质及其来源的细胞因子。NK细胞与T细胞来自同一祖细胞，这种分化上的亲缘性可能解释了NK细胞活化也受协同刺激信号的影响，及胞内信号传导通路与T细胞极为相似等现象。但与T细胞不同，NK细胞的发育成熟不依赖于胸腺，在骨髓微环境中，IL15与其配体C-kit（KL）和flt-3（FL）的协同作用是NK细胞发育的关键生理调节因素，在其最初发育期，NK祖细胞在早期基质细胞活化生长因子KL、FL作用下发育为NK细胞前体，该前体细胞在IL-15作用下发育成熟为功能性NK细胞。
NK细胞受体及杀伤活性调节
NK细胞功能的发挥主要依赖于其识别靶细胞的受体。它有两种受体：一类是激发NK细胞杀伤作用的杀伤细胞活化受体（killer activatory receptor，KAR），如CD94/NKG2C、NKP-P1、KIR-3Dshort；另一类是抑制NK细胞杀伤作用的杀伤细胞抑制受体（killer inhibitory receptor，KIR），如CD94/NKG2A、KIR-3Dlong。按分子结构，也可将与NK细胞杀伤作用相关的受体分为免疫球蛋白样受体（immunoglobulin-like receptor）和凝集素样受体(lectin-like receptor)。一般认为，NK细胞可同时表达活化和抑制受体，其杀伤功能取决于表面抑制性受体与活化受体所传递信号的综合。抑制性受体KIR的配体为MHC-Ⅰ类分子。由于抑制性受体与其配体结合的亲和力大于活化受体，因此通常以抑制性信号占优势。正常情况下，机体组织细胞表面表达自身MHC-Ⅰ类分子，NK细胞KIR识别自身MHC-Ⅰ类分子，产生杀伤抑制信号，该信号在胞内起主导作用，能阻断杀伤信号的传递，表现为自身组织细胞不被破坏。只有当靶细胞表面MHC-Ⅰ类分子表达降低、丢失或发生变异（如细胞发生恶性转化、病毒感染等）时，NK细胞才能活化并启动杀伤作用，此即NK细胞的丢失自我（missing self）识别模式，即“杀伤自身MHC抗原减少或消失的细胞”［8］。
异基因造血干细胞移植中的NK细胞作用
NK细胞的“有利作用”
在异基因造血干细胞移植中，根据上述“丢失自我机制”，大部分情况下供者NK细胞KIR与受者靶细胞MHC分子的特异性识别表现为KIR-配体不相合性（少数情况下供受者KIR基因可能相合），可激活供者NK细胞，产生异源反应性NK细胞。KIR-配体不相容性与供者NK细胞的异源反应性密切相关。研究证实，此机制已参与移植物的植入、GVL作用及GVHD的发生，并对异基因造血干细胞移植产生有利影响，现分述如下。
NK 细胞与移植物的植入
无论供者、受者NK细胞都对移植物的植入有一定影响。受者方面，尽管在鼠类的研究显示了抗放射性宿主NK细胞在抵抗骨髓植入中的重要性，但临床干细胞移植中宿主NK细胞介导的抗植入现象却很有限。移植前抑制受者免疫的强化处理方案及大量植入的干细胞数量可基本抵消受者NK细胞的抗植入作用。供者方面，越来越多的研究发现，allo-HSCT过程中供者异源反应性NK细胞可主动攻击宿主细胞，辅助供者干细胞成功植入。供者来源的NK细胞（无论是原本存在于移植物中的还是由植入干细胞新分化发育的）都对促进植入有重要作用。当供受者KIR不相合引发供者NK细胞异源反应性时，供者NK 细胞通过识别杀伤受者残留淋巴细胞和造血细胞而发挥强有力的促植入作用［9］。Peters等［10］的临床研究发现，5例高危急性白血病患者经单倍相合异基因造血干细胞移植后，输注纯化的供者NK细胞可增加稳定嵌合体的形成，进一步证实了供者NK细胞可巩固移植物植入。
NK细胞与GVHD
GVHD的发生主要由T细胞介导。这一过程始于供者T细胞伴随造血干细胞进入受者体内与受者抗原相遇。启动GVHD的关键的第一步是抗原呈递细胞（APC）向供者CD8+T细胞呈递主要和次要组织相容性抗原。NK细胞并不引发GVHD。研究发现，在鼠类供受者H-2相合但仍可发挥供者NK细胞异源反应性的干细胞移植实验中，无GVHD出现，而且给受体鼠大剂量输注不相合NK细胞克隆也不引发GVHD［11］。进一步在临床移植观察中，单倍相合的allo-HSCT后的供者NK细胞输注是可耐受的，并不导致GVHD。然而，由于GVHD诱发的细胞表面分子上调并通过NKG2D配体激活NK细胞，使得NK细胞可能促进靶细胞的损伤。另一方面，在HLA不相合干细胞移植中，供者NK细胞可通过表达LFA-1（淋巴细胞功能相关抗原1，是一种黏附分子，介导NK细胞与靶细胞结合）的造血系统特异靶细胞减轻GVHD。供者异源反应性NK细胞可于输注后数小时之内杀灭受者淋巴细胞、骨髓细胞及APC［11］。理论上APC为启动GVHD所需，故输注异源反应性NK细胞应可以减轻GVHD。临床研究数据支持这一假说：在单倍相合和非亲缘供者异基因造血干细胞移植中，存在NK细胞异源反应性的供-受者的GVHD发生率确实低于KIR相合者［12］。
转贴于 NK细胞与GVL
在相同预处理条件下，allo-HSCT治疗恶性血液病的复发率低于自体造血干细胞移植。目前认为，其主要原因是异源反应性NK细胞、T细胞所产生的GVL效应［13］。NK 细胞与T细胞的异体反应性的区别显示，在HLA不相合移植中T细胞是GVHD的主要效应细胞，而NK细胞在移植物植入及GVL中起主要作用。前面已提到造血细胞对NK细胞的攻击很敏感，根据“丢失自我”识别模式，当NK细胞遇到KIR不相容的白血病细胞（靶细胞）时，就会显示出强大的细胞毒作用，而在KIR相合或自体造血干细胞移植中无此作用。将人类异源反应性NK细胞克隆输注到已植入人AML细胞转染性NOD/SCID小鼠D的实验研究发现：未治疗组及给予人无异源反应性NK细胞克隆组小鼠均于3周内死亡；而输入人异源反应性NK细胞组（即使输入的细胞数很少），这些异源反应性NK细胞即可清除白血病细胞并使小鼠存活120天。动物实验及临床移植均证实由KIR不相合产生的异源反应性NK细胞是allo-HSCT预后的有利因素。
NK细胞的“不利影响”
如前所述，异源反应性NK细胞在allo-HSCT中有许多有利作用，目前这方面的理论研究及临床实践很多。但近期一些临床研究也得出一些KIR-配体不相合引起的异源反应性NK细胞对移植的不良影响。一方面，Ruggeri等［14］最近仍报道单倍相合造血干细胞移植后，异源反应活性NK细胞介导的供者抗受者异源性反应可减少AML患者复发危险，改善植入，减轻GVHD；并进一步提出临床应用中可通过供者及受者高分辨HLA基因配型，积极鉴定供者KIR基因，甚至在一些病例中根据供者NK细胞克隆功能评价选择单倍体供者，均可能有助于增强巩固供者抗受者的NK细胞异源反应性。但另一方面，Nguyen等［15］在10例AML经单倍相合造血干细胞移植患者中研究移植后的NK细胞重建，发现尽管10例中8例KIR配体不相合，10例AML患者单倍相合造血干细胞移植后NK细胞恢复中未观察到GVL效应。且干细胞移植后产生的NK细胞表现出不成熟的表型：细胞毒性CD3(-) CD56(dim)亚型很少，表达KIR、NKp30 减少，而表达CD94/NKG2A增加。这些结果揭示，单倍相合干细胞移植后产生的NK 细胞 被阻滞在一种具有特殊表型特点的非成熟阶段，功能不全，对免疫应答及抑制恢复有潜在影响。不成熟的NK细胞，及NKG2A的抑制作用减轻了GVL效应。同时，Malmberg等［3］，Schaffer等［4］在190例非亲缘供者造血干细胞移植中（KIR-配体不相合者167例，相合者23例）的最新研究发现，KIR-配体不相合引起的NK细胞异源反应性与TRM升高及总存活率下降有关。这主要由严重感染引起，考虑由KIR-配体不相合引起的同种异源反应性NK细胞的存在可能潜在地阻碍了机体对移植后早期感染的有效免疫。目前看来，allo-HSCT后的造血重建与免疫重建非常复杂，其中NK细胞作用有待进一步探讨。伴随供者干细胞进入受者体内的成熟NK细胞与由供者干细胞在受者体内逐渐发育分化而来的NK细胞对移植后免疫是否有不同的影响，仍需进一步研究；同时，KIR-配体不相合在移植中的意义有待进一步评价。
临床展望
从临床应用来说，虽然对于异源反应性NK细胞在allo-HSCT中的作用仍存在许多争议，但根据其有利的作用，供者NK细胞输注已从实验动物研究开始逐渐用于临床，目前报道未出现明显不良反应［10］。对临床治疗思路有几方面启示： 首先，移植前进行供受者HLA配型并结合KIR基因鉴定，尽可能为选择更合适的供者提供依据；其次，NK细胞可加速APC从受者骨髓、脾脏等部位的清除，减轻GVHD，因而可无需使用针对T细胞的免疫抑制处理方法，这为降低GVHD发生设计了另类策略［16，17］。再次，联合供者异源反应性NK细胞输注，有望降低异基因造血干细胞预处理强度，更进一步扩大适应症范围，使得高龄及临床状况差的患者也得到治疗机会。
结语
随着对移植免疫学及NK细胞生物学效应产生机制的深入研究，人们对NK细胞在allo-HSCT中的作用逐渐了解。NK细胞受体（NKR）中KIR与配体（MHC-Ⅰ类分子）的不相合是激活NK细胞杀伤作用、在异基因移植中产生异源反应性NK细胞的关键，因此这也成为目前研究的热点。大部分研究结果显示，异源反应性NK细胞有利于异基因造血干细胞植入，可减少GVHD，并发挥GVL作用。但对移植后免疫重建及患者总生存率的影响研究较少，临床病例也缺乏长期观察，故这些方面还有待进一步阐明。在临床治疗中，纯化供者NK细胞的输注已在干细胞移植及恶性实体瘤生物治疗等方面取得了良好效果，并对干细胞移植治疗策略产生了重大影响。如何更好的发挥NK细胞功能，将是allo-HSCT治疗及肿瘤免疫治疗的研究重点。
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血细胞篇7
1 材料与方法
1. 1 材料
花色素( 购自上海惠诚责任有限公司) ; RPMI-1640 培养基( 美国GIBCO 公司) ; 新生牛血清( 杭州四季青生物工程材料有限公司) ; MTT 试剂盒( 武汉博士生物工程有限公司) ; CO2细胞培养恒温箱购于美国Forma Scientific 公司; 倒置相差显微镜( Olympus公司) ; 96 孔培养板( 美国Falcon 公司) ; 流式细胞仪( 美国Becton-Dickinson 公司) ; 自动酶标仪( BIORAD公司550 型) 。K562 细胞为吉林医药学院检验学院细胞室冻存细胞，接种K562 细胞于含10%新生牛血清的RPMI-1640 完全培养基，37 ℃、5% CO2饱和湿度培养箱中培养，取对数生长期细胞用于试验。
1. 2 细胞培养
常规传代培养K562 细胞至对数生长期，将对数生长期细胞分成5 组，以每孔1 105 接种于96 孔板中，24 h 后分别加入花色素，使终浓度分别为25、50、100、200 mg /L，并设置对照组，培养24 h 后于倒置显微镜下观察细胞状态并拍照。
1. 3 瑞氏染色观察
常规传代培养K562 细胞至对数生长期，将对数生长期细胞分成5 组，24 h 后分别加入花色素使终度分别为25、50、100、200 mg /L，并设置对照组，培养24 h后收集各组细胞，离心800 r /min，5 min，弃上清，将细胞沉淀涂布于载玻片上，甲醇固定10 min 后取出，PBS 冲洗，自然晾干，滴加瑞氏染液1 min 后再加入等量的PBS，混匀，静置5 min 后，细流水洗，吸干，镜检观察并拍照。
1. 4 MTT 法检测
取对数生长期K562 细胞制成细胞悬液，浓度为1 105 /mL，接种于96 孔板内，每孔100 L，加入不同浓度的花色素使终浓度分别为25、50、100、200 mg /L，每一浓度均设4 个复孔，并设对照及凋零孔，分别在加药24、48、72 h 后加入MTT 溶液10 L，37 ℃ 继续培养4 h，终止培养，离心1 000 r /min，5 min，弃去孔内培养液，每孔加入100 L Formazan溶解液，振荡10 min，用酶联免疫检测仪在570 nm 波长下测各孔吸光度，按下列公式计算抑制率。
IR% = ( 1-试验组平均A 值/对照组平均A 值) 100%
1. 5 统计学处理
数据以x s 表示，单因素方差分析，组间均数比较采用t 检验，率比较采用2 检验。
2 结果
2. 1 花色素对K562 生长的影响
细胞加药处理后，镜下观察发现花色素对K562细胞的生长有抑制作用，与对照组相比，加药组细胞分散，体积缩小，胞体减小，死亡细胞增多且明显。经数据分析发现，不同浓度的花色素对K562细胞的生长均有抑制作用，呈浓度和时间依赖性。
2. 2 瑞氏染色
收集各组细胞涂片，瑞氏染色光学显微镜观察细胞形态，对照组细胞形态明显改变，胞体大小不一，不规则，胞质浓染，核浆比例减小，趋于分化成熟，可见中晚幼细胞。
2. 3 花色素对K562 细胞的生长抑制率作用MTT 结果证实，花色素能够明显抑制K562 细胞生长，且有浓度依赖关系。随着浓度从25 g /mL 增加到200 g /mL，对细胞生长抑制率也逐渐增加。
3 结论
人红白血病K562 细胞是一株恶性程度较高的人红白血病体外细胞系，但在体外可被多种诱导剂诱导发生凋亡、分化和增殖抑制。因此K562 细胞是临床和基础领域中筛选新的抗肿瘤药物和研究调控胚胎型和胎儿型珠蛋白基因表达的分子机制的常用模型。有研究表明K562 细胞能向红系发展而且K562 细胞的血红蛋白合成是和其细胞不同程度的增殖诱导相联系的，而这种增殖诱导则取决于诱导剂的性质。
用 25 ～ 200 g /mL 的花色素处理人红白血病K562 细胞后，通过镜下观察发现，细胞形态发生明显变化。绘制的生长曲线也显示随着加入物浓度及时间的增长，细胞数逐渐减少。应用MTT 比色法等检测发现花色素在体外可抑制K562 细胞生长，并呈时间-剂量依赖性。
血细胞篇8
关键词：血细胞分析仪；形态观察；红细胞；淋巴细胞
血细胞形态观察在临床上疾病诊断的有效方法，也是血液常规检查的一项主要内容。随着医学的发展，血细胞分析仪被广泛推广使用，血细胞分析仪是高科技的组合，具有检测项目多，出结果快等优点，在很多医院，传统的血细胞形态观察被遗弃，但是，单纯依靠仪器进行检查存在漏诊和误诊的现象[1]，因此，将两者进行联合效果会得到提高。
1 资料和方法
1.1一般资料 随机采集2013年6月～2014年4月来我院进行治疗的1100例患者的外周血进行研究，其中内科患者410例，外科患者240例，儿科患者550例。
1.2抽血方法 抽取所有患者的静脉血1mL，于含有乙二胺四乙酸二甲的试管中混匀，送至检验室进行检验。一方面用血细胞分析仪进行分析；另外，制作血片2张，干燥后染色进行血细胞形态观察。检查的具体过程是在低倍镜或者高倍镜下观察有核细胞；油镜下观察成熟红细胞的形态，包括正常红细胞、疟原虫以及畸形红细胞等，其中各类血细胞的形态都是以《临床血液学与检验》中规定的作为标准[2]。
1.3仪器和试剂 血细胞分析仪是采用迈瑞BC-5800，使用配套的试剂进行检测。显微镜采用的是日本产的CX-31。染色液自行配置。
1.4统计学方法 本研究数据资料应用SPSS 16.0软件进行处理，所有的计量资料均采用均数±标准差表示。统计处理采用χ2和t检验。P
2 结果
2.1红细胞体积的大小，形态学观察和血细胞分析仪测定的结果一致；对幼红细胞，两者结果差异不显著无统计学意义，P>0.05；对疟原虫，血细胞分析仪检测不到（见表1）。
2.2对正常淋巴细胞，两者判断结果一样；血细胞分析仪对异型淋巴细胞，与形态学观察的结果差异不显著无统计学意义，P>0.05；血细胞分析仪对幼稚淋巴细胞无法鉴别（见表2）。
3 讨论
血细胞分析仪由于操作方便，成本低等优点在临床上被广泛应用，但是，由于血细胞分析仪本身的缺陷积极血细胞形态的多样和复杂性，使得仪器对于血细胞的形态等不能准确的反应，只能对数量等进行表征[3]。而传统的血细胞形态观察对形态和数量等都能准确的反应，在疾病的诊断和治疗中都具有重要的作用。本文对1100例患者的血液进行血细胞分析仪和血细胞形态观察，结果显示，对于成熟红细胞体积的大小，血细胞分析仪和血细胞形态观察的结果一致；对于幼红细胞，两者结果差异不显著无统计学意义，P>0.05；对疟原虫，血液分析仪检测不到。对于淋巴细胞形态的检测，血细胞分析仪检测不准确，对正常淋巴细胞，两者判断结果一样；对异型淋巴细胞，与形态学观察的结果差异不显著无统计学意义，P>0.05；血细胞分析仪对幼稚淋巴细胞无法鉴别。这是由于血细胞分析仪进行检测的时候只是依据几个物理性质，对于提供比较准确的结果比较困难。而对于血细胞形态观察[4-5]，容易受到人为因素的影响，在制片、染色等步骤都会影响血细胞的形态。
因此，在临床上应该将血细胞分析仪和血细胞形态观察进行联合，这样有助于提高疾病诊断的准确率，值得临床上进行推广。
参考文献：
[1]刘英华，孙景春.血细胞自动计数复检标准探讨[J].中国实验诊断学，2008，12（4）：541-542.
[2]许文荣，王建中.临床血液学与检验[M].4版，北京：人民卫生出版社，2009：37-63.
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[4]Muriel，Brissard，Odile，et al.Enantiospecific synthesis of delta and lambda[Ru（bpy）（2）ppy]（+）and[Ru（bpy）（2）quo]（+）（bpy=2，2'-bipyridine，ppy=phenylpyridine-H（+），quo=8-hydroxyquinolate）：（1）H and（13）C NMR studies and X-ray structure determination of rac-[Ru（bpy）（2）quo]PF（6）.[J].Inorganic chemistry，2003，42：4.